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反相高效液相色谱新上映_反相高效液相色谱法(2024年11月抢先看)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：导读更新日期：2024-11-26

反相高效液相色谱

𐟧적DC药物的DAR值解析 𐟔 DAR值，即药物与抗体的比值，是评估ADC药物质量的关键指标。它揭示了抗体上偶联的小分子毒性药物的平均数量，与药效及清除率紧密相关。 𐟒ᠥ𘸧”觚„DAR值分析方法包括紫外-可见分光光度法（UV）、疏水色谱法（HIC-HPLC）、反相色谱法（RP-HPLC）以及质谱法（MS）。 𐟓Š 紫外-可见分光光度法通过测量药物和抗体在特定波长下的吸收值，结合Lambert-Beer原理，计算出DAR值。 𐟌᯸ 疏水色谱法利用高盐体系和梯度洗脱，根据分子疏水性的不同来分离不同载药量的抗体，从而测定DAR值。 𐟒‰ 反相高效液相色谱法则通过还原抗体、解离轻链和重链，并在RP-HPLC柱上分离载药形式，根据峰面积百分比计算DAR值。 𐟔젨🙤𚛦–𙦳•各有优势，共同确保了ADC药物的质量控制。了解这些分析方法，有助于更全面地评估ADC药物的性能。

𐟍즞œ糖与甘油液相分析探秘𐟧슰Ÿ”在食品与饮料分析领域，果糖和甘油是两种备受关注的成分。为了准确测定它们，高效液相色谱法（HPLC）大展身手。𐟍Ž 𐟍쥯𙤺Ž果糖的分析，HPLC能轻松分离并定量粮食、乳制品、果蔬及甜味料中的果糖、葡萄糖、蔗糖等。试样经提取后，通过高效液相色谱柱，再由示差折光或蒸发光散射检测器捕捉信号，外标法助力定量精准。𐟍‡ 𐟧짔˜油的分析同样离不开HPLC。在葡萄酒检测中，甘油与糖类一同被高效液相色谱法捕捉。试样经超声提取，反相色谱柱分离，示差折光检测器再次发挥功效，通过保留时间定性，外标法定量。𐟍𗊊𐟎‰总的来说，HPLC在果糖和甘油液相分析中大放异彩，为食品与饮料检测提供了准确、高效的定量分析手段。𐟎‰

高效液相色谱仪使用必知的12个关键点高效液相色谱仪的使用需要一些关键注意事项，以下是12个实用的建议，帮助你更好地操作仪器：流动相选择 𐟌Š 选择HPLC级或更高级别的流动相。使用前，用0.22um滤膜过滤，并确保瓶盖盖好，推荐使用有排气孔的瓶盖。水纯度 𐟒犤𝿧”褺Œ次蒸馏水或超纯水，现配现用，以避免微生物滋生导致系统污染。流动相温度 𐟌᯸ 流动相配制后，放置至室温再使用，以避免温差导致性能不稳定。缓冲盐的使用 𐟧‚ 使用缓冲盐时，必须过滤，并在使用前后用纯水清洗流路。避免将缓冲盐溶液留在流路中静置。色谱柱先用低比例有机相冲洗，再用高比例有机相冲洗保存，以防缓冲盐析出。避免使用高浓度磷酸缓冲盐（>10mmol/L）。乙腈流动相 𐟚능𐽩‡避免使用纯乙腈作为流动相，以免乙腈聚合引起吸不上液。如非用不可，建议使用棕色瓶存放。特殊流动相 𐟔슥릜‰丙酮、四氢呋喃、浓硫酸、浓硝酸、三氯乙酸、二氯甲烷、四氯化碳、二甲亚砜等溶剂的流动相，不要使用PEEK材料管路。卤素离子溶剂 ⚠️ 含有卤素离子的溶剂会引起不锈钢材料腐蚀，尽量避免使用。如非用不可，分析结束后，应立刻用超纯水冲洗全流路。进样器清洗液 𐟧𜊦 𙦍†析化合物的极性选择合适的清洗溶剂。流动相使用时长 ⏳ 流动相建议最多使用1-2天，避免长时间置于溶剂瓶中。流动相pH 𐟌𑊨€ƒ虑色谱柱的耐受范围，不宜在色谱柱耐受的上下限长期使用，以免影响色谱柱寿命。流动相互溶性 𐟌€ 流动相的使用需考虑互溶性，避免因流动相不互溶而导致缓冲盐析出。反相试剂与正相试剂之间需用异丙醇置换。长期不使用的操作 𐟛 ️ 仪器如长期不用时，应用甲醇冲洗保存。掌握这些关键点，高效液相色谱仪的操作将更加得心应手！

