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基础培养基前沿信息_常用培养基的种类7种(2024年12月实时热点)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：教程更新日期：2024-12-01

基础培养基

如何制作漂亮的免疫荧光类器官图嘿，大家好！今天我想和大家分享一下如何做出超好看的免疫荧光类器官图。这个过程虽然有点繁琐，但绝对值得一试！让我们一起来看看吧！类器官收集 𐟌𑊩斥…ˆ，我们需要收集类器官。取出类器官培养板，用显微镜观察类器官的大小。等到类器官长到100-200左右的时候，就可以进行石蜡包埋了。用移液枪吸去培养液，加入等体积的预冷基础培养基。用润洗过的枪头（剪去尖端）轻轻划破或吹散基质胶和类器官的混合培养物，然后转移到1.5mL的离心管中，轻柔吹打几次，最后在冰上静置5分钟。接下来，300g，4℃，离心3分钟。你会看到培养基、基质胶和类器官沉淀从上至下分三层。如果基质胶去除不干净，可以再次用基础培养基重悬类器官离心后弃上清，直到基质胶完全去除。类器官固定、清洗 𐟧ꊥ›𚥮š类器官加入1mL 4% PFA到类器官沉淀悬液中，轻柔吹打使其混匀，然后在冰上或4℃静置固定1小时。固定结束后，300g，4℃离心5分钟，弃去上清。清洗类器官加入1mLPBS重悬类器官，300g，4℃离心5分钟，弃去上清。将类器官沉淀转移到60-70℃的水浴或金属浴中预热待用。琼脂糖包埋类器官 𐟧𔊥œ襾⧂‰中隔水加热至3%的琼脂糖彻底融化，操作时避免琼脂糖溶液沸腾，否则会导致液体损失及浓度改变。加入30-50已完全溶解的琼脂糖溶液，用润洗过的枪头（剪去尖端）重悬类器官沉淀，冰上放置30分钟，待其凝固。石蜡包埋、切片、脱蜡至水 𐟔ꊨ🙤𘀦�œ‰点复杂，但很重要。简单来说，就是将凝固的琼脂糖包埋的类器官切片，然后进行石蜡包埋、切片、脱蜡至水。免疫染色 𐟌ˆ 高温抗原修复封闭：用5%BSA封闭30分钟；孵育一抗：每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃孵育过夜；孵育二抗：第二天加荧光二抗。PBST浸洗爬片3次，每次3分钟。吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中20-37℃孵育1小时。PBS浸洗爬片3次，每次3分钟； DAPI染核：滴加DAPI避光孵育5分钟，对标本进行染核。PBS 5分钟㗴次洗去多余的DAPI；封片观察 𐟔튧”襐𘦰𔧺𘥐𘥹𒧈짉‡上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察并采集图像。好了，这就是制作免疫荧光类器官图的全过程啦！希望对大家有帮助！如果有任何问题或需要更多细节，欢迎留言讨论哦！

CCK8实验攻略，轻松掌握！ CCK8实验其实并不复杂，只需掌握一些关键步骤。以下是详细的操作指南： 𐟓ˆ 制作标准曲线计数细胞，按比例用培养基等比稀释成不同细胞浓度梯度，一般需要5-7个梯度，每组4-6个复孔。接种细胞后培养2-4小时，使细胞贴壁。然后每100培养基中加入10 CCK-8试剂（注意不要产生气泡），继续培养1-4小时。用酶标仪测定450nm处的吸光度。 𐟧‰€需培养液可以先转染再种板。在10cm盘中转染，6小时后消化并重悬细胞，调整细胞密度至20000个/ml，种在96孔板中，每孔1000。种板时，用枪头吹吸细胞，彻底重悬并均匀分散。也可以同时进行转染和种板，转染6小时后换液，每孔100新鲜DMEM。 𐟒Š 细胞增殖-毒性检测在96孔板中接种细胞悬液（100/孔，每孔细胞数至少1000），预培养24小时。向培养板加入不同浓度的待测药物。将培养板在培养箱中孵育一段时间后，加入培养基（完全培养基或基础培养基均可），孵育6小时（具体时间根据实验决定），空白孔加入培养基。向每孔加入10的CCK-8溶液（注意不要产生气泡），不用更换培养基。将培养板置于培养箱内孵育1-4小时，用酶标仪测定450nm处的吸光度。 𐟓Š 计算公式细胞存活率=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]x100% 抑制率=[(Ac-As)/(Ac-Ab)]x100% As：实验孔吸光度（含细胞、培养基、CCK-8溶液和药物溶液） Ac：对照孔吸光度（含细胞、培养基、CCK-8溶液，不含药物） Ab：空白孔吸光度（含培养基、CCK-8溶液，不含细胞、药物）以上就是CCK8实验的详细操作过程，希望对你有所帮助！

