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共沉淀法最新视觉报道_共沉淀法制备催化剂(2024年12月全程跟踪)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：热点更新日期：2024-12-01

共沉淀法

细胞转染的三种方法，你了解几种？在分子生物学实验中，细胞转染是一个关键步骤。除了之前提到的电穿孔法，还有三种常用的方法：化学介导和生物介导。让我们一起来看看这些方法吧！化学介导法 𐟧ꊧ㷩…𘩒™共沉淀法这种方法是通过形成DNA-磷酸钙复合物沉淀，这些沉淀会黏附在细胞膜表面，然后通过细胞的内吞作用将DNA导入细胞。沉淀颗粒的大小和质量对转染的成功至关重要，同时受pH值、钙离子浓度、DNA浓度、沉淀反应时间和细胞孵育时间等因素影响。这个方法操作简便，花费较低，但转染效率较低，通常只有10-20%，且重复性差。阳离子聚合物法这种方法利用带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团形成复合物，然后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，通过内吞作用进入细胞。相比阳离子脂质体，这种方法具有更高的转染效率，操作简单，适用范围广，重复性好。此外，它在体内的转染效率也较高，细胞毒性较低。脂质体转染这种方法是通过带正电的脂质体与带负电的核酸磷酸基团形成复合物，再与细胞膜上的唾液酸残基结合，可能经过内吞作用被导入细胞。这种方法使用简单，可以携带大片段DNA，适用于各种类型的裸露DNA或RNA，转染效率、稳定性和可重复性都大大提高。不过，转染时需要去除血清，血清的缺失会导致细胞毒性增加，且转染效果随细胞类型变化大。生物介导法 𐟦 逆转录病毒法这种方法通过病毒侵染宿主细胞的机制将外源基因整合到宿主细胞的染色体中，导致基因失活或激活癌基因，构建稳转株。它可以用于难转染的细胞、原代细胞和体内细胞等，但携带的基因不能太大（<8kb），且需要考虑安全因素。腺病毒法腺病毒除了卵细胞外，几乎在所有已知细胞中都不整合到染色体中，因此不会干扰其它宿主基因。它可以通过瞬时表达，包装8kb左右的外源基因，转染较容易，但转染效率不高。无论你是进行实验还是写作文章，这些方法都能为你提供很好的参考。如果你有任何疑问或需求，欢迎随时联系我们哦！

RIP技术：解析RNA与蛋白的神秘结合 𐟔 实验原理 RIP技术（RNA Binding Protein Immunoprecipitation，RNA结合蛋白免疫沉淀）是一种研究细胞内RNA与蛋白结合情况的重要方法。其基本原理包括：利用特异性抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中的内源性RNA结合蛋白→通过清洗磁珠来减少非特异性RNA的结合→将RNA结合蛋白及其结合的RNA共沉淀，并进行RNA纯化→最后通过RIP-ChIP、定量PCR和高通量测序来鉴定结合的RNA序列。 𐟓 实验步骤（磁珠法）裂解产物的配制免疫沉淀的磁珠配制 RNA结合蛋白-RNA复合物免疫共沉淀(RIP) RNA的纯化 Input RNA的质量评估（可选）免疫沉淀RNA的分析 𐟓š 具体步骤参考具体实验步骤请参考Milipore RIP试剂盒说明书。

PVC薄膜环保增塑剂，安全性能大提升！ 𐟓Š 通过环保型PMgLaCe-LDH的引入，PVC薄膜的综合性能和安全性得到了显著提升。对苯二甲酸二辛酯（DOTP）是目前应用最广泛的PVC增塑剂，但其在PVC薄膜中的迁移性和耐挥发性较差，对环境和人体健康构成威胁。因此，开发一种新型、环保、多功能的PVC填料显得尤为重要。 𐟔젩€š过共沉淀法成功合成了不同La/Ce掺杂比例的碱性和中性改性镁基层状双氢氧化物（PMgLaCe-LDH），并将其作为多功能填料加入PVC中。采用共混法制备了PMgLaCe-LDH/PVC复合膜，并对其综合性能进行了深入研究。结果表明，复合膜，尤其是20Mg10Ce-LDH/PVC，表现出卓越的品质。 𐟌Ÿ 这些品质包括：改进的增塑阻燃性光热稳定性疏水性耐低温性耐挥发性和耐迁移性 𐟐��䖯𜌥﹓D大鼠的短期和长期安全性评价、细胞毒性试验和皮内刺激反应试验表明，新型环保无毒化合物20Mg10Ce-LDH的添加可有效抑制PVC降解和释放有毒物质。这项研究提供了一个潜在的解决方案，可以减轻与PVC产品相关的环境和健康风险，使它们更安全、更可持续。