高效液相色谱的7种分离原理详解高效液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于化学、生物化学和药物研究中的分离技术。以下是HPLC的几种主要类型及其分离原理： 𐟌🠥𘩙„色谱法原理：基于物质在固定相上的吸附能力差异进行分离。固定相：通常为极性吸附剂，如硅胶、氧化铝等。流动相：为有机溶剂或混合溶剂。适合化合物：极性化合物，如氨基酸、有机酸等。 𐟔𕠦�‘分配色谱法原理：基于溶质在固定相和流动相之间的正相分配原理，即溶质在固定相上的亲和力大于在流动相上的亲和力。固定相：常采用氰基或氨基化学键合相。流动相：使用非极性或弱极性的有机溶剂，如己烷、苯等。适合化合物：中等极性和极性较强的化合物，如糖、氨基酸、核苷酸等。 𐟔𔠥向分配色谱法原理：基于溶质在固定相和流动相之间的反相分配原理，即溶质在固定相上的亲和力小于在流动相上的亲和力。固定相：通常使用非极性介质，如C8、C18等。流动相：使用水或含有有机溶剂的缓冲溶液。适合化合物：离极性较弱或非极性化合物，如脂肪酸、烃类等。 𐟔‹ 离子交换色谱法原理：基于物质与固定相上离子交换基团的离子交换能力差异进行分离。固定相：为离子交换树脂。流动相：水或含有有机溶剂的缓冲溶液。适合化合物：带电化合物，如氨基酸、多肽、蛋白质等。 𐟒Š 分子排阻色谱法原理：基于分子大小差异进行分离。固定相：为多孔性凝胶。流动相：水或含有有机溶剂的缓冲溶液。适合化合物：生物大分子，如蛋白质、核酸等。 𐟔Œ 离子色谱法原理：基于离子在固定相和流动相之间的电迁移和分配行为差异进行分离。固定相：为离子交换树脂或聚合物。流动相：水或含有有机溶剂的电解质溶液。适合化合物：无机离子和有机离子。 𐟔„ 离子对色谱法原理：通过在流动相中加入与样品离子电荷相反的离子对试剂，使样品离子形成离子对，从而改变其在色谱柱上的保留行为。固定相：为离子交换树脂或聚合物。流动相：水或含有有机溶剂的电解质溶液，并加入离子对试剂。适合化合物：带有相反电荷的离子对，如离子型药物、氨基酸等。

高效液相色谱法（HPLC）原理与应用详解高效液相色谱法（HPLC）是一种重要的色谱分析技术，广泛应用于化学、医学、工业、农学、商检和法检等领域。它以液体为流动相，通过高压输液系统将不同极性的溶剂或混合溶剂泵入装有固定相的色谱柱，实现对试样的高效分离和分析。 𐟔 样品注入首先，将待分析的样品通过注射器注入到色谱系统中。这个过程是整个分析过程的第一步，也是最重要的一步。 𐟌Š 流动相样品在流动相（通常是液体）中移动，流动相的组成和流速会影响分离效果。选择合适的流动相是关键，因为它决定了样品在色谱柱中的行为。 𐟏ž️ 分离过程样品在色谱柱中与固定相（通常是固体或涂覆在固体上的液体）发生相互作用。不同组分与固定相的相互作用力不同，导致它们在柱中的移动速度不同，从而实现分离。 𐟕𕯸‍♂️ 检测分离后的组分通过检测器（如紫外检测器、荧光检测器等）进行检测。检测器会记录每个组分的浓度和保留时间，这是数据分析的基础。 𐟒𛠦•𐦍†析通过计算机软件对检测器输出的数据进行分析，生成色谱图，进一步分析各组分的性质和浓度。这个过程是整个分析过程中最智能和最具价值的一部分。 𐟓Š 应用及领域分离混合物：HPLC能高效分离各种混合物，包括有机化合物、无机化合物、生物大分子等。定量分析：通过测量峰面积或峰高，可以对样品中的各组分进行定量分析。纯度检测：HPLC可以用于检测样品的纯度，通过比较样品峰与标准品的峰，可以确定样品的纯度。结构鉴定：通过与其他技术如质谱联用，可以推断出样品的分子结构。 𐟔砦𕋨᤻𖊨䇯𜚈PLC色谱仪（如Waters2695）色谱柱：C18反相柱（250*4.6mm，3um）检测器：UV紫外检测器柱温：25Ⱒ„ƒ 流速：1.0ml/min 进样量：10微升检测波长：254nm 色谱条件：A相为0.32%庚烷磺酸钠+0.136%KH2P04水溶液，B相为乙腈 𐟓Š 结果展示样品信息：样品名称、采集者、样品类型、瓶号、采集方法等。处理过程：处理方法、处理时间、运行时间等。数据分析：浓度和保留时间等数据。报告方法：报告用户、项目名称、打印日期等。 HPLC是一种强大的分析工具，能够提供精确的化学信息，帮助科学家和工程师更好地理解物质的性质和行为。

