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质粒dna前沿信息_质粒dna电泳为什么呈现两至三条带(2024年12月实时热点)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：教程更新日期：2024-12-02

质粒dna

𐟔젨𔨧𒒄NA转化大肠杆菌全攻略 𐟌𑊦Ž⧴⨴觲’DNA转化大肠杆菌的奥秘，让你的实验室操作更加得心应手！𐟏�芊𐟔 转化步骤一览： 1️⃣ 准备感受态细胞：选择合适的大肠杆菌菌株，并制备感受态细胞。 2️⃣ 准备质粒DNA：确保质粒DNA的质量和纯度，准备用于转化的质粒。 3️⃣ 转化过程：将质粒DNA与感受态细胞混合，进行转化操作。 4️⃣ 筛选阳性克隆：通过抗生素筛选或其他方法，筛选出含有质粒的阳性克隆。 𐟔‘ 关键点与注意事项： 𐟧Š 感受态细胞的制备：确保细胞处于最佳状态，以提高转化效率。 𐟧𜠨𔨧𒒄NA的纯化：使用合适的纯化方法，去除杂质，提高转化成功率。 𐟒‰ 转化条件：控制好转化温度和时间，避免过度转化或转化不足。 𐟔젧훩€‰方法：选择灵敏度高、特异性强的筛选方法，确保阳性克隆的准确性。 𐟓𘠥ꌦŠ契Š图片： 𐟖𜯸 转化前：展示感受态细胞和质粒DNA的准备状态。 𐟖𜯸 转化中：记录转化过程的操作步骤和关键点。 𐟖𜯸 转化后：展示筛选出的阳性克隆，并进行初步验证。通过这些步骤和注意事项，让你的质粒DNA转化实验更加顺利和高效！𐟚€𐟌Ÿ

上海名校寒假探究报告指南𐟓š 𐟔夸𛩢˜：大肠杆菌质粒DNA抽提 𐟌 对象：5-9年级学生 ⏰时间：寒假 𐟓地点：上海草心科创教育基地 --- 探究报告撰写指南𐟓 研究背景(100字) 简要介绍研究的目的和重要性，说明为什么选择这个课题。研究方法(50字) 描述研究过程中使用的具体方法，如文献法、问卷法、访谈法等。实践方法和过程(300字) 详细描述实验的具体步骤和方法，建议使用小标题，使流程更加清晰。研究结果(50字) 总结实验的主要发现和结论。探究体会与思考(200字) 撰写个人对研究的体会和思考，包括对实验结果的理解和对未来研究的展望。 --- 展望与思考(50-100字) 对研究结果的进一步思考，以及如何将研究结果应用于实际问题。对研究的总结(100-150字) 总结研究的主要发现，并与研究背景相呼应。

寒假科学实验：DNA提取与未来科技探索 𐟎‰ 初中学生们注意啦！想要了解如何撰写科学探究报告吗？寒假期间，上海草心科创教育基地为你提供了一个绝佳的机会！在这里，你可以接触到上海双一流大学的科学探究报告，并且有机会与生命科学专业的研究人员进行交流。 𐟔젦Ž⧴⥟𚥛 在日常生活中的奥秘，以及它们对未来的影响。例如，通过犯罪现场留下的蚊子血液残留，科学家们能够追踪到犯罪凶手，这就是DNA技术的应用之一。 𐟓… 活动主题：大肠杆菌质粒DNA的抽提 𐟑堩€‚合对象：5-9年级的学生 𐟓 地点：上海草心科创教育基地 𐟌Ÿ 寒假期间，快来加入我们，体验科学探究的乐趣，开启你的科技之旅吧！

