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分子杂交最新视觉报道_分子杂交技术(2024年12月全程跟踪)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：热点更新日期：2024-12-01

分子杂交

梨S基因芯片的试制及分子杂交条件的优化

引物纯化哪家强？比拼揭晓！引物纯化是分子生物学实验中至关重要的一步，它关系到后续实验的成败。以下是几种常见的引物纯化方法，它们各有千秋，适用于不同的实验需求。 𐟌Ÿ HAP纯化（高亲和性纯化） HAP纯化基于DMT（二甲基三苯甲基）基团对HAP树脂的特异性吸附。在纯化过程中，含有DMT基团的目的DNA能够特异性地吸附到HAP树脂上，而短链DNA则不会被吸附。这种方法能够显著提高引物的纯度，甚至可以达到98%以上，与PAGE、HPLC等传统纯化方法相媲美。 ✅ 特点高纯度：HAP纯化方法能够显著提高引物的纯度，有报道称其纯度可达到80%~90%，甚至在某些情况下可以达到98%以上，与PAGE、HPLC等传统纯化方法相媲美。快速高效：相比其他纯化方法，HAP纯化过程更加快速。例如，用HAP方法纯化的引物一轮只需2小时，可以显著缩短交货时间，提高实验效率。成本效益：HAP纯化方法不仅速度快，而且成本相对较低。这使得它在科研和生产中具有更高的经济效益，有助于节约科研经费和时间。适用范围广：HAP纯化方法适用于多种分子生物学实验，包括DNA测序、基因合成、PCR反应、点突变、分子杂交和基因芯片技术等。特别是对于长度在10-39mer以下的合成oligo DNA制品，HAP纯化方法能够提供高质量的纯化效果。 𐟒砨„𑧛纯化（DSL，C18柱脱盐）脱盐纯化又称为简易反相柱纯化，其原理是利用柱子对DNA的特异性吸附，这种吸附可以被有机溶液洗脱，但不会被水洗脱。因此，该方法能有效地去除引物中的盐分，但并不能有效去除比目的片段短的小片段。 ✅ 特点速度快、成本低：这种方法速度快、成本低，适用于大多数常规分子生物学实验，但对于需要高纯度的应用（如测序、克隆）则不适用。 𐟔„ OPC纯化 OPC（Oligonucleotide Purification Cartridge）纯化是基于DNA保护基（DMTr基）和纯化柱中树脂间的亲合力作用。在合成过程中，DNA片段的5'-端会保留一个DMTr基团，这个基团可以与纯化柱中的树脂特异性结合。通过一系列洗脱步骤，可以去除未结合的杂质和短片段，从而得到高纯度的目的DNA。 ✅ 特点适用于短引物：OPC纯化适用于长度在40mer以下的引物，纯度通常大于95%。这种方法适用于多种实验需求，包括PCR、测序和探针制备等。以上几种纯化方法各有千秋，选择合适的方法可以提高实验效率和质量。希望这些信息对您有所帮助！

荧光原位杂交技术：从基础到应用荧光原位杂交技术（Fluorescence in situ hybridization, FISH）是一种利用荧光信号检测探针的原位杂交技术。它基于核酸分子碱基互补配对的原理，通过标记的核酸分子（探针）与目标核酸分子杂交，再用相应的方法检测探针的存在，从而揭示靶部位目标分子的位置。 𐟓… 历史回顾：最早的原位杂交技术出现在1969年，Gall和Pardue利用H3标记的核糖体RNA与非洲爪蟾的卵母细胞杂交，揭示了核糖体RNA基因的基因扩增现象（Gall & Pardue, 1969）。早期的原位杂交技术使用放射性标记，存在诸多弊端。1985年，Rayburn等首次将生物素（Biotin）标记的重复序列定位到小麦的中期分裂相上（Rayburn & Gill, 1985），开创了非放射性标记的杂交技术。由于非放射性标记的原位杂交技术具有安全、经济、灵敏度高等优点，因而迅速发展起来。 𐟔젧›„： FISH技术主要用于基因定性、定量、整合、表达等方面的研究。 𐟌ˆ 原理： FISH技术的基本原理是基于核酸分子碱基配对的原则，将染色体或细胞核DNA与探针分别变性后，将探针杂交至靶部位，然后使用荧光显微镜检测杂交信号。探针可以直接用荧光物质标记（直接法），也可以使用一些抗原物质标记，然后采用荧光标记的抗体与探针上的标记物结合（间接法）。相对而言，间接法荧光原位杂交相对应用更广。 𐟓 步骤： FISH样本的制备探针的制备探针标记杂交染色体显带荧光显微镜检测结果分析 FISH技术的应用广泛，可以用于基因组层面和表达层面的研究，为生物学和医学研究提供了强有力的工具。

