folin酚法在线播放_folin酚法测定蛋白质含量的计算(2024年11月免费观看)
ꆯlin-酚法测蛋白实验报告 生物化学实验报告来啦!这次我们尝试了Folin-酚试剂法来测定蛋白质的质量。 ᠥꌥ理: Folin-酚法是基于蛋白质的肽键在碱性条件下与铜离子反应,生成紫红色的蛋白质-铜络合物。这个复合物中的某些残基能还原两分试剂中的磷铜酸和磷钨酸,生成蓝色化合物。蓝色深浅与蛋白质含量成正比,从而可以测定蛋白质的含量。 젥ꌦ꤯1️⃣ 取7支试管,按下表操作加入不同量的碱性铜试剂、蛋白质标准溶液和稀释的血清样品。 2️⃣ 加完碱性铜试剂后立即摇匀,室温放置10分钟。 3️⃣ 加入两分试剂,迅速混匀,室温放置30分钟。 4️⃣ 以空管为对照,读取各管吸光度。 5️⃣ 由样品的吸光度值,对照标准曲线查出样品蛋白质含量。 实验结果: 我们制作了标准曲线,并测得了样品的吸光度。通过对照标准曲线,我们成功查出了样品的蛋白质含量。 分析讨论: 实验中要注意试剂的稳定性和操作时间的精确控制,否则会影响实验结果。另外,由于样品是稀释的血清,所以在计算蛋白质浓度时要乘以稀释倍数。 这次实验让我们更深入地了解了Folin-酚法测蛋白质含量的原理和方法,真是太棒了!
lowry法测定蛋白质含量实验报告 𑠥ꌥ理:Lowry法(Folin-酚试剂法)是蛋白质测定的经典方法,其原理基于双缩脲反应的进一步发展。在碱性溶液中,铜-蛋白质复合物形成,随后被Folin-酚试剂中的磷钼酸-磷钨酸试剂还原,产生深蓝色的钼蓝和钨蓝混合物。蓝色深度与蛋白质量成正比,从而可定量测定蛋白质含量。 实验特点: 灵敏度高:Lowry法比双缩脲法更灵敏。 费时:操作步骤较多,需要精确控制时间。 标准曲线非线性:标准曲线不是严格的直线形式。 干扰物质多:酚类、柠檬酸、硫酸铵等物质可能干扰测定。 实验步骤: 1️⃣ 标准曲线制备: 取16支大试管,分别加入0, 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0ml BSA溶液(250mg/ml),用水补足至1ml。 加入5ml试剂甲,迅速混合,室温放置10分钟。 再加入0.5ml试剂乙(Folin-酚试剂),立即混匀,室温放置30分钟。 以未加蛋白质溶液的试管为空白对照,测定700nm处的吸光度值。 绘制蛋白质量为横坐标、吸光度值为纵坐标的标准曲线。 2️⃣ 样品测定: 取1毫升样品溶液(约含20~250微克蛋白质),按标准曲线制备方法操作。 以1毫升蒸馏水代替样品作为空白对照。 通常样品的测定可与标准曲线的测定同时进行。 3️⃣ 结果计算: 根据样品吸光度值,在标准曲线上查出相应的蛋白质量,计算样品溶液的蛋白质浓度。 ᠦ事项: 加Folin-酚试剂时要小心,该试剂在酸性pH条件下稳定,但还原反应在pH=10时发生。因此,加试剂后需立即混匀。 若样品酸度较高,显色后会色浅,需提高碳酸钠-氢氧化钠溶液的浓度1-2倍。 此法也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。 可检测的最低蛋白质量达5mg,通常测定范围是20-250mg。
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