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培养基的配制权威发布_培养基的五个步骤(2024年12月精准访谈)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：观点更新日期：2024-11-29

培养基的配制

如何配制和灭菌培养基：详细步骤指南 𐟧슥Ÿ𙥅𛥟𚧚„配制和灭菌是微生物实验中至关重要的步骤。以下是详细的操作方法：配制溶液 𐟧ꊩ斥…ˆ，向容器中加入所需的水量。根据培养基的配方，称取各种原料，依次加入并使其溶解。对于蛋白胨、肉膏等物质，需要加热溶解。蒸发的水分在全部溶解后用水补足。对于固体培养基，先将已配好的液体培养基煮沸，然后加入称好的琼脂，继续加热至融化，并搅拌以防糊底烧焦。调节pH 𐟌᯸ 使用pH试纸（或pH计、比色计）测试pH值。如果pH不符合要求，可以用10%的HCl或10%的NaOH调节至配方所需的pH值。过滤 𐟧𝊨𖁧ƒ�覻䧺𘣀纱布或棉花过滤已配好的培养基。用纱布过滤时，折叠成六层；用滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。分装 𐟓报𗲨🇦𛤧š„培养基需要进行分装。制作斜面培养基时，分装于试管中；若制作平板培养基或液体、半固体培养基，则分装于锥形瓶内。分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一手握几支试管或锥形瓶，依次接取。分装时，不要让培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。装入试管的培养基量视试管和锥形瓶的大小及需要而定。斜面培养基每只15㗱50mm试管约装3-4mL（1/4-1/3高度），深层培养基每只20x220mm的试管约装12-15mL；锥形瓶装入1/2容积。加棉塞 𐟧銥ˆ†装完毕后，用棉塞堵住管口或瓶口，以过滤空气，避免污染。棉塞用新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时，将棉花铺展适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握形成1个长棒形的棉塞。棉塞作成塞入管口或瓶口紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。塞好以手提棉塞，管、瓶不下落为宜。棉塞2/3应在管内或瓶内，上端少露。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。制作斜面和平板培养基 𐟧갟穊培养基灭菌后，在未凝固时制作斜面和平板培养基。制作斜面：在实验台上放1支长0.5-1m、厚1cm左右的木条，将试管头部枕在木条上，使培养基自然倾斜，凝固成斜面培养基。制作平板：将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，将培养基倒入培养皿中，每皿约10mL铺满皿底后放置15分钟左右，待凝固将5个培养皿一叠，倒置，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。通过以上步骤，你就能成功配制和灭菌培养基，为微生物实验打下基础。

动物细胞培养全攻略：从基础到实践 𐟌𑠥Š觉駻†胞培养的基础步骤获取材料：从动物胚胎或幼龄动物的器官、组织中获取材料。剪碎处理：将材料剪碎，并用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理，形成单个细胞。培养基配制：将处理后的细胞移入培养基中，配成一定浓度的细胞悬浮液。细胞贴壁：悬浮液中的细胞会贴附在培养器皿壁上，形成细胞贴壁。接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到互相接触时，细胞会停止分裂增殖。传代培养：将出现接触抑制的细胞重新用胰蛋白酶处理，再配成新的细胞悬浮液。 𐟔젥Š觉駻†胞培养所需的器皿培养器皿：分为玻璃和塑料材质。玻璃材质易于清洗和重复使用，而塑料材质则价格便宜且一次性使用。常见的培养器皿有三种：培养瓶：用于培养及繁殖细胞，置于95%空气与5%CO2混合气体的培养箱中进行培养。培养皿：用于装取、分离、处理组织，以及进行细胞毒性、单细胞分离、同位素掺入实验。多孔培养板：用于各种检测实验，如细胞克隆及细胞毒性实验。不同颜色的多孔培养板有不同的用途。操作器皿：用于实验室中的操作，包括贮液瓶、吸管和加样器。贮液瓶：用于存放或配制培养用液体，如培养液、血清及试剂等。吸管：分为刻度吸管和无刻度吸管，前者用于吸取、转移液体，后者用于吸取、转移液体、吹打、混匀及传代细胞。移液器：又称加样器，用于吸取、移动液体或滴加样本。最好的是微量加样器，吸量准确、方便，可保证实验样品（或试剂）含量精确，重复性好。其他用品：包括离心管（收集细胞）、试管（放置试剂）、玻璃容器（存放吸管）、贮槽（存放小件培养物品）、冻存管（冻存细胞），各种注射器、烧杯、量筒、漏斗、酒精灯等。 𐟧ꠥŠ觉駻†胞培养的实践应用原代培养：从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。传代培养：当细胞从动植物中生长迁移出来，形成生长晕并增大后，将其分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。通过这些步骤和器皿的使用，可以进行有效的动物细胞培养，为科研和实验提供可靠的细胞来源。