蜂王浆是哺育蜂咽下腺和上颚腺等腺体的分泌物,是一种天然的功能性食品。蜂王浆成分复杂,主要包括水、蛋白质、脂类、氨基酸、糖类、维生素等,其丰富的生物活性成分是蜂王浆具有抗肿瘤、抗衰老等医疗保健功效的基础。为提高蜂王浆产量,我国从意大利蜜蜂(意蜂,Apis mellifera ligustica)中培育出了蜂王浆高产蜜蜂(浆蜂),并尝试通过改变移虫后的取浆时间来提升蜂王浆品质。已有研究报道了蜂王浆产量和取浆时间对蜂王浆总蛋白和10-羟基-2-癸烯酸(10-HDA)等成分含量的影响,但仍存有分歧,而且对其他小分子成分的影响尚不清楚,制约了蜂王浆品质的总体评价。本课题旨在利用基于超高效液相色谱-高分辨质谱(UPLC-HRMS)的非靶向代谢组学技术,比较浆蜂和意蜂在移虫后24 h、48 h和72 h生产的蜂王浆小分子化合物的组成和含量,解析蜂王浆产量和取浆时间对蜂王浆小分子成分的影响,并比较蜂王浆含水量和抑菌活性,从整体上判断蜂王浆的品质,确定最佳的取浆时间,为我国蜂王浆优质高效生产提供依据。为优化蜂王浆代谢物的提取方法,分别使用浓度分别为50%和80%的3种溶剂(甲醇、乙醇和乙腈)提取蜂王浆代谢物,运用UPLC-HRMS进行检测。发现80%甲醇或80%乙醇组得到的代谢特征离子数量更多,而80%乙腈组最少且重复性最差。已鉴定的中低极性物质在50%溶剂组丰度较低,强极性物质在80%乙腈组丰度最低。因此,80%甲醇或80%乙醇是提取蜂王浆代谢物的最佳溶剂。通过浆蜂和意蜂3个取浆时间的蜂王浆代谢组学分析,鉴定了77个高丰度小分子化合物。与意蜂相比,浆蜂蜂王浆不仅产量提高了9倍,而且主要活性成分的含量差异不显著,其中72 h蜂王浆的10-HDA(1.98%)和水分平均含量(67.26%)均符合我国优质蜂王浆的国家标准,抑菌活性也未发生显著变化,以上结果表明浆蜂蜂王浆在产量显著提高的同时,仍然保持了优良的品质。浆蜂移虫后24 h蜂王浆的平均含水量显著下降(58.57%),10-HDA、乙酰胆碱、牛磺酸等活性成分含量显著升高,因而具有更高品质,但由于产量显著降低且耗费劳动力,不利于蜂王浆生产。移虫后48 h和72 h的蜂王浆代谢谱高度一致,含水量和产浆量均无显著差异,但48 h生产方式的移虫数量比72 h增加50%,更耗费劳动力,所以72 h优于48 h取浆。本研究首次将反相液相色谱(RPLC)和亲水相互作用色谱(HILIC)两种分离方法分别联合高分辨质谱技术,进行蜂王浆非靶向代谢组学分析。优化了蜂王浆代谢物提取方法,为后续蜂王浆代谢组学研究提供了技术支持;阐明了浆蜂蜂王浆优质高产的特性,揭示了移虫后收取蜂王浆的最佳时间,为蜂王浆优质高效生产提供了科学依据。