细胞转染实验：从基础到实践细胞转染实验是分子生物学研究中的一项关键技术，它允许我们将外源性的DNA、RNA或蛋白质引入真核或原核细胞，从而深入探讨基因功能、表达调控以及疾病机制。根据转染的方式和所使用的材料，细胞转染可以分为多种方法，包括物理方法（如电穿孔法、显微注射法）、化学方法（如磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法）和生物方法（如病毒介导的转染）。脂质体转染法 𐟌𑊊脂质体转染法利用带正电的脂质体与带负电的核酸分子（DNA/RNA）通过静电作用形成复合物，然后通过脂质体的膜融合或细胞的内吞作用将核酸分子导入细胞。准备细胞：选择合适的细胞系，调整至对数生长期，铺板至适当的细胞密度。准备转染复合物：按照脂质体转染试剂说明书，将DNA/RNA与脂质体按一定比例混合，孵育形成转染复合物。转染：将转染复合物加入到含有细胞的培养基中，轻轻混匀。培养：将细胞置于适宜条件下培养，根据实验需求进行换液或处理。检测：通过荧光观察、Western Blot、qPCR等方法检测转染效率和基因表达情况。电穿孔法 ⚡ 电穿孔法利用短暂的高电压脉冲处理细胞，使细胞膜形成暂时性孔洞，从而使外源DNA/RNA进入细胞。准备细胞：将细胞悬浮在电穿孔缓冲液中，调整至合适的细胞密度。电穿孔：将细胞与DNA/RNA混合后，置于电穿孔杯中，施加一定强度的电脉冲。恢复培养：将处理后的细胞迅速转移至含有培养基的容器中，置于适宜条件下培养。病毒介导的转染 𐟦 病毒介导的转染利用经过基因改造的病毒（如逆转录病毒、腺病毒、慢病毒等）作为载体，将外源基因整合到宿主细胞基因组中或实现瞬时表达。病毒包装：在包装细胞内生产携带外源基因的病毒颗粒。病毒感染：将病毒颗粒加入到目标细胞中，使病毒感染细胞。培养：将感染后的细胞置于适宜条件下培养，使外源基因表达。注意事项 ⚠️ 选择合适的转染方法和条件，确保转染效率和细胞活性。注意实验安全，尤其是使用病毒介导的转染时。转染后应密切监测细胞状态，及时调整培养条件。根据实验需求选择合适的检测方法和时间点。通过这些步骤，我们可以更深入地了解细胞的内部机制，为生物学研究和药物开发提供有力支持。

纳米陶瓷生产配方与工艺大全 𐟓š 纳米陶瓷生产配方与工艺合集纳米氧化铝胶体功能陶瓷涂料生产方法用于净化空气和水的二氧化钛光催化纳米涂层多孔陶瓷材料大颗粒球形亚微米纳米纤维陶瓷复合粉体及其制备方法稀土掺杂铈酸锶纳米晶陶瓷的制备方法具有微波吸收功能的碳纳米管陶瓷复合材料及制备方法纳米陶瓷弹簧生产方法以纳米材料制作高韧性陶瓷部件的超微粉碎装置纳米悬浮液形式的陶瓷着色剂纳米硅铅导电陶瓷材料及制作方法用于硬组织修复的生物活性纳米氧化钛陶瓷及其制备方法激光熔覆纳米陶瓷涂层抗裂的处理方法三维有序、孔径可调的多孔纳米陶瓷管的制备方法纳米金属陶瓷的超声电化学沉积方法纳米金属陶瓷灯及其电极制备钇铝石榴石纳米粉及透明陶瓷的碳酸氢铵共沉淀法覆有纳米陶瓷过滤膜的多孔陶瓷过滤板及其制造方法纳米复合陶瓷电磁线及其制备方法基于基体恒温控制的纳米陶瓷涂层加工方法及恒温控制系统纳米陶瓷微米金属复合粉体的机械制备方法纳米增强催化剂陶瓷载体的制造方法制备纳米-微米复相陶瓷涂层的方法耐熔融金属浸蚀用纳米复合金属陶瓷粉体及其制造方法块状不裂透明纳米陶瓷的制备方法纳米Ge粒子弥散陶瓷基体光致发光材料及其制备方法纳米陶瓷防水耐候高机械强度保护层涂料纳米复合碳化硅陶瓷及其制备方法高温热障涂层用纳米稀土锆酸盐陶瓷粉体材料及制备方法纳米SiBON陶瓷粉体的制备方法电解铝用纳米金属陶瓷惰性阳极材料及其制备方法新型纳米复相陶瓷粉体的制备方法高效纳米抗菌功能陶瓷的制备方法和应用耐熔融金属浸蚀用纳米复合金属陶瓷粉体及其制造方法