碱裂解法抽提质粒，一键操作！分离质粒 DNA 的简化步骤：将培养24小时后的2毫升培养液放入离心管，以6000rpm离心5-10分钟，弃上清液，置冰上。用0.1毫升冰冷溶液I重悬沉淀，冰上放置5分钟，再室温放置。加入0.2毫升新溶液II，闭管倒置5次混合。加入0.15毫升冰冷溶液III，闭管混合，冰上放置5-7分钟，4Ⰳ、10000-12000rpm离心10分钟。将上清液转至新管，加入0.45毫升异丙醇，室温混匀，弃上清液。沉淀加0.1毫升70%乙醇，4Ⰳ、10000rpm离心5分钟，37Ⰳ烘干去异丙醇。加入20 TE和3.33 6X凝胶上样缓冲液。制备1%琼脂糖凝胶和设置电泳：用蒸馏水稀释50X TAE或5X TBE缓冲液，得到1X TAE或1X TBE。将50毫升1X TAE或1X TBE缓冲液倒入250毫升锥形瓶中，加入0.5克琼脂糖。煮沸得到透明溶液，冷却至60Ⰳ。电泳时，将梳子放在离阴极约2厘米远的地方。当琼脂糖凝胶的温度在60Ⰳ左右时，加入溴化乙锭（10毫克/毫升储备液），使凝胶的最终浓度为0.5微克/毫升。将溶液轻轻倒入电泳槽中。用不产生气泡的方式倒入琼脂糖凝胶使其在0.5-0.9厘米厚。让凝胶凝固。非常小心地将样品上到孔中，将电压设置为50V。直到溴化乙锭达到凝胶的3/4，跑胶约需1小时。在透射灯下观察。质粒 DNA 的分离结果：用异丙醇沉淀后，离心管的侧面或底部会出现白色沉淀。通常，质粒 DNA 在琼脂糖凝胶上会出现两条带。这两条带分别是质粒的超卷曲带和松弛带或开放环带。在质粒分离过程中没有添加RNA酶，因此在凝胶上也会看到一条RNA带。RNA的移动速度比DNA快，而且体积小。因此，RNA可以与质粒DNA区分开来。

实验室必备：质粒DNA制备全攻略 𐟔젥ꌤ𛋧𛍊质粒DNA制备是一种重要的分子生物学技术，用于重新克隆已有的DNA片段，以便进行进一步的分析或重组改造。它具有高效率、适用于多数菌株、产物纯化后可用于多种DNA重组操作等优点，广泛应用于转化细胞、细胞转染、酶切分析和DNA重组等领域。 𐟧ꠦ料与设备材料试剂 TE缓冲液高速/超速离心机异戊醇苯酚乙醇氢氧化钠氯仿异丙醇十二烷基硫酸钠（SDS） 3M乙酸钠酵母缺陷型培养基（一缺）仪器设备 MagicBook 𐟓 详细步骤质粒DNA的制备过程包括多个步骤，如细胞培养、收集菌体、裂解细胞、纯化DNA等。每个步骤都需要特定的试剂和设备，以确保实验的顺利进行。通过这一技术，研究人员能够更好地理解和操控DNA，为后续的实验打下基础。

𐟔젨獵𛆦�꤯𜁥悤𝕦取质粒DNA 𐟓– 一、操作步骤：准备20ml灭菌过的培养管，编号，分别加入8ml LB培养基，再加入8⵬ 相应抗生素，可适量多加；用枪头挑取单个菌落至培养管中，37℃震荡过夜；取2ml过夜培养的菌液加入离心管中，室温10000rpm离心2min，去上清；（可重复步骤2，直至菌液离心完) 向留有菌体沉淀的离心管中加入250⵬ Buffer P1（含RNase A），使用移液枪充分混匀，悬浮菌体；向离心管中加入250⵬ Buffer P2，温和地上下颠倒混匀4~6次，获得澄清的裂解液；（剧烈混合会使剪切染色体DNA，降低质粒纯度）向离心管中加入350⵬ Buffer N3，立即温和地上下颠倒混匀4~6次，此时出现白色絮状沉淀。室温10000rpm离心15min；将步骤6中所得的上清液转移至洁净的吸收柱中。要保证没有吸入沉淀和细胞碎片。室温10000rpm离心1min，至裂解物完全通过吸收柱,倒掉收集管中的废液；向吸附柱中加150⵬ Buffer PB，10000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液；向吸附柱中加400⵬ Buffer PW（检查是否加入无水乙醇），10000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液。再空离一次，2min（此时可以加热 Buffer EB，65~70℃）；将吸附柱置于一个新的离心管中，打开盖子，吹风4min左右（确保乙醇被去除，乙醇会影响下面的步骤）；向吸附柱的吸附膜中间部位加90⵬ Buffer EB（pET系列拷贝数低，加EB 70即可），室温静置2min。10000rpm离心1min；把液体倒回吸附柱，在10000rpm离心1min；混合质粒至一个离心管中，做好标记，开盖室温放置两小时左右。-40℃保存质粒。二、注意事项：使用之前，把试剂盒中的一小管RNA酶加入Buffer P1， 4℃保存。 Buffer EB在65~70℃水浴预热，可以增加提取效率。