𐟧젃CK-8实验详细步骤指南 𐟧슱️⃣ 细胞准备：前一天培养好的细胞需要进行消化、离心和计数。当细胞长到90-90%时，以1:3-1:4的比例传至96孔板，确保加刺激时细胞密度在50%-60%。 2️⃣ 细胞培养：实验组每孔加入100细胞悬液，空培养基组加入100完全培养基。在37℃、5% CO2、90%湿度的条件下培养24小时。 3️⃣ 药物配置：配制不同浓度梯度的待测物质，溶解在基础培养基中以达到最高药物浓度，然后进行梯度稀释。 4️⃣ 药物处理：吸出原培养基，实验组加入含不同浓度待测物质的基础培养基100，空白组加入不含药物的基础培养基，继续培养48小时。 5️⃣ CCK-8孵育：使用前将CCK-8试剂在室温下解冻并离心。用基础培养基配置含CCK-8溶液的培养基（CCK8:基础培养基=1:10），将原培养基更换为含CCK-8的培养基。在37℃、5% CO2、90%湿度的条件下孵育30-60分钟，直至出现明显的橙黄色。 6️⃣ 酶标仪测量：用酶标仪在450 nm处测量吸光度。检测前轻轻摇匀细胞培养板，确保各孔内没有气泡。 7️⃣ 数据处理：用Excel及Graphpad Prism处理并分析结果。计算公式如下：细胞存活率 = [(实验孔 - 空白孔) / (阴性对照孔 - 空白孔)] 㗠100% 抑制率 = [(阴性对照孔 - 实验孔) / (阴性对照孔 - 空白孔)] 㗠100% 𐟔 注意：同一实验的CCK8孵育时间一致时才具有可比性。不同细胞类型和密度可能需要调整孵育时间。例如，白细胞较难显色，需要较长的孵育时间或增加细胞数量；悬浮细胞较贴壁细胞难显色，可先从培养箱中取出，目测染色程度或用酶标仪测定决定最佳孵育时间；贴壁细胞一般孵育时间为1～4小时，多数细胞培养30分钟左右即可观察到明显的显色反应，3.5～4小时检测效果最佳。

细胞冻存小技巧，轻松保存你的宝贝细胞！细胞在正常的生长过程中会不断代谢，这个过程需要各种蛋白酶的参与。当温度降到-70℃以下时，蛋白酶就会停止工作，细胞也会进入休眠状态，这样我们就可以把它们长期保存起来啦！下面就给大家分享一些细胞冻存的实用小技巧，赶紧收藏吧！实验材料准备 𐟧ꊥŸ𚧡€培养基血清（常规为FBS/NBS）超净工作台无菌二甲基亚砜无菌PBS磷酸盐缓冲液移液枪电动移液枪相关耗材准备 𐟧슐ET/PETG方形试剂瓶 15mL、50mL无菌离心管盒装无菌吸头血清移液管杯式滤器（0.22 PES膜）针式滤器（0.22 PES膜）冻存管自动旋盖机程序降温盒实验准备 𐟧ꊥ†𛥭˜液准备：对于一般的细胞，我们可以按照55%基础培养基 + 40%牛血清（FBS/NBS） + 5%DMSO的比例来配置。如果是非常重要的细胞，建议使用90%牛血清（FBS/NBS） + 10%DMSO。配置完成后，可以分装到15mL离心管中，4℃条件下储存备用。如果配置量较大，也可以分装到50mL离心管中，-20℃条件下冷冻储存。注意，如果牛血清内有析出沉淀物，可以用0.22滤膜过滤除菌，使用前37℃水浴加热。待冻存细胞准备：在冻存前，选择细胞生长状态良好且处于对数生长期的细胞。冻存前12~24小时换新鲜培养基维持细胞状态。实验流程 𐟧슨炥𞅥†𛥭˜细胞密度，约为80%~90%。用移液枪吸出陈旧培养基，加入无菌PBS清洗细胞1-2次，去除培养环境中的残留培养基。加入适量对应胰酶或消化液，使胰酶没过细胞，放入培养箱消化。显微镜下观察细胞状态，胞质回缩，细胞间不再连接成片时，加入完终止液终止消化。用吸头轻轻吹打细胞，形成细胞悬液，将细胞悬液1000rpm离心3-5分钟。丢弃上清，加入适量预先配制好的冻存液，轻轻吹打使细胞均匀并计数。用冻存液调节的细胞密度，使之终密度为5x106/ml~1x107/ml。用移液枪按照预计容量，分装入细胞冻存管中，采用自动旋盖机旋盖密封。标准的冻存程序为降温速率处-1℃~-2℃/min。可以将待冻存细胞按照以下步骤逐步冻存：室温→4℃(20分钟)→-20℃(30分钟)→-80℃(过夜)→液氮长期保存。小贴士 𐟒እ†𛥭˜前一定要选择状态良好的细胞哦！冻存液配置时要注意比例和浓度。分装时尽量均匀分配到各个冻存管中。冻存过程中要严格控制降温速率，避免影响细胞活性。希望这些小技巧能帮到你，让你的细胞宝宝们安全度过寒冬！如果有任何问题，欢迎留言讨论哦！

