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pcr实验前沿信息_pcr实验步骤详细(2024年11月实时热点)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：教程更新日期：2024-11-30

pcr实验

PCR新手必看！细节制胜𐟒ꊥ˜🯼ŒPCR新手们！刚开始做PCR实验可能会有点手忙脚乱，但别担心，我来给你们分享一些小贴士，帮你们顺利上手。实验设计 𐟓 在开始实验之前，一定要仔细设计你的实验方案。确定你要扩增的目标、引物和探针的序列，优化反应条件和参数，别忘了设计阳性和阴性对照。避免杂交污染 𐟧슐CR实验特别敏感，很容易受到外源性DNA污染的影响。所以，所有操作都必须在无RNA/DNA污染的环境中进行。使用专用的实验室空间、一次性耗材、滴管，确保样品和试剂的纯净性。选择高质量试剂 𐟧ꊨ‰‚和酶的选择非常关键，一定要选高质量的，以确保PCR反应的可靠性和重复性。储存试剂和酶的温度也要符合要求，防止它们失活。引物和探针设计 𐟔犥ˆ理设计引物和探针是成功的关键。确保它们具有良好的特异性，避免二聚体形成，优化浓度和配对。样本处理 𐟍ƒ 从样本中提取DNA或RNA时，务必遵循最佳的样本处理方法。确保样本质量和纯度，避免污染和降解。正负对照 ✅ 在PCR实验中，始终包括阳性和阴性对照。阳性对照是已知含有目标序列的样品，阴性对照是不含目标序列的样品。这可以帮助你验证PCR反应的可靠性和特异性。选择高质量PCR管和耗材 𐟧𜊤𝿧”詫˜质量的PCR管和耗材，以确保PCR反应体系的稳定性和一致性。避免重复使用PCR管和耗材，以防止污染和交叉反应。温度设置 𐟌᯸ 根据引物和探针设计，在PCR实验中适当设置温度。确保扩增温度、退火温度和延伸温度等参数都经过优化。实验记录 𐟓Š 对每个实验进行详细记录，包括实验日期、试剂批次号、样品信息、实验条件和结果。这将有助于追溯实验过程和结果的准确性。数据分析 𐟓ˆ 正确分析PCR结果，包括CT值、曲线图和荧光信号。根据实验设计和目的，选择适当的数据分析方法，如”CT法。总之，PCR实验需要严格的操作和细心的注意事项。始终遵循最佳实验规范，注意样本处理、试剂选择和实验设计等细节，以确保PCR实验的成功和准确性。加油吧，新手们！𐟒ꀀ

PCR实验气泡消除技巧，轻松搞定！在PCR实验中，气泡问题一直是个让人头疼的问题。每次处理气泡时，总是腰酸背痛，眼睛也发酸。经过一番摸索，我终于掌握了消除气泡的技巧，真是太感动了！昨天连续做了三组PCR，都没有出现气泡，直接节省了十几二十分钟！ 𐟔 气泡产生的原因：反应试剂的性质：试剂中含有易产生气泡的成分，气泡产生后不易消散，只能通过移液枪头吸出空气。操作不当：加入反应液时不小心打入空气，或者在吹打时打入了空气。 𐟛 ️ 解决方法：控制移液枪的使用方法：移液枪有两档，一档打不出所有溶液时会用到二档。使用二档时，要小心谨慎，贴着管壁轻轻打出液体，注意只打出液体，不要完全打进去，这样可以避免多余空气的进入。吹打时控制移液枪：吹打时不要完全按下去和抬起1档，这样可以避免空气的进出。 𐟤” 小问题：最近做的PCR，内参结果出现了黄色三角符号，不知道是不是试剂被污染了？希望有经验的朋友能帮我解答。希望这些小技巧能帮助到同样遇到气泡问题的新手同学们！

