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BrdU最新视觉报道_brdu染色原理(2024年11月全程跟踪)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：热点更新日期：2024-11-28

BrdU

在一项研究中，来自美国和瑞典的研究者以癌症晚期患者为被试，对这些患者采用溴脱氧尿苷(Bromodeoxyuridine, BrdU)来标记和识别神经元中合成的胸苷。在患者去世后，科学家对他进行了大脑组织学检查，在尾状核脑室下区以及海马齿状回的颗粒细胞层中发现了被BrdU标记的神经元(Eriksson et al,1998)。研究结果说明，成人的大脑也可能有新的神经元产生，换句话说，人的大脑一生都在自我更新。正因为大脑会产生新的神经元，新的神经元连接，产生新的髓鞘化，形成新的脑回路，所以人的一生会经常产生新的行为习惯。

如何保存蔡司三维立体模型蔡司的ZEN数字成像软件是所有蔡司光学显微成像系统的用户界面，它能够快速提供结果，并允许用户随时查看系统提供的备选方案和正确的操作步骤。以下是使用ZEN软件保存三维立体模型的方法：打开ZEN软件：首先，启动ZEN软件并打开拍摄好的Stack图片。设置拍摄参数：在拍摄Stack图片时，需要设置拍摄的起点（Set First）、终点（Set Last）以及步进等参数。显示三维效果：点击3D按钮，显示三维边框，即可查看Stack图片的三维效果图。导出三维图片：选择File -> Export，导出三维图片。格式选择Tagged Image File，数据选择Full resolution image window-single plane，然后选择保存文件夹即可保存三维图片。拆分荧光通道：使用Split功能，可以显示不同荧光通道的图像。显示所有层面：Gallery功能可以显示Stack图片中的所有层面，类似ImageJ中的Image -> Stacks -> Make Montage操作。正交视图：Ortho功能常用于显示三维共定位，通过正交视图可以显示不同层面的图像，如BrdU与GAD的共定位。导出正交视图：在ImageJ中，正交视图的操作为Image -> Stacks -> Orthogonal Views；在ZEN中，点击Ortho导出图片即可。显示特定切面：Cut功能可以显示三维立体模型的特定切面剖面图。通过以上步骤，你可以轻松保存和使用蔡司的三维立体模型。

细胞实验必学6大技术，掌握写方法不再难！细胞实验是药理学研究中的重要环节，以下是6种常见的细胞实验技术，帮助你掌握细胞增殖、代谢活性及DNA合成等关键过程。 𐟔젧𛆨ƒž增殖细胞增殖是指细胞通过分裂来增加数量。单细胞生物通过细胞分裂产生新的个体，而多细胞生物则通过细胞分裂来补充体内衰老或死亡的细胞。检测方法： MTT（噻唑蓝）：通过添加四咪唑盐到细胞中，测定线粒体内酶的代谢活性。活细胞能将四咪唑盐还原成蓝紫色的甲瓒或甲瓒盐（Formazan），可通过分光光度计或酶标仪进行检测。 CCK-8：WST-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的橙色甲臜染料能够溶解在组织培养基中，生成的甲臜量与活细胞数量成正比。基于CCK-8的试剂盒能高度准确地检测细胞增殖，比MTT法及XTT法的灵敏度高5倍，适用于96孔板培养的贴壁或悬浮细胞。 𐟧전NA合成检测 DNA的新组装合成是细胞生长的必要条件，因此常用于检测细胞增殖、活力和凋亡。BrdU（溴脱氧尿嘧啶）和EdU（5-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是胸腺嘧啶的非放射性类似物，能掺入增殖细胞的DNA中。检测方法： BrdU免疫法：通过体内成像、微孔板或流式细胞术等技术进行细胞示踪，检测DNA的合成量。 EdU点击化学法：EdU能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子中，通过基于EdU与Apollo⮨祅‰染料的特异性反应快速检测细胞DNA复制活性，适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。掌握这些技术，你将能够更深入地了解细胞的生长和代谢过程，为药理学研究提供有力的实验支持。