搅拌设备的7大应用领域搅拌设备在许多领域都有广泛的应用，主要用于混合、制备和输送各种不同性质的物料。以下是其主要用途： 𐟌 化工行业：用于各类化学工程、石油工业及煤加工等领域的生产过程自动化控制；同时还可应用于矿冶流体的配制与培养基的配置等方面以完成各项实验任务。此外，还被广泛应用于食品和饲料的生产以及建筑业中。尤其对于那些需要把流动较困难或不相容以及粒度大小悬殊的产品进行均匀分布时，使用此类机械设备是非常必要的。 𐟏—️ 建材方面：可用于制造构件水泥中的半成品的混拌，以及对新型墙体材料的原料计量配料等工作。 ♻️ 环保设施：污泥浓缩池曝气盘管填料等的散装液体悬浮物质的充分分散和水力剪切即快速搅拌以提高处理效率和质量；也常用来充氧搅动污水生物净化的反应器内液面上的空气泡破坏并扩散到整个溶液中去以满足微生物降解有机物的氧气需求等等。 𐟧꠨𝻥𗥧𚺧𛇧퉩↥ŸŸ：如配合试验(配方)确定后对试样充分的均质才能保证产品质量的稳定一致性；也可用乳化锅上作油剂增稠调节应用范围十分广阔。 𐟔젥…𖤻–：比如高分子材料的研究、聚合体原材料的反应过程的匀场问题；油脂厂贮罐卸船机的吊篮里油脂和水迅速分离的问题也需要用到该类机械。 𐟒Š 单位药剂科的制剂室里的药品调配、药料的粉碎过筛、溶解过滤都离不开它。 𐟖𜯸 其它还有电镀槽、油漆调合机、恒温实验室储浆箱、洗涤容器用的胶粘剂稀释及其他非金属填充塑料时的搅拌装置也都属于这一范畴。总之，这些设备的运用极大地提高了工作效率和处理质量，为各个行业的进步和发展做出了重要的贡献。

植物组培室设备与设施全攻略在现代化的组培工厂中，每天都有数万株组培苗从组培瓶中出瓶，进入自然气候环境进行过渡培养。这个过程对组培苗的成活率有着至关重要的影响，因为自然环境中的温度、光照和湿度等因子会随着昼夜变化而产生大幅度的波动。为了确保组培苗的成活率，组培室的设备配置和设施建设显得尤为重要。化学实验室 𐟧ꊥŒ–学实验室主要用于组培过程中的洗涤、干燥、保存，以及培养基的配制和分装。这里需要进行高压灭菌，处理大型植物材料，并进行生理和生化分析。实验室的要求与一般的化学实验室相同，需要保持整洁和无菌。接种室（无菌室） 𐟚犦Ž姧室是进行无菌接种的地方，室内要求光滑平整，地面无缝，以避免灰尘积累。定期用甲醛或高锰酸钾进行薰蒸消毒灭菌，或者用紫外线灯照射20分钟以上。培养室 𐟌𑊥Ÿ𙥅𛥮䩜€要保持整洁，配备控温、照明设备及培养架等装置。室内温度要求恒定在25～27℃，或者根据所培养的植物进行调整。光源选择白色荧光灯为佳。其他设施 𐟏튦œ‰条件的情况下，可以设立细胞实验室和摄影室，以进行更深入的研究和记录。仪器设备 𐟔슥䩥𙳯𜚧𒾧ᮥ𚦤𘺰.1克的药物天平，以及精确度为0.001克和0.0001克的分析天平，用于称取培养基中的各种药品。烘箱和恒温箱：用于烘干玻璃器具及测定培养物的干重量。冰箱：用于贮藏各种维生素、激素及培养基母液，保存实验材料及进行低温处理。酸度测定仪：用于测定培养基的pH。高压灭菌锅：用于培养基和玻璃器皿等用具的高压灭菌。其他设备：还应配备显微镜、显微摄影、离心机以及悬浮培养用的转床、摇床等。玻璃器皿和用具 𐟧𔊥𘸧”觚„玻璃器皿包括各种类型的试管、三角瓶、培养皿、量筒和烧杯等。常用器具可选用医疗器械或微生物实验所用的各种镊子、剪刀、解剖刀和解剖针等。通过这些设施和设备的合理配置，可以有效提高组培苗的过渡成活率，进而提升组培工厂的工作效率和经济效益。