细胞培养的“营养学”揭秘 𐟌𑊧𛆨ƒž培养的过程就像是给细胞准备“营养餐”，其中基础培养基就像是“主食”，占据了整个“食谱”的很大一部分。基础培养基通常指的是液体培养基，类似于我们日常生活中的米饭，虽然种类繁多，但主要成分包括无机盐、维生素、氨基酸、水和其他营养成分。 𐟒砦𐴯𜚤🝦Š䧻†胞免受机械冲击，协助物质传递。 𐟍š 氨基酸：转化为糖类和脂肪，参与氧化，为细胞提供氮源。 𐟧‚ 无机盐：维持渗透压平衡，参与细胞代谢。 𐟍‡ 维生素：在细胞代谢中起调节作用。 𐟥š 其他营养成分：满足细胞生长增殖，如蛋白质、多肽、脂类等。胎牛血清就像是“主菜”，虽然在整个“食谱”中只占10%，但却是不可或缺的一部分。血清的主要成分是蛋白质和多肽、脂类、激素、生长因子、无机盐、营养物及代谢物。血清的制作方法是通过全血离心取上清液，因此含有促进和抑制细胞生长的因子，比例的调整对细胞的生长至关重要。生长因子就像是“食品添加剂”，虽然添加量很少，但它们对细胞的生长有重要影响。常见的生长因子有丙酮酸钠、𗯥Ÿ𚤹™醇、牛胰岛素等，还有一些专门针对特定细胞的生长因子，如内皮细胞生长因子和角质细胞生长因子。抗生素产品就像是“食品防腐剂”，用于防止培养基变质，从而影响细胞的健康。抗生素的种类和功能相关，包括抑制真菌的两性霉素B、庆大霉素、链霉素；抑制细菌的青霉素、链霉素；抑制支原体的红霉素类、四环素类等。每一种细胞都有自己的“口味”，为了细胞的健康生长，细胞的“监护人”会在摸索中找到最适合这种细胞的独特“食谱”。

𐟧짻†胞传代全攻略✨新手必看！ 𐟔짻†胞传代是生物实验中的一项重要技术，对于新手来说可能有些复杂，但只要按照步骤来，就能轻松掌握！ 1️⃣ 𐟧ꩦ–先，准备好完全培养基，通常是DMEM基础培养基加上10%的FBS和1%的双抗。 2️⃣ 𐟔在显微镜下观察细胞，当细胞密度达到90%左右时，就可以进行传代了。 3️⃣ 𐟗‘️将细胞培养液倒入废液缸，加入少量PBS冲洗细胞，然后吸干净。 4️⃣ 𐟔ꥊ 入胰酶消化细胞，放入培养箱消化2分钟左右。当细胞离散成单个圆形，呈沙状移动并悬浮在培养液中时，就说明消化好了。 5️⃣ 𐟛‘加入8mL完全培养基终止消化，将细胞吹打悬浮后吸取到离心管中。 6️⃣ 𐟕—将细胞在1500rpm下离心8分钟。 7️⃣ 𐟌€倒掉上清液，轻轻敲击细胞沉淀，使其散开。先加1mL培养基混匀，再加入1mL培养基稀释并充分混匀。 8️⃣ 𐟧ᦕ𐧻†胞，吸取20细胞液加入台盼蓝染液混合均匀后，在细胞计数板上计数。根据接种密度计算所需细胞液体积。 9️⃣ 𐟧륰†667细胞液加入T25培养瓶中，加入7mL左右完全培养基，轻轻摇匀后标记好细胞名、培养代数、日期等信息。 𐟔Ÿ 𐟔将培养瓶放置显微镜下观察是否摇匀，无误后放入培养箱37℃、5% CO2、90%湿度条件下培养。 𐟒ᥦ‚果是悬浮细胞，则采用直接传代法或离心传代法进行传代。直接传代法只需待细胞长满后吸弃部分悬液，加入新鲜培养基继续培养。离心传代法则需将细胞悬液转移到离心管中离心后重悬并接种到新培养瓶中。 ✨至此，细胞传代实验就完成了！是不是很简单呢？只要按照步骤来，你也能成为生物实验小能手！