细胞周期的测定方法与步骤详解一、原理细胞周期是指细胞从一次分裂结束到下一次分裂结束所经历的时间。它反映了细胞的增殖速度。单个细胞的周期可以通过缩时摄影来测定，但这种方法不能代表细胞群体的周期。因此，目前多采用其他方法测定群体周期。测定细胞周期的方法有很多，如同位素标记法和细胞计数法等。这里介绍一种利用BrdU渗入法测定细胞周期的方法。BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可作为细胞DNA复制的原料。经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占1/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如果经历了三个周期，则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅。如果细胞仅经历了一个周期，则两条单体均深染。通过计算分裂相中各期的比例，即可算出细胞周期的值。二、仪器、用品与试剂仪器、用品：同常规细胞培养试剂：BrdU（1.0mg/ml），甲醇、冰醋酸，Giemsa染液，秋水仙素，2㗓SC液三、操作步骤细胞生长至指数期时，向培养液中加入BrdU，使终浓度为10/ml。 44小时后加秋水仙素，使每ml中含0.1。 48小时后常规消化细胞至离心管中，注意培养上清的漂浮细胞也要收集到离心管中。常规染色体制片（见第三部分：染色体技术）。染色体玻片置56℃水浴锅盖上，铺上2㗓SC液，距紫外灯管6cm处紫外照射30分钟。弃去2㗓SC液，流水冲洗。 Giemsa液染色10分钟，流水冲洗，晾干。镜检100个分裂相，计、二、三、四细胞期分裂指数。计算：细胞周期（Tc）=48/{（M1+2M2+3M3+4M4）/100}（小时）附：（1）BrdU配制：BrdU 10mg+双蒸水10ml，4℃下避光保存。（2）2㗓SC配制：NaCl 1.75克，柠檬酸三钠ⷲH2O 0.88克，加水至100ml，4℃保存。