【复合光催化剂可高效去除水中残留抗生素】记者10月25日从西安建筑科技大学获悉，该校交叉创新研究院教授石辉团队以活化生物炭为载体，通过水热反应联合化学共沉淀法，研发出新型复合光催化剂。该催化剂对水中高浓度诺氟沙星表现出高效去除效果。相关论文发表于《自然》旗下期刊《npj 清洁水》。（科技日报）

「x-mol微资讯」【河北大学王刘彬特聘教授与南开大学李福军教授团队：水系锌离子电池双氧化还原活性普鲁士蓝类似物亚铁氰化银正极材料研究】网页链接近日，河北大学王刘彬特聘教授与南开大学李福军教授团队通过将Ag引入到亚铁氰基配合物中，利用共沉淀法在室温下合成了一种新型无空位/结晶水的银基普鲁士蓝（K0.95Ag3.05Fe(CN)6，AgHCF-3）正极材料。

IP、CO-IP和Pull-down实验有啥区别？原创玉珠隆生物 Uselong Biotech 2024年10月02日 07:25 北京 10人听过免疫沉淀技术是一种基于抗体和抗原特异性相互作用的经典方法，广泛应用于蛋白质相互作用、蛋白质与遗传物质相互作用的研究。它能有效确定细胞内两种蛋白质的生理性相互作用，并用于抗原检测和蛋白质纯化。衍生技术包括CO-IP（共沉淀法）、ChIP（染色质免疫沉淀技术）、RIP（RNA免疫沉淀技术）。免疫沉淀（Immunoprecipitation，简称IP）利用特定抗体与目标蛋白结合，从混合物中沉淀出目标蛋白，实现蛋白的纯化与鉴定。其作用为富集和检测特定蛋白，提供高纯度样本以供后续分析。免疫沉淀技术不仅可以用于研究蛋白质的存在、表达量、稳定性和翻译后修饰，还可以用于研究蛋白质-蛋白质相互作用，揭示蛋白质复合物的组成，是蛋白质组学研究中的重要工具。 IP技术的基本流程包括以下几个步骤：①细胞裂解：首先需要收集细胞并裂解，以便释放细胞内的蛋白质。②抗体结合：将偶联特定的抗体填料或磁珠加入到裂解物中，抗体会与其目标蛋白特异性结合。③沉淀：将抗体-蛋白复合物通过离心或使用磁吸方式沉淀下来。④洗涤：去除未结合的蛋白质和其他杂质。⑤洗脱：使用适当的缓冲液将沉淀的抗体-蛋白复合物洗脱，以便进行后续分析，如Western blot或质谱分析。免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，简称Co-IP）技术是一种研究蛋白质相互作用的有效方法。它通过使用针对特定蛋白质的抗体来沉淀该蛋白质及其相互作用的复合物，进而研究与已知蛋白质相互作用的其他蛋白质。Co-IP技术原理是基于抗体与抗原的特异性结合，利用特定抗体沉淀目标蛋白，同时将与目标蛋白相互作用的其他蛋白质一同沉淀下来。Co-IP的主要作用是检测两种蛋白质在体内是否相互作用，以及揭示它们之间的相互关系。通过Co-IP技术，可以识别和鉴定与目标蛋白相互作用的蛋白质，从而构建蛋白质相互作用网络。鉴定蛋白质复合物：Co-IP技术有助于发现目标蛋白的结合伙伴，对于了解蛋白质的功能、调控机制以及信号传导途径至关重要。 Co-IP技术的基本流程包括以下几个步骤：①样品准备：收集细胞或组织样本，用适当的缓冲液洗涤样本以去除杂质。②细胞裂解：使用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液在冰上裂解细胞，裂解应在低温条件下进行以防止蛋白质降解。③裂解液澄清：将裂解液进行离心（通常为4Ⰳ，高速离心），以去除不溶性颗粒和细胞碎片，取上清液进行后续实验。④抗体预结合：将特异性抗体与蛋白A/G磁性珠或其他固相支持物预结合，预结合通常在旋转条件下4Ⰳ孵育30分钟到1小时。⑤免疫沉淀：将预结合的抗体-磁性珠复合物加入到裂解液中，在4Ⰳ下旋转孵育1-2小时或过夜，以允许抗体与目标蛋白充分结合。⑥捕获复合物：使用磁力架收集磁性珠或通过离心收集非磁性珠，去除未结合的蛋白质的上清液。