实验室有毒试剂清单｜珍爱生命，远离实验昨天在实验室搞多聚甲醛的时候，没在通风橱里操作，结果今早起来头巨痛！真是教训啊，大家做实验一定要戴好口罩，做好防护！立马整理了一下实验室里的有毒试剂，绝不做实验室的牺牲品！ DMSO（二甲基亚砜）𐟧ꊨ🙤𘪤𘜨忧”褺Ž冻存液的配置，还有作为常见粉剂的溶剂。但它有血管毒性和肝肾毒性，小心为上！ EB（溴化乙锭）𐟒€ EB用于琼脂糖凝胶电泳的核酸染料，剧毒！我们学校仪器平台都不让用EB显影，致癌性很强，大家一定要小心。 PCR实验𐟧슥šPCR实验的时候，苯、二甲苯、酚、trizol、氯仿这些有机溶剂都是致癌的。还有DEPC（焦炭酸二乙酯），用于溶解RNA，但它是潜在的蛋白质变质剂。做PCR一定要戴好口罩！ WB实验𐟓Š WB实验中，PMSF用于蛋白提取，高强度毒性；SDS（十二烷基硫酸钠）用于SDS-PAGE电泳凝胶配置，有刺激作用，可能引起呼吸系统过敏性反应；丙烯酰胺（未聚合）是蛋白电泳凝胶原料，有潜在神经毒性；TEMED（四甲基乙二胺）用于SDS-PAGE凝胶配置，催化凝胶凝固，但易挥发，强神经毒性。 Triton x-100𐟧𔊨🙤𘪤𘜨忦œ‰刺激性，可以因吸入或皮肤吸收受害，大家要小心。多聚甲醛𐟕𕯸‍♂️ 多聚甲醛用于组织固定灌流，易挥发且剧毒。昨天我就是因为这个倒霉东西头才这么痛的。 DTT (二硫苏糖醇)𐟧ꊥ𐏥ˆ†子有机还原剂，散发出难闻的气味。可以因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。吉姆萨 Giemsa𐟦 吉姆萨染料有极强的毒性，可致命或引起眼睛失明。可以通过吸入和皮肤吸收，其可能的危险是不可逆的效应。过硫酸铵 APS𐟒动🇧᫩…𘩓𕥯𙩻膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大危害性。吸入可致命。甲醇𐟍𖊧”𒩆‡有毒，致命剂量大约是70毫升。甲醇的毒性对人体的神经系统和血液系统影响最大。它经消化道、呼吸道或皮肤摄入都会产生毒性反应，甲醇蒸汽能损害人的呼吸道粘膜和视力。佩戴好防毒面具和护目镜，避免接触其蒸汽，注意在通风橱内操作。乙醚𐟔劤𙙩†š高度挥发，遇明火、高热极易燃烧爆炸，并有特殊气味。化学性质不稳定，日光下去空气接触，易形成爆炸性过氧化物过氧化乙醚。应小心使用。广泛用作麻醉剂。希望大家在做实验的时候一定要注意安全，珍爱生命！

本科生PCR实验全攻略，注意事项全在这！ PCR，全称聚合酶链式反应，是实验室中一种常用的鉴定试验动物基因型的方法，也是本科生学习的第一个基础实验。虽然PCR实验看似简单，但稍有不慎就可能导致结果不显著。本文以小鼠基因型鉴定为例，详细介绍PCR实验的整体流程和一些注意事项。 1⃣️ DNA提取 a) 准备组织样本（如脚趾或尾巴）+ 400 NaOH（确保样本全部浸于NaOH中） b) 100℃水浴20min（每隔5min开盖透气，防止蒸汽使EP管盖弹开） c) 加入40 Tris-HCl，混匀 d) 12000rpm，4℃，2min离心，取上清液，可在4℃储存数周 2⃣️ PCR体系配制 a) 根据目标基因型找到对应的引物，计算PCR体系（体系量应略多于样本数量） 2X Taq 10 F 0.5 R 0.5 RNase-free H2O 7 b) 将所需试剂冰上解冻后，按照计算体系配于EP管中（EP管应做好标记） c) 在八联管盖上做好对应样本的标记，按照18ul体系+2ul DNA加入八联管，并设置一个WT和水样作为对照组 d) 根据目标基因型选择对应PCR程序，扩增DNA 3⃣️ 制备琼脂糖凝胶 a) 2% 琼脂糖凝胶（大胶）：1.4g琼脂糖+70ml TAE（或1.6g琼脂糖+80ml TAE），微波炉加热1min，振荡后再加热1min，待溶液中无结晶颗粒后，冷却至40-50℃ b) 按1:20000加入EB核酸染料，摇匀（一定要充分摇匀，否则染料会单独跑出一条条带，而基因型不明显） c) 倒入凝胶托盘，待20-30min凝固。注意不要产生气泡（可以用枪头拨到角落） 4⃣️ 电泳加入marker和样本各8（根据梳尺大小或绿酶活性酌情增加或减少），最大电流，恒压110V条件下跑胶20-30min，关注marker最前端条带，勿使样本跑出凝胶。 5⃣️ 扫膜（具体步骤略）通过以上步骤，你就能顺利完成PCR实验，鉴定出小鼠的基因型啦！𐟎‰