植物组培实验室必备设备清单 𐟌𑊦䍧‰駻„培实验室需要一些关键设备来支持各种实验操作。以下是一些必不可少的设备：培养容器 𐟌𑊨𜚧”褺Ž茎尖、花药、幼胚的培养。推荐规格为20mm*150mm、25mm*150mm、0mm*200mm。三角瓶：适用于各种培养，容积从50毫升到300毫升不等。小瓶口大底，培养面积大，透光性好。果酱瓶或罐头瓶：用于大量繁殖组培苗，成本低，操作方便，但培养基容易失水，污染率较高。培养皿：用于无菌材料的分离、发芽、单细胞固体平板培养等，规格有60mm、90mm和120mm。兰花瓶：主要用于兰科花卉的继代培养。塑料容器：轻便耐用，适合各种培养需求。封口材料：用于防止培养基干燥和污染杂菌，可用牛皮纸、硫酸纸、耐高温聚丙烯塑料等。玻璃器皿 𐟏𚊨‰‚瓶：用于存放各种试剂和母液，有广口和细口之分，棕色瓶用于见光易分解的药品。烧杯：用于配置各种母液和培养基。量筒：用于测量各种溶液及培养基的配制。容量瓶：用于配制各种溶液时定容。移液管（吸管）：用于吸取各种母液和植物生长调节剂，有条件的可用微量可调移液器。接种器械 𐟔ꊩ•Š子：有直镊和枪镊之分，接种和转移材料常用枪镊，规格有16cm、20cm、23cm、26cm、30cm。剪刀：有直剪和弯剪之分，用于剪取植物材料、茎段，进行继代培养的转接。解剖刀：用于切割植物材料。其他工具：包括接种针、接种铲等，用来接种花药或转移植物组织。这些设备是植物组培实验室的基础设施，确保实验的顺利进行。

茶树菇种植与食用全攻略：32种方法详解 𐟌🠨Œ𖦠‘菇的种植与栽培方法多种多样，以下是32种不同的种植工艺，助你轻松掌握茶树菇的种植技巧：茶树菇清鸡汤及其制备方法 𐟍𒊥ˆ駔覝鲍菇菌渣栽培茶树菇的方法 𐟌𑊨Œ𖦠‘菇多糖及其应用 𐟌🊨Œ𖦠‘菇微波真空干燥方法 𐟌᯸ 制备抗氧化活性茶树菇子实体多糖的方法 𐟒Š 茶树菇菌株及制备方法 𐟌𑊨Œ𖦠‘菇培养方法 𐟌🊨Œ𖦠‘菇炖乌鸡的制作方法 𐟍— 茶树菇发酵保健饮料及其制备方法 𐟥䊨Œ𖦠‘菇的培育方法 𐟌𑊦–𙤾🨌𖦠‘菇老鸭汤的制备方法 𐟍𒊨Œ𖦠‘菇营养基配制法 𐟌🊨Œ𖦠‘菇培养基及其制备方法 𐟌𑊨Œ𖦠‘菇培养基及其配置方法 𐟌🊨Œ𖦠‘菇栽培料配伍及制作方法 𐟌𑊩㎥‘𓨌𖦠‘菇酱的加工方法 𐟍𖊨Œ𖦠‘菇种植用板栗脯基质料及其制作方法 𐟌𐊥†짬‹茶树菇酱及其制备方法 𐟍𒊦洨Ž𒨌𖦠‘菇饮料及其制备方法 𐟥䊨Œ𖦠‘菇种植培养料及其使用方法 𐟌𑊨Œ𖦠‘菇的工厂化栽培方法 𐟏튨Œ𖦠‘菇牛肉酱的制作方法 𐟍– 茶树菇培养基及其配制方法 𐟌𑊥ˆ駔覗粉碎茶籽壳栽培茶树菇的方法 𐟌𑊨Œ𖦠‘菇生产方法 𐟌𑊥ˆ𖥤‡具有免疫增强活性茶树菇胞外粗多糖的方法 𐟒Š 深层液体发酵法制备富硒茶树菇粗多糖粉的方法 𐟌𑊧𚢦ž㨌𖦠‘菇保健饮料的制作方法 𐟥䊥ˆ駔褺𚩘𒨮𞦖𝥑襹𔦠𝥟𙨌𖦠‘菇的方法 𐟏튧™𝦜言𓨌𖦠‘菇出菇后菌袋废料重新制作白木耳茶树菇的方法 𐟌𑊥𓩣Ÿ茶树菇的生产方法 𐟍𔊨Œ𖦠‘菇工厂化栽培方法 𐟏튊通过这些方法，你可以轻松种植和食用茶树菇，享受其带来的美味和营养价值。快来试试吧！