一文掌握细胞增殖的七种方法一、常用的细胞增殖检测方法在细胞增殖研究中，选择正确的检测方法至关重要。以下是几种常用的细胞增殖检测方法及其详细应用说明： 1. MTT实验 MTT实验是一种经典的细胞活力检测方法。其原理基于活细胞中的线粒体脱氢酶可以将MTT（四氮唑盐）还原成紫色甲酚盐。这种变化可以通过分光光度计定量测定，其吸光值的高低与细胞数量成正比。进行MTT实验通常包括以下步骤：将细胞种植在96孔板中，加入MTT溶液后孵育数小时，然后用DMSO溶解形成的甲酚盐晶体，最后测定吸光度。此方法简便、成本低，非常适合初步筛选药物的细胞毒性和细胞增殖能力。 2. BrdU标记法 BrdU（5-溴脱氧尿苷）标记法是一种检测DNA合成，从而评估细胞增殖的方法。 BrdU是胸腺嘧啶的类似物，可以被合成期的细胞掺入新合成的DNA中。通过使用抗BrdU抗体进行免疫荧光染色，可以直观地标记出进行DNA复制的细胞，从而计算增殖细胞的比例。操作时，首先将BrdU加入到细胞培养中，允许一段时间的掺入，然后固定细胞并进行抗体染色。这种方法特别适合于精确的细胞周期分析。 3. 克隆形成实验克隆形成实验是评估细胞生长能力和独立生长能力的重要方法，尤其适用于评估肿瘤细胞的增殖能力。实验过程包括将数量较少的细胞均匀分散在培养板中，长时间培养（一般为1-2周），直到形成可见的细胞克隆。然后用染色剂如克里斯特尔紫对克隆进行染色，计数克隆数量。克隆数量可以反映细胞的增殖能力和生长独立性。这种方法直观且信息量大，适合长期观察细胞的增殖行为。二、细胞培养技术提高细胞增殖率的策略在细胞培养中提高细胞增殖率是许多生物医学研究的关键。通过优化培养条件、使用生长因子以及采用先进的三维培养系统，可以有效地促进细胞增殖。以下是这些策略的详细解析： 1. 优化培养条件培养基成分：细胞增殖需要充足的营养支持。根据细胞类型调整含糖量、氨基酸和维生素的比例，可以显著提高细胞的增殖速度。例如，高糖培养基通常用于高能需求的肿瘤细胞。 pH值：细胞培养的pH值对细胞的生长和生存至关重要。理想的pH值通常在7.2至7.4之间。使用pH指示剂和缓冲系统定期检测和调整培养基的pH值，以保持最适条件。氧气浓度：细胞所需的氧气浓度取决于其原生环境。例如，肝脏细胞和心脏细胞需要较高的氧气浓度，而某些肿瘤细胞则可在低氧条件下更好地增殖。调整氧气浓度，模拟细胞的自然生长环境，有助于增强其增殖活性。 2. 使用生长因子生长因子是调节细胞增殖、迁移和分化的蛋白质或肽。常用的生长因子包括表皮生长因子（EGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）和胰岛素样生长因子（IGF）。这些生长因子通过与细胞表面受体结合，激活细胞内信号转导路径，促进细胞进入增殖周期。在培养基中添加适量的生长因子可以显著提高特定细胞类型的增殖率。例如，在神经细胞培养中添加神经生长因子（NGF）以促进细胞生存和生长。 3. 三维培养系统与传统的二维培养相比，三维培养系统提供了更接近自然生长环境的条件，有助于细胞展现其真实的形态和功能。三维培养使用凝胶、聚合物支架或悬浮培养系统，允许细胞在多个维度上增长，更好地模拟细胞在体内的相互作用和微环境。这种培养方式被发现可以增强细胞的生长活性和药物反应性。三维培养系统特别适合肿瘤学研究和组织工程，因为它们可以更准确地复制肿瘤微环境或组织结构，从而提供更有效的生物模型。通过实施这些策略，研究人员可以有效提高细胞的增殖率，更准确地模拟和研究细胞在生理和病理状态下的行为。三、注意事项 1. 细胞种植密度调控在开始细胞增殖实验前，确保种植的细胞密度适中。过稠的细胞密度会导致细胞之间的竞争，影响细胞的正常生长；过稀则可能影响细胞间的相互作用，减慢细胞增殖速度。建议在实验前进行预试验，找到最优的细胞种植密度。 2. 培养基更换频率定期更换新鲜培养基以供给细胞充足的营养并去除代谢产物，这对于维持细胞的健康增殖至关重要。通常建议每2-3天更换一次培养基，但具体频率应根据细胞类型和增殖速率调整。 3. 精确的时间点记录在进行细胞增殖实验时，准确记录所有关键时间点（如药物处理时间、培养基更换时间等）是必要的。这可以帮助确保实验的一致性，并方便后续实验的复制和数据分析。 4. 细胞传代操作标准化细胞在传代过程中很容易受到操作影响，如细胞暴露在非最佳温度下的时间过长或是酶解时间不当都可能影响细胞的生长状态。建立标准操作流程(SOP)，并严格执行可以减少这种变异。 5. 使用适当的检测方法和仪器校准根据实验设计选择合适的细胞增殖检测方法（如MTT、BrdU等）。确保所有仪器如酶标仪、显微镜等在实验前进行校准，以保证测量数据的准确性。 6. 环境因素控制实验室内环境因素如温度、湿度、光照等都可能影响细胞培养。确保细胞培养室的环境稳定，并监控可能的波动，如CO2浓度和培养箱的温度，避免对实验结果产生不利影响。 7. 实验记录的详尽性在进行实验的每一个步骤，都应该详细记录实验条件、操作变量、所观察到的异常情况等。这种详细记录不仅对当前实验的分析有帮助，对于未来的实验设计改进同样重要。通过这些具体的操作注意事项的执行，可以有效提高细胞增殖实验的准确性和重复性，从而得到更加可靠和有意义的实验结果。四、先进技术在细胞增殖研究中的应用在细胞增殖的研究领域，先进技术的运用正在开创新的可能性，尤其是基因编辑技术和高通量筛选技术。这些技术不仅提高了实验的效率，也极大地增强了研究的深度和广度。 1. 基因编辑技术 CRISPR/Cas9系统：作为一种革命性的基因编辑工具，CRISPR/Cas9允许科学家以前所未有的精确性进行基因操作。通过定向剪切特定基因序列，研究人员可以探索这些基因在细胞增殖中的作用。例如，通过敲除或敲降某些关键的细胞周期调控基因，可以观察到细胞增殖速率的变化，从而揭示这些基因的功能。潜力与应用：在癌症研究中，CRISPR/Cas9被用来鉴定和验证促进或抑制肿瘤细胞增殖的候选基因。此外，这种技术也被应用于基因治疗的开发，目的是修复或替换导致细胞增殖异常的遗传缺陷。 2. 高通量筛选技术技术概述：高通量筛选技术是一种可以同时测试成千上万种化合物或遗传条件对细胞增殖影响的方法。这种技术使用自动化设备和专用软件，能快速评估大量样本中的活性成分，极大地加速了药物发现和发展过程。应用实例：在药物发现中，高通量筛选可用于识别新的抗癌药物。通过评估不同化合物对多种癌细胞线的增殖抑制作用，可以筛选出有效的候选药物。此外，这种技术也用于评价基因靶点的药理学影响，帮助科学家理解基因如何控制细胞增殖。 #广州华韵生物科技有限公司#

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