⑦洗涤：用裂解缓冲液重复洗涤磁性珠几次，以去除非特异性结合的蛋白质，每次洗涤后，再次使用磁力架或离心收集珠子。⑧洗脱：使用洗脱缓冲液（如SDS样本缓冲液）洗脱目标蛋白和相互作用的蛋白质，洗脱通常在室温下进行，并可能需要加热。洗脱完成后使用WB或质谱等其它方法对洗脱的蛋白进行检测即可。 Co-IP的优点：①体内天然构象：CO-IP分析中，诱饵蛋白和猎物蛋白保持它们在体内的天然状态，有助于更真实地模拟它们之间的相互作用。②体内相互作用：诱饵蛋白与猎物蛋白的相互作用在体内发生，受外界条件影响较小，有利于减少实验中的干扰因素。③快速高效：如果已有特异性抗体，CO-IP实验过程可以快速进行，无需进行目标蛋白的克隆和异源表达。Co-IP的缺点：①低亲和力互动：对于亲和力较低或短暂性的蛋白质相互作用，CO-IP可能无法有效检测。②直接或间接互动：CO-IP结果可能无法明确区分蛋白质间的相互作用是直接的还是通过其他蛋白质间接发生的。③抗体依赖性：CO-IP方法需要特定的抗体支持，这限制了其在没有合适抗体的情况下的应用。融合蛋白沉降试验(Pull-down)是一种用于检测蛋白质相互作用的体外实验技术，它不仅可以验证已知蛋白质之间的相互作用，还可以用来筛选可能与已知蛋白质相互作用的新蛋白质。 Pull-down技术利用带有特定标签（例如GST标签、His标签或生物素标签）的融合蛋白作为“诱饵”，将这些融合蛋白固定在亲和树脂上。当目标蛋白或细胞裂解液通过这个系统时，任何能与诱饵蛋白结合的“猎物”蛋白将被吸附和沉淀；通过洗脱步骤，可以将捕获的蛋白质复合物从树脂上洗脱下来；最后，使用蛋白印迹（Western blot）或质谱等技术分析洗脱的蛋白质，以验证预测的蛋白质相互作用或发现新的相互作用。Pull-down实验用于检测两种蛋白质在体外条件下是否能够直接结合。其主要应用包括：①验证已知蛋白质相互作用：通过使用一个已知蛋白质作为诱饵，可以验证它与另一个蛋白质的潜在相互作用。筛选新的蛋白质相互作用：当与细胞裂解液或蛋白质混合物孵育时，Pull-down可以用来发现与诱饵蛋白相互作用的未知蛋白质。 Pull-down技术的基本流程包括以下几个步骤：①准备诱饵蛋白：通过重组DNA技术将目标蛋白与亲和标签（如GST、His等）融合表达，诱导表达并收集含有融合蛋白的细胞，裂解细胞并纯化融合蛋白。②固定诱饵蛋白：将纯化的融合蛋白与亲和树脂（如谷胱甘肽珠子对于GST标签，或金属离子珠子对于His标签）孵育，使融合蛋白固定在树脂上。③准备细胞裂解液：收集将要用于筛选的细胞或组织，裂解细胞或组织，制备细胞裂解液，并离心以清除不溶性颗粒。④孵育裂解液：将固定有诱饵蛋白的树脂与细胞裂解液混合孵育，允许足够的时间让任何可能的相互作用发生。⑤洗涤：孵育后，通过离心收集树脂，并用适当的缓冲液洗涤几次，以去除未结合的蛋白质和杂质。⑥洗脱：使用特定的洗脱缓冲液或条件（如改变pH或添加竞争性配体）从树脂上洗脱结合的蛋白质复合物。⑦分析：将洗脱的蛋白质复合物进行Western blot分析或质谱分析以鉴定相互作用的蛋白质。 Pull-down优点：①低丰度蛋白复合物纯化：Pull-down技术能有效纯化低丰度蛋白质复合物，这对于分析和研究特定蛋白质相互作用至关重要。②体外研究应用广泛：该技术被广泛用于体外转录或翻译系统的研究，为研究者提供了一个有效的研究工具。 Pull-down缺点：①标签影响：引入的蛋白质标签可能会影响与内源性复合物的竞争，可能导致对实验结果的误解。②生理相关性：Pull-down技术虽然能检测蛋白质间的相互作用，但这些相互作用可能并不代表它们在生理条件下真的会在体内相遇和结合。蛋白纯化技术交流，请添加我们的微信：抗体63 蛋白质33 磁珠96 蛋白纯化167 抗体 ⷠ目录上一篇抗体偶联药物(ADC)简介及开发关键点下一篇抗体药物开发全流程梳理-简单易懂个人观点，仅供参考阅读 9603