活体转染神器！两步搞定 in vivo-jetPEI⮠是一种先进的活体转染试剂，能够安全有效地在各种动物模型中递送DNA、si/miRNA和其他类型的核酸。它已被广泛应用于体内基因功能研究、癌症研究和免疫/疫苗领域，拥有超过700篇参考文献。 𐟌Ÿ 多样性：适用于多种动物模型和核酸类型 in vivo-jetPEI⮠可以在任何器官或组织中通过基因过表达或基因抑制的方法进行基因功能研究。它适用于各种动物模型（如小鼠、大鼠、豚鼠、狗、兔子、猴子等），并能递送不同类型的核酸（如质粒DNA、siRNA、shRNA、miRNA和寡核苷酸）。已有大量文献证明了在不同动物模型中成功递送各类核酸。 𐟒‰ 便捷性：两步法操作使用in vivo-jetPEI⮩ž常简便，只需将核酸与in vivo-jetPEI⮦𗷥ˆ后，直接注射到动物体内。操作过程与体外转染类似，省去了许多繁琐步骤。 𐟏… 成功经验：从基础研究到临床试验由于in vivo-jetPEI⮧š„可靠性、安全性和高效递送，它已被用于多个药物开发项目。目前，多项用于癌症治疗、疫苗和免疫的临床试验正在使用高质量的GMP级in vivo-jetPEI⮣€‚ 𐟔 质量等级 in vivo-jetPEI⮦œ‰不同等级，包括研发级用于基础研究和实验验证，PC级适用于临床前生物分布和毒理研究，而GMP级则是最高质量等级，符合人体临床试验的质量要求。通过这些特点，in vivo-jetPEI⮦ˆ为了科研和临床研究中的有力工具。

质粒DNA提取与琼脂糖凝胶电泳实验全攻略 𐟓… 实验日期：2024年9月2日 𐟑堥ꌥ𐏧𛄯𜚥Œ组人 𐟓 实验目的：掌握碱裂解法提取质粒DNA的方法和原理掌握质粒DNA琼脂糖凝胶电泳及结果分析 𐟔젥ꌥŽŸ理：质粒是一种环状双链DNA，大小从1kb至200kb不等，存在于细胞质中，独立于细胞染色体之外，自主复制的遗传成分。碱裂解法提取质粒DNA：菌体在pH12.0-12.5的范围内，DNA双螺旋结构解开变性，但环状质粒DNA的氢键虽断裂但两条互补链彼此依然相立盘绕紧密结在一起。当加入中和液后，质粒DNA分子迅速复性，呈解状态，通过高速离心，质粒DNA与细胞碎片等杂质分离。 𐟧ꠥꌦ�꤯𜚊1️⃣ 过夜培养的菌液于离心管内，10000rpm离心尽量弃上清。 2️⃣ 将细菌重悬于2ml Buffer I中（已加入RNase A），用移液器反复吸打彻底悬浮细菌沉淀。 3️⃣ 加入210 Buffer II，温和的上下颠倒4-6次使菌体充分裂解，直到菌液变得粘稠，用移液器不应起过剧搅拌以免质粒受到破坏。 4️⃣ 加入LB，立即上下颠倒4-6次，此时出现白色絮状沉淀，离心形成沉淀。 5️⃣ 将步骤4中的上清加入到已装入收集管的吸附柱中，注意不吸出沉淀，离心1分钟，倒掉收集管中间废液，将吸附柱放回收集管中。 6️⃣ 加入500 Buffer W2，离心1分钟，倒掉收集管中的废液。 7️⃣ 向吸附柱中加入500 Buffer W2，再次离心1分钟，倒掉收集管中的废液。 8️⃣ 将吸附柱重新放回收集管中，离心2分钟，倒掉收集管中的废液。 9️⃣ 将吸附柱置于室温数分钟以彻底干燥。 𐟔Ÿ 将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附膜中滴加50 Buffer EB，室温放置2分钟，离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。 1️⃣1️⃣ 制备琼脂糖凝胶，加样后电泳分析观察结果。 ⚠️ 注意事项：器具清洗干净，防止外源性核酸酶对DNA的降解。每次起跑菌液量应控制在4ml，菌量大小影响溶菌酶对质粒DNA的释放和纯化时的纯度。培养时间不要超过6小时，细菌会崩解引起大量死亡导致质粒丢失。 Buffer W2使用前置于4℃保存。加入Buffer W2后不要剧烈搅拌4-6次即可。剧烈搅拌会导致基因组DNA污染。加入Buffer W2的时机要适中，既要保证质粒DNA不因作用时间过长发生不可逆变性。 𐟓Š 实验结果：提取的质粒DNA可能拥有不同构象，因此呈现非单带可能螺旋状。不同泳道的亲亮度不同，提示质粒含量不同，亲带成亮说明DNA含量越高（结后的核酸材料越多），也该明那一组提取的质粒度越纯。可能出现电泳条带不切一的情况，可能是由于加样时从组成孔内样分不均影结果。也可能是由于样品浓度太高，凝胶制不花，导致拖带。加样时手抖可用另一手按住胶板边缘，加样之对准孔底，以免加到孔壁上而影响实验结果。 𐟔젥ꌥˆ†析：在本次实验中，我们掌握了碱裂解法提取质粒DNA的方法和原理，并成功进行了琼脂糖凝胶电泳分析。通过实验结果可以看出，提取的质粒DNA可能拥有不同构象，不同泳道的亲亮度不同提示质粒含量不同。实验过程中需要注意器具清洗干净、控制菌液量、培养时间以及Buffer W2的使用方法等细节。希望本次实验能为其他同学提供一些参考和帮助。