PCR实验全攻略：从引物设计到结果分析大家好！今天我们来聊聊分子克隆中的PCR实验。上一期我们已经介绍了引物设计的基础知识，这一期我们就来聊聊PCR的具体操作步骤。 PCR反应体系：你需要准备什么？𐟧ꊊ首先，PCR反应体系需要哪些东西呢？每个实验室用的酶可能都不一样，所以最好还是看看你实验室用的酶的说明书。以下是一个常见的2㗐hanta Flash Master Mix酶的加样体系：先加水：提前计算好每个样品的加水量，然后从大体积开始加，这样更准确。加酶：根据说明书上的推荐量加入。加引物：根据引物的浓度来决定。加模板：如果是基因组或菌体，变性时间3分钟；如果是质粒或片段，变性时间30秒。 PCR反应程序设置：如何设置？𐟓Š PCR反应程序的设置也是关键。以下是一个常见的2㗐hanta Flash Master Mix酶的反应程序：变性（Denaturation）在95Ⰳ下变性30秒，让DNA双链解链成单链。这个步骤不需要修改，但变性时间可以根据模板的不同进行调整。退火（Annealing）在55Ⰳ下退火30秒，让引物通过碱基互补配对与单链DNA结合。退火温度可以根据引物的设计进行调整。延伸（Extension）在72Ⰳ下延伸1分钟，聚合酶开始合成新的DNA链。这个步骤一般不需要修改。循环数设置根据需要回收的片段大小，一般30个循环左右就够了。如果不需要回收，可以设置35个循环。其他步骤除了基本的PCR步骤，PCR仪还可以进行一些固定温度的孵育，比如37Ⰳ恒温酶切等操作。小贴士𐟓 枪头只沾到一点点液体也没关系，一般都能成功PCR。但还是要确认枪头有没有吸到相应的小体积液体。不同的酶延伸速度和温度可能不一样，需要根据具体情况调整。希望这些信息对你有所帮助！如果你有任何问题或需要进一步的指导，欢迎随时留言讨论哦！

PCR实验的注意事项（二） ### 引物的纯度和稳定性 𐟧슊在大多数PCR应用中，引物的标准纯度就足够了。脱盐过程中去除的苯甲酰基和异丁酰基很少，通常不会干扰PCR。不过，有些应用需要更纯的引物，以去除合成过程中产生的任何非全长序列。这些截断序列是因为DNA合成化学的效率不是100%而产生的。较长的引物，尤其是大于50个碱基的引物，截断序列的比例较大，可能需要纯化。引物的产量受合成化学的效率和纯化方法的影响。一些生物公司，如擎科、生工等，确保总寡核苷的产量至少为一个最小OD单位。定制引物通常以干粉形式运输，最好在TE中重溶，使其最终浓度为100。TE比去离子水好，因为水的pH经常偏酸，会引起寡核苷的水解。引物的稳定性依赖于储存条件。干粉和溶解的引物应储存在-20℃。以大于10浓度溶于TE的引物在-20℃可以稳定保存6个月，但在室温（15℃到30℃）仅能保存不到1周。干粉引物在-20℃可以保存至少1年，在室温（15℃到30℃）最多可以保存2个月。 dNTP的质量与浓度 𐟧ꊊdNTP的质量与浓度对PCR扩增效率有密切关系。dNTP粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，用1M NaOH或1M Tris.HCL的缓冲液将其pH调节到7.0～7.5，小量分装，-20℃冰冻保存。多次冻融会使dNTP降解。在PCR反应中，dNTP应为50～200umol/L，dNTP能与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度降低。模板核酸 𐟌€ 模板核酸的量与纯化程度是PCR成败的关键。传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。SDS的主要功能是溶解细胞膜上的脂类和蛋白质，破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白。SDS还能与蛋白质结合而沉淀；蛋白酶K能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白。再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份，用乙醇或异丙醇沉淀核酸。提取的核酸即可作为模板用于PCR反应。 RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法，要防止RNase降解RNA。