𐟧젥Ÿ𙥅𛎋-92细胞的注意事项大揭秘！ 𐟑‹ 大家好！今天我们来聊聊NK-92细胞的培养注意事项。这种细胞在培养过程中可能会遇到一些问题，比如生长缓慢或者状态不佳。下面我们一起来看看如何正确培养NK-92细胞吧！ 𐟔 首先，了解NK-92细胞的基本信息很重要。它是一种依赖白介素2（IL-2）的细胞，因此在培养条件中必须添加IL-2。 𐟓Š 培养条件的优化对于细胞的培养至关重要。以下是几种常见的培养条件：一种常见的培养条件是：MEM𜈫+）+12.5%马血清+12.5%胎牛血清+1%双抗+0.2mM肌醇+0.02mM叶酸+0.1mM Mer+100-200u/ml重组IL-2。这种条件在大多数实验室中被广泛使用。另一种条件则是基于含核苷和脱氧核苷的基础培养基，没有肌醇和叶酸，并添加了谷氨酰胺。无论哪种条件，IL-2都是必不可少的，通常浓度为100-200U/ml。 𐟕’ 细胞的倍增时间大约为2天，如果发现细胞生长过慢，可能需要调整培养条件。 𐟌쯸 培养过程中需要注意以下几点：刚复苏的NK-92细胞密度较低，建议离心去除冻存液后，将培养瓶立着培养，以提高细胞密度并促进细胞聚团。待细胞聚团并正常增殖后，可以放平培养瓶，以增大与空气的交换密度。一般建议每2-3天左右换一次培养基，换液时可以在操作台内，待细胞自然沉降后，慢慢倾斜培养瓶，用巴氏吸管缓缓吸出上清，随后再补加相同体积的吸出的培养基即可。T25瓶中的培养基不宜过多，约7ml左右即可。当T25瓶中有几十上百个小团时，可以进行传代或冻存处理。后续处理时应注意轻轻吹吸细胞团，将大的团块吹成小的团块即可。 ⏳ 最后，培养基应当现用现配，由于IL-2和叶酸容易分解，所以配置的培养基尽量保持在一周左右用完。 𐟒ᠤ𛥤𘊥𐱦˜寧𙥅𛎋-92细胞的一些注意事项，希望对大家有所帮助！如果有任何问题，欢迎在评论区讨论哦！

如何用食物捕捉空气中的益生菌（一） 𐟍𝯸 食物不仅仅是人类的食物，它们也是空气中各种微生物的天然培养基。有些食物就像微生物学中的基础培养基，适合多种微生物生长；而有些食物则更像选择性培养基，只适合某一类微生物。 𐟥› 例如，草原上的牧民们挤出的乳汁，放在室内就能捕捉到空气中的乳酸菌。这些乳酸菌在乳汁中生长繁殖后，就能形成富含活性益生菌的酸奶，同时抑制有害微生物的生长。乳汁的每一个状态的产品都是可以食用的：放坏了就是酸奶，酸奶坏了就是奶酪，奶酪再被真菌侵蚀后变成最高级的蓝纹奶酪。 𐟍𒠧”觅Ÿ的黄豆来捕获乳酸菌、酵母菌或枯草芽孢杆菌，可以制作出美味的豆汁儿、黄酱、味增或者纳豆等。用新鲜的豆腐接种根霉和毛霉菌，发酵出香醇的腐乳或可口的臭豆腐。 𐟥’ 用蔬菜发酵成酸菜、泡菜或梅干菜来食用，不仅能大幅度延长这些蔬菜的保存时间，还能增加食物的营养价值。然而，这种传统的酸泡菜往往有独特的做法步骤，且只适合一个地区的水土环境，换个地方就很难获得相同的口感。在大城市通常很难成功，而且特别容易污染。 𐟏™️ 虽然城市空气中毫无疑问也存在有益微生物，但其他中性或有害微生物的数量相对农村和草原会多很多。因为草原上人口密度低，垃圾能够经环境自然分解，而城市人口密度高，产生的各种垃圾负载和扩散海量有害微生物。这些杂菌不仅会干扰有益菌的生长，还可能释放一些有害甚至有毒的物质。 𐟤” 那么，在空气不那么洁净的城市中生活时，我们还能用食物捕获有益微生物，通过食物获得那些便宜又健康的益生菌产品吗？ ❤️ 答案当然是肯定的，下期实操介绍。关注我带你肠菌健康，走向健康幸福!