细菌菌种鉴定全攻略：从形态到分子细菌的分类单元主要包括属、种和株三个层次。种（species）是指表型特征高度相似、亲缘关系相近且与同属其他种有明显差异的个体总称。而菌株（strain）则是指不同来源的某一种细菌的纯培养物。细菌的鉴定通常涉及形态特征、生理生化鉴定和分子鉴定等多个方面。其中，分子鉴定包括DNA-DNA杂交（DDH）、G+C含量、16S rRNA比对和ANI（平均核苷酸一致性）等方法。DDH用于评估亲缘关系，G+C值和16S rRNA分别用于评估整体遗传组成和特定基因的保守性。相关阈值如下： G+C差异范围：种间为3%，属间为10%。 ANI：菌株间为99.9%，种间为97%（大于96%时为同一个物种，小于95%时为不同物种）。 Digital DNA–DNA 杂交值：同一菌株为100%，同一亚种为80%~90%，同一种内不同亚种为60%~70%，同属不同种为20%~60%。对于ANI及DNA杂交值，需要基因组数据来进行计算分析，可以通过相关的在线计算工具进行。

荧光原位杂交实验全流程详解 1. 𐟧Š 冰冻切片：厚度控制在5-8um，使用防脱片载玻片。细胞爬片的盖玻片需用多聚赖氨酸处理，以防脱片。 𐟔砥›𚥮š细胞：使用RNA Free的4%多聚甲醛室温固定20-30min，然后用DEPC水充分水洗，自然干燥后-20℃冷冻保存，可保存2周以上。 𐟌€ 制作湿盒：在湿盒内加入5㗓SC（PH:7.5）（35ml）+甲酰胺（35ml）。 𐟌𘠥Ž𛩙䨿‡氧化物：用30%H2O2 1份+9份纯甲醇混合液室温处理10min，然后用DEPC水洗3次，每次1min。 𐟧‚ 消化蛋白：切片置于湿盒内，用0.25%盐酸滴于组织上，常温15min，用DEPC水洗2次，每次1min（盐酸可中和带电荷的碱性蛋白，降低背景）。 𐟌🠨›‹白酶K处理：用蛋白酶K覆盖组织，在分子杂交仪中37℃处理20min。蛋白酶K可以消化和暴露被遮蔽的靶核酸，增加探针的结合效率。 𐟚렧𛈦�›‹白酶K：用0.2%或0.1mol/L甘氨酸洗液洗1min（现用现配），终止蛋白酶K。 𐟒砐BS清洗：用PBS洗两次，每次一分钟。 𐟔„ 固定组织：用4%PFA多聚甲醛固定组织10min。 𐟒砥†次PBS清洗：用PBS洗三次，每次1min。 𐟌€ 乙酰化处理：用acetic anhydride乙酸酐（PH=8.0）室温洗5min，2次（乙酸酐溶液配制：每50ml三乙醇胺水溶液中加126ul乙酸酐，现用现配）。然后用PBS洗5次，每次1min。 𐟌€ 预杂交：用5㗓SC（PH=7.5）洗两次，每次1min。切片放置湿盒内，用预杂交液覆盖组织，65℃预杂交1h。 𐟔젦‚交反应：用100u M的探针母液1:500—1000稀释，FITC-labeled probe覆盖切片，在杂交仪内62-70℃黑暗反应24~72h，反应温度与反应时间视不同的组织与探针而定，建议一般65℃48h。 𐟌€ 洗脱探针：用2㗓SC（PH=7.5），室温洗1次，1min。然后用甲酰胺加4㗓SC（PH=4.5）1:1混合液在60℃或65℃洗三次，每次20min。 𐟒砦œ€后PBS清洗：用PBS洗5次，每次1min，室温。 𐟌ˆ 染核：用DEPC处理水1000倍稀释DAPI，染核5min。 𐟒砥†次PBS清洗：用PBS洗3遍，每遍5min。 𐟔’ 封片观察：滴加防淬灭剂，盖盖玻片，指甲油封片，荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察。