2216E琼脂培养基制备全攻略 2216E琼脂培养基是一种专为海生细菌培养和计数设计的培养基。以下是详细的制备步骤和注意事项：培养基配方（固体）蛋白胨：5克酵母膏：1克磷酸高铁：0.01克琼脂：15-20克陈海水：1000毫升培养基配制步骤配料根据配方换算，在容器中加入少量水（蒸馏水或自来水）。按照配方称取各种药品，依次加入。加足所需水量（一药一勺，取药后立即盖上瓶盖）。溶解淀粉溶解：少量冷水调成糊状。加热溶解，特别是含有琼脂的培养基，一定要煮沸。琼脂的熔解温度为95-97℃，需要边加热边搅拌以防止烧焦。调pH 用煮沸的5%氢氧化钠溶液调节pH至7.6Ɒ.2，25℃。过滤用滤纸或棉花进行过滤（有时可以省去）。分装一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。三角瓶静置培养：100ml培养基/250ml的三角瓶，最多不能超过150ml。摇瓶培养：15-20ml培养基/250ml的三角瓶，保证通气良好。试管分装液体培养基一般装4-5ml，约试管的1/4高度。固体斜面培养基一般装3-4ml，约试管的1/5高度。包扎分装好后，塞上棉塞，再用牛皮纸将棉塞包裹好，防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。灭菌置高压蒸气灭菌器中，在121℃（约105kPa）下灭菌20min。如果灭菌的温度太高，营养成分会被破坏，培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。倒平板将冷至50℃培养基分别倒入经灭菌的各平皿中，每平皿约15mL，待其冷却凝固，置2-8℃冰箱内保存备用。注意事项该培养基无机盐成分较多，在高温高压灭菌后容易产生沉淀。为了更好的倒平板，灭菌前的溶解很关键，先加入水，边搅拌边缓慢加入干粉，不要让干粉成团。倒平板之前，应充分摇匀，尽量让沉淀分散开来，避免聚集在一起影响计数。通过以上步骤，您就可以成功制备2216E琼脂培养基，为海生细菌的培养和计数提供良好的环境。