动物细胞培养全攻略：从基础到实践 𐟌𑠥Š觉駻†胞培养的基础步骤获取材料：从动物胚胎或幼龄动物的器官、组织中获取材料。剪碎处理：将材料剪碎，并用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理，形成单个细胞。培养基配制：将处理后的细胞移入培养基中，配成一定浓度的细胞悬浮液。细胞贴壁：悬浮液中的细胞会贴附在培养器皿壁上，形成细胞贴壁。接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到互相接触时，细胞会停止分裂增殖。传代培养：将出现接触抑制的细胞重新用胰蛋白酶处理，再配成新的细胞悬浮液。 𐟔젥Š觉駻†胞培养所需的器皿培养器皿：分为玻璃和塑料材质。玻璃材质易于清洗和重复使用，而塑料材质则价格便宜且一次性使用。常见的培养器皿有三种：培养瓶：用于培养及繁殖细胞，置于95%空气与5%CO2混合气体的培养箱中进行培养。培养皿：用于装取、分离、处理组织，以及进行细胞毒性、单细胞分离、同位素掺入实验。多孔培养板：用于各种检测实验，如细胞克隆及细胞毒性实验。不同颜色的多孔培养板有不同的用途。操作器皿：用于实验室中的操作，包括贮液瓶、吸管和加样器。贮液瓶：用于存放或配制培养用液体，如培养液、血清及试剂等。吸管：分为刻度吸管和无刻度吸管，前者用于吸取、转移液体，后者用于吸取、转移液体、吹打、混匀及传代细胞。移液器：又称加样器，用于吸取、移动液体或滴加样本。最好的是微量加样器，吸量准确、方便，可保证实验样品（或试剂）含量精确，重复性好。其他用品：包括离心管（收集细胞）、试管（放置试剂）、玻璃容器（存放吸管）、贮槽（存放小件培养物品）、冻存管（冻存细胞），各种注射器、烧杯、量筒、漏斗、酒精灯等。 𐟧ꠥŠ觉駻†胞培养的实践应用原代培养：从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。传代培养：当细胞从动植物中生长迁移出来，形成生长晕并增大后，将其分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。通过这些步骤和器皿的使用，可以进行有效的动物细胞培养，为科研和实验提供可靠的细胞来源。

B16-F10细胞培养全攻略 𐟔젧𛆨ƒž基本信息英文名称：B16-F10 中文名称：小鼠皮肤黑色素瘤细胞种属：鼠源组织来源：皮肤品系：C57BL/6J 疾病：黑色素瘤 𐟌𑠧”Ÿ长特性与细胞形态生长特性：贴壁生长细胞形态：梭形细胞样；上皮细胞样 𐟔„ 传代与换液传代比例：1:2 ~ 1:4 换液频率：2~3次/周倍增时间：48-72h 𐟧ꠥŸ𙥅𛤽“系与条件培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS+1%P/S 培养条件：5%CO2；37 ℃ ❄️ 冻存条件冻存液：Biochannel细胞冻存液程序降温：液氮长期保存 𐟌Ÿ 细胞培养特点 DMEM（含1.5g/L NaHCO3）培养基中生长良好，大部分品牌的DMEM含有较高浓度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培养基培养细胞时需要提高CO2浓度（7%-10%）。推荐的基础培养基是DMEM（高糖）培养基。 DMEM培养的B16-F10细胞会分泌较多黑色素，而1640培养基则较少。可根据实验需求尝试更换培养体系，更换时建议留种。更换为DMEM培养液时，请确保血清和培养液质量，否则可能导致细胞不长、生长缓慢以及黑色素大量分泌。 𐟤” 常见问题解答收货时细胞出现伪足或碎片较多怎么办？受到运输影响，悬浮细胞会短暂性出现形态改变，如伪足等。通过传代培养，1周左右可以恢复正常。一些细胞在运输途中死亡而产生碎片，通过传代离心可以去除。培养过程中细胞发生贴壁怎么办？少量细胞贴壁属于正常情况，将细胞悬液转移至新瓶中即可。当贴壁细胞的比例高于20%，说明细胞生长环境有异常，需排查培养箱设置、培养基成分，以及培养器皿是否异常。培养过程中细胞发生聚团怎么办？少量细胞聚团，呈葡萄串状，属于正常现象，特别是细胞密度较低时。更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散，等待密度高时，会自己分散开。培养基里一定要加巯基乙醇吗？ 巯基乙醇是一种常用的培养补充剂，有抗氧化的作用，可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时，可适当增加巯基乙醇的比例（不超过标准量的1.5倍）。

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