𐟔쥮ž验室必备仪器设备清单𐟓‹ 𐟧꥟𚧡€生物技术实验室必备： 1️⃣ 微型离心机、冰箱、超净工作台、电热鼓风干燥箱 2️⃣ 恒温摇床、恒温水浴、植物培育箱、电子天平 3️⃣ 分子杂交仪、医用型洁净工作台、多功能电子天平 4️⃣ 分光光度计、紫外可见分光光度计 5️⃣ 真空干燥箱、超级恒温水浴、低温浴槽、恒温槽 6️⃣ 光照培养箱、真空浓缩仪、台式冷冻离心机 7️⃣ 高压灭菌锅、电泳仪、基因扩增仪 8️⃣ 精密ph计 𐟔쥾Ÿ物实验室必备： 1️⃣ 超净工作台/生物安全柜 2️⃣ 培养箱：生化培养箱、霉菌培养箱、二氧化碳培养箱 3️⃣ 天平 4️⃣ 微生物均质仪 5️⃣ 菌落计数仪器 6️⃣ 电炉 7️⃣ 高压灭菌锅 8️⃣ 普通显微镜、荧光显微镜等系列 9️⃣ PCR仪器与电泳设备 𐟔Ÿ 纯化设备：滤器，离心管等 1️⃣1️⃣ 摇床 1️⃣2️⃣ 纯水装置 1️⃣3️⃣ 生物显微镜 1️⃣4️⃣ 冷冻干燥机 1️⃣5️⃣ 菌落挑选仪器 1️⃣6️⃣ 分光光度计 1️⃣7️⃣ 恒温干燥箱 1️⃣8️⃣ 恒温水浴锅 1️⃣9️⃣ pH酸度计 2️⃣0️⃣ 离心机 2️⃣1️⃣ 液氮罐 2️⃣2️⃣ 其他耗材：酒精灯等这些仪器设备是实验室研究不可或缺的，确保了实验的准确性和效率。𐟔찟窀

生物制药考研方向 𐟎“考研经验分享：经过一年的努力，我成功考上了长春理工大学生物与医药专业。专业课成绩分别为338生物化学107分和815普通生物学113分。 𐟓š重点章节总结：根据长春理工大学发布的考试大纲和历年真题，我总结出几个重点章节，包括蛋白质、DNA、RNA等。这些章节在考试中经常出现，复习时需重点掌握。 𐟔生化重点章节举例：蛋白质的一级结构、二级结构、三级结构、四级结构及高级结构，尤其是血红蛋白的结构，都是考试的重点。此外，尿素循环、三羧酸循环以及糖酵解等与脂肪酸和糖类有关的步骤也是考察的重点。 𐟧짔Ÿ化实验：生化实验在考试中占有重要地位，例如核酸分子杂交、核酸电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。这些实验必须熟练掌握。 𐟓š生化资料分享：我有338生物化学全套资料，包括真题、模拟题、期末考试题和必备实验题等，所有资料均包含完整答案。好好背这些资料，一定能取得好成绩。 𐟓后续更新：后续还会继续分享更多复习经验和重点章节的详细内容，希望能对大家有所帮助。

原位分子杂交图像中银粒分割方法之探

分子杂交仪计量特性的校准方法

𐟧줸�槔Ÿ物实验室必备设备𐟔슰ŸŒ𑥟𚧡€生物技术实验室必备： 1️⃣ 微型离心机、冰箱、超净工作台、电热鼓风干燥箱，确保实验环境与条件稳定。 2️⃣ 恒温摇床、恒温水浴、植物培育箱，助力生物实验顺利进行。 3️⃣ 分子杂交仪、医用型洁净工作台，保障实验操作的精准与安全。 𐟔쥾Ÿ物实验室核心设备： 1️⃣ 超净工作台/生物安全柜，为无菌培养操作提供保障。 2️⃣ 培养箱系列，包括生化培养箱、霉菌培养箱和二氧化碳培养箱，满足不同微生物的培养需求。 3️⃣ 天平，精确测量实验材料。 4️⃣ 微生物均质仪，从固体样本中高效提取细菌。 5️⃣ 菌落计数仪器，准确统计菌落数量。 6️⃣ 电炉，快速加热溶液，确保微生物固体培养基的均匀融化。 7️⃣ 高压灭菌锅，确保耗材的清洁与安全。 8️⃣ 显微镜系列，包括普通显微镜、荧光显微镜等，观察微生物的形态与结构。 9️⃣ PCR仪器与电泳设备，分离或检测DNA/RNA，为生物实验提供关键数据支持。 𐟔Ÿ 纯化设备与摇床，确保微生物的纯化与分离效果。 𐟒᤻夸Š设备清单仅供参考，具体设备配置可根据实验室需求进行调整。中学生物实验室的建设与运营需注重设备选型与维护，确保实验数据的准确性与可靠性。

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