植物组织培养常见问题及解决方法植物组织培养过程中，污染问题是一个常见的挑战。以下是一些实用的建议，帮助你有效处理这些污染问题。培养基的配制 𐟧ꊥœ覤物组织培养中，MS培养基是最常用的，它包含多种化合物。这些化合物在混合时可能会发生化学反应，导致沉淀和营养成分的改变。因此，配制MS培养基时，需要先配制多种高倍母液，并确保每种成分都完全溶解后再加入另一种。推荐使用Coolaber的MS培养基基盐（PM1011），这样可以更经济高效地配制培养基。灭菌后培养基不凝胶或凝胶偏软 𐟌᯸ 植物凝胶和琼脂对酸性条件敏感，pH值低于5时很难成胶或凝胶偏软。因此，高压灭菌前需要调节培养基的pH值至5.5-6.0。此外，植物凝胶对二价阳离子的浓度有要求，所以在1/2MS培养基中需要适当增加植物凝胶的用量。灭菌后，倒出培养基前一定要摇匀，因为琼脂密度大，底层含量高，容易导致培养基强度不均匀。选择Coolaber改良的MS培养基（PM10121，pH5.8Ɒ.2），含蔗糖和琼脂/植物凝胶，可以省去调pH的步骤。水解酪蛋白的选择 𐟥› 水解酪蛋白有酸水解和酶水解之分，两者在使用过程中无明显区别。酶水解更有利于发挥其作用，通常用量在500mg/L。植物激素的溶解 𐟌🊉AA、IBA、GA、玉米素、多效唑等植物激素应先溶解于少量95%的乙醇中，再加水定容配制成母液。如有结晶析出，可考虑用1/10体积的乙醇溶解后再定容。2,4-D易溶于碱性水溶液，可用少量1mol/L的NaOH溶液溶解后再慢慢加水定容。KT和6-BA先用少量的HCL溶解，再加水定容到一定的浓度。细胞分裂素的使用浓度 𐟌𑊧𛆨ƒž分裂素在培养基中的使用浓度通常为0.1～10.0mg/L，多数用1.0～2.0mg/L。KT的浓度为0.5～2mg/L。具体浓度需根据实验材料进行调整。细胞分裂素可以单独使用，也可以与细胞生长素配合使用。通过以上方法，可以有效处理植物组织培养过程中的污染问题，提高实验成功率。

类器官培养常见污染类型及解决方法在类器官培养过程中，污染是一个常见的问题，主要分为两种类型：胶内污染和培养基污染。 𐟧꠨ƒ𖥆…污染胶内污染通常是由于组织未清洗干净，或者在消化过滤过程中，细胞被带入胶内。这种污染会导致实验结果不准确，甚至影响整个培养过程。 𐟧젥Ÿ𙥅𛥟𚦱ᦟ“ 培养基污染可以是在配制过程中引入的细菌，或者在加入培养基时带入的外源细菌。这种污染会直接影响细胞的生长和类器官的形成。为了减少这些污染的发生，实验操作时需要特别注意以下几点：确保组织清洗干净，避免携带杂质。在消化过滤过程中，使用无菌操作技术。培养基的配制和使用过程中，严格遵守无菌操作规程。定期检查培养环境，确保无菌条件。通过这些措施，可以有效减少类器官培养过程中的污染问题，提高实验的成功率。

细胞培养污染常见问题及解决方案在细胞培养过程中，污染是一个常见且令人头疼的问题。为了避免这些“雷区”，确保实验的顺利进行，我们总结了一些常见的污染源和解决方案。以下是一些需要注意的关键点： ❀ 雷区一：解冻操作不当忽视无菌操作，导致细胞污染㗊在进行细胞解冻时，冻存管的盖子下边缘应位于水浴锅页面上方，避免其接触水面。此外，定期清洁水浴锅，并使用无菌水。推荐使用专用的支原体祛除试剂，如Water Shield，来确保水浴锅的无菌环境。 ❀ 雷区二：培养基配制不当忽视无菌操作，导致培养基被污染㗊在整个细胞培养过程中，都应注意无菌操作。在配制培养基后，建议先抽取少许放入培养瓶或培养皿内，在37℃培养箱内放置24~48小时，检测培养液是否有污染。选择高品质的胎牛血清也非常重要，如Ausbian进口特级胎牛血清，内毒素含量≤3EU/ml，各项微生物均为未检出，既保证了实验安全，又可以在一定程度上确保实验结果的稳定。 ❀ 雷区三：实验室卫生维护不足实验垃圾不及时清理，实验环境不及时清洁㗊实验室的清洁和维护对于防止污染至关重要。定期清洁超净台操作台面、细胞实验室台面、培养箱、冰箱、水浴锅、离心机、显微镜等实验设备及仪器。使用专用的支原体祛除喷雾剂，如Mycoplasma-off，可以在几分钟内迅速杀除支原体、真菌、细菌等微生物。通过注意这些细节，可以有效避免细胞培养过程中的污染问题，确保实验的顺利进行。

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