𐟧전H5ˆ𖥤‡的魔法原理 𐟔 想要了解DH5ˆ𖥤‡的神奇原理吗？那就跟我一起来探索吧！ 𐟌𑠥œ谢„ƒ的条件下，利用钙离子作为媒介，大肠杆菌在CaCl₂低渗溶液中会膨胀成球形，细胞膜的通透性也会因此增加。 𐟒𜠨𝬥Œ–混合物中的质粒DNA与钙离子携手，形成一种坚韧的羟基-钙磷酸复合物，这个复合物能粘附在细菌细胞表面，大大提高了DNA进入细胞的几率。 𐟔堦Ž夸‹来，通过42℃的短暂热击处理，可以促进细胞对DNA复合物的吸收，让转化更加高效。 𐟌᯸ 热击后，感受态细胞被放入无抗性的液体培养基中，在37℃下孵育和复苏。这样，转入的外源DNA所携带的筛选标记等基因就能得以表达，产生抗性，比如对氨苄青霉素的抗性。 𐟎‰ 最后，将复苏后的大肠杆菌涂布在带有抗性的固体筛选培养基平板上进行筛选，就能得到我们心仪的DH5•毼 ✨ 通过这个过程，我们可以制备出转化率高达5㗱06～2㗱07转化子/质粒DNA的DH5„Ÿ受态细胞，满足各种基因克隆试验的需求。 𐟒ᠦ˜露是觉得这个过程既神奇又有趣呢？那就赶快试试吧！

𐟔전NA提取与纯化实验的原理与步骤详解 𐟌 一、实验原理在pH值介于12.0至12.6的碱性环境中，通过去垢剂SDS的作用，细菌细胞壁和细胞膜会破裂，从而释放出大量的染色体DNA、RNA及质粒DNA。此时，所有双链DNA会解聚成单链，而质粒DNA则保持环状。当pH值恢复到中性时，在高盐浓度下，大分子量的染色体DNA部分复性，形成不溶性的网状结构，与细胞碎片、部分蛋白质和大分子量的RNA一起沉淀，并通过离心除去。而环状的质粒DNA可以完全复性，溶解于上清中，从而实现初步分离。 𐟔砤𚌣€主要步骤 1️⃣ 取1.5ml过夜培养的菌液，以12000 rpm离心30秒，弃上清，尽可能倒干，收集菌体沉淀。 2️⃣ 用100溶液I重悬菌体沉淀，用Tip吹打至彻底悬浮。 3️⃣ 加入150溶液II，轻轻颠倒混匀4至6次，使菌体充分裂解，室温放置5分钟，直至溶液变得清亮。 4️⃣ 加入150溶液III，立即温和颠倒混匀4至6次。室温放置5分钟，12000 rpm离心10分钟，小心吸取上清。 5️⃣ 加入400结合缓冲液于离心吸附柱中，然后将步骤4中的上清加入吸附柱中（不要将沉淀移入吸附柱），混匀，套入收集管中，12000 rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液。 6️⃣ 加入750漂洗液于离心吸附柱中，静置1分钟，12000 rpm离心15秒，倒掉收集管中废液。 7️⃣ 重复步骤6一次。 8️⃣ 再次于12000 rpm空离心2分钟，尽量除去漂洗缓冲液中的乙醇。 9️⃣ 取出离心吸附柱，将其套入一个干净的1.5ml Eppendorf管中，在硅基质膜中央部位加入50洗脱缓冲液，室温放置2分钟，12000 rpm离心1分钟。 𐟔Ÿ 丢弃离心吸附柱，溶液中含有目的质粒DNA，置于4℃或-20℃保存。

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