免疫共沉淀（Co-IP）实验全攻略免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是一种经典的蛋白质相互作用研究方法，基于抗体与抗原的特异性结合。它通过在非变性条件下裂解细胞，保留细胞内蛋白质间的相互作用，从而确定两种蛋白质是否在体内结合。以下是详细的实验步骤和注意事项：实验材料准备抗体：用于免疫沉淀目标蛋白质的抗体。蛋白质X：已知与目标蛋白质Y相互作用的蛋白质。 Protein A琼脂糖珠：用于吸附抗原。细胞裂解液：用于裂解细胞。操作要点细胞裂解：在非变性条件下裂解细胞，保留蛋白质间的相互作用。免疫沉淀：用目标蛋白质X的抗体与Protein A琼脂糖珠结合，吸附与X结合的蛋白质Y。洗脱与检测：用温和的洗脱液洗脱吸附的蛋白质，进行Western blot等检测方法。注意事项抗体选择：选择特异性好的抗体，避免非特异性结合。裂解条件：保持细胞裂解液的非变性条件，避免蛋白质变性。洗脱条件：选择温和的洗脱液，避免蛋白质损伤。实验结果分析：通过Western blot等检测方法，分析目标蛋白质间的相互作用。通过以上步骤，可以确定两种目标蛋白质是否在体内结合，或者发现新的相互作用伙伴。希望这篇攻略能帮助你顺利完成免疫共沉淀实验！

免疫共沉淀（Co-IP）实验全攻略 𐟔젥…疫共沉淀（Co-IP）简介：免疫共沉淀是一种利用抗体与抗原之间的特异性免疫反应来研究蛋白质间相互作用的方法。 𐟔 基本原理：在细胞裂解液中加入抗原特异性抗体，通过免疫沉淀反应形成免疫复合物。经过纯化、洗脱后，可以通过SDS-PAGE电泳、Western blot或质谱鉴定出与抗原相互作用的蛋白质。 𐟌ˆ 优点：相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态。蛋白的相互作用在自然状态下进行，避免人为影响。可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。 𐟚렧𜺧‚𙯼š 可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用。两种蛋白质的结合可能不是直接结合，可能有第三者起桥梁作用。必须在实验前预测目的蛋白，选择检测抗体，若预测不正确，实验可能无结果。 𐟎›„：研究一种已知蛋白质与已知或未知蛋白质间的相互作用。 𐟛 实验步骤：用RIPA裂解缓冲液裂解细胞。用PBS配制50%的Protein A/G-agarose工作液。加入Protein A/G agarose工作液，4℃摇动10分钟去除非特异性蛋白。 4℃，14000g离心15分钟，去除Protein A/G-agarose微球。使用BCA法或其他方法测定总蛋白浓度。加入一抗，4℃过夜。 14000g离心收集沉淀，用预冷洗涤缓冲液洗涤3遍。收集上清，进行SDS-PAGE、Western blot或质谱分析。 𐟓š 总结： Co-IP是研究蛋白质相互作用的经典方法，虽然存在一些局限性，但通过精心设计和操作，可以获得可靠的实验结果。

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作者：一诺生物来源：浏览次数： 1176 日期： 2022-11-03
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