PCR实验9个关键步骤，新手必看！在进行PCR实验时，以下几点需要注意： 𐟔젥ꌧŽ異ƒ无菌：PCR反应容易受到外源性DNA污染，因此必须确保实验环境无菌。使用无菌操作台或清洁消毒过的工作台进行实验，并使用无菌器具和试剂。 𐟧전NA提取方法：根据样本类型和实验目的选择合适的DNA提取方法。确保提取的DNA质量和浓度满足PCR反应的要求。 𐟔砥𜕧‰騮𞨮ᤸŽ合成：引物是PCR反应成功的关键，需选择合适的引物并进行设计合成。确保引物的序列特异性、Tm值适中，并避免引物之间的二聚体形成。 𐟧ꠥ应液配置：按照实验需求和推荐的配方准备PCR反应液，确保各组分的质量和浓度正确。避免PCR反应液的污染和误差。 𐟛᯸ 内源性污染控制：内源性污染是指实验中由于PCR反应物（如引物、DNA模板、扩增产物等）的复制和污染导致的PCR结果错误。为了避免内源性污染，可以采取一些措施，如设置阴性对照，使用RNase和DNase去除可能存在的核酸污染。 𐟌᯸ 热循环条件优化：合理设置PCR反应的温度和时间参数，包括变性、退火和延伸步骤的温度和时间。这些参数的选择应根据目标DNA片段大小、GC含量等因素进行优化。 𐟌€ 避免DNA降解：PCR反应应在冷藏条件下进行，避免DNA降解。在实验过程中注意避光和快速处理，尽量减少DNA暴露在外界环境中的时间。 𐟔 实验结果验证：通过凝胶电泳、荧光染料或实时定量PCR等方法，检测PCR反应产物是否达到预期目标。同时，可以进行重复实验或交叉验证，确保结果的可靠性和一致性。 𐟛᯸ 安全操作：在实验中要注意安全操作，遵守实验室规章制度，佩戴实验手套和防护眼镜，并正确处置废物和危险品。严格遵守这些注意事项可以提高PCR实验的成功率并获得可靠的实验结果。

qPCR内参基因跑不齐？可能原因在这里！最近在做qPCR的时候，总是遇到内参基因能跑出来，但目的基因却怎么也跑不出来的情况。CT值要么特别高，要么直接显示“undetermined”。换了几次引物还是不行，真是让人头疼。有没有哪位大佬能帮我解答一下这个问题？内参基因与目的基因的差异 𐟧슊首先，内参基因和目的基因在PCR反应中扮演着不同的角色。内参基因通常用来校正实验条件，确保实验数据的可靠性。而目的基因则是我们真正关心的，希望通过PCR扩增来检测其表达水平。实验条件的影响 𐟧ꊊ有时候，内参基因跑不齐可能是因为实验条件的问题。比如，PCR反应的退火温度、引物的设计、模板的质量等都会影响PCR的结果。你可以尝试调整这些参数，看看是否能改善情况。引物设计的问题 𐟔 引物设计是PCR实验的关键步骤之一。如果引物设计不合理，可能会导致目的基因无法有效扩增。你可以尝试使用不同的引物序列，或者使用在线工具进行引物设计优化。实验操作中的误差 𐟚늊实验操作中的误差也可能导致内参基因跑不齐。比如，加样时的误差、PCR仪的温度控制不稳定等。你可以尝试在实验过程中更加仔细，或者使用自动化设备来减少人为误差。数据分析的问题 𐟓Š 最后，数据分析也可能导致误解。比如，CT值的计算方法、数据的标准化处理等。你可以尝试使用不同的数据分析方法，看看是否能得到更可靠的结果。希望这些建议能帮助你解决qPCR内参基因跑不齐的问题！如果你还有其他疑问，欢迎随时交流讨论。加油！𐟒ꀀ

上海共享实验室扩展，张江临港等新区域开放 𐟎‰ 共享实验室的版图在上海进一步扩大！𐟎‰ 在大家的强烈要求下，上海的共享实验室又新增了四个区域：张江、临港、闵行和虹桥。 𐟏력ꌥ𑻥ž‹多样这些实验室包括P1/P2生物实验室、细胞间、PCR实验室、QC实验室、GMP车间和动物实验房等，满足各种科研需求。 𐟔砨䇩𝐥…芥ꌥ–𝨮𞥤‡种类繁多，公用设备支撑也非常完善，确保实验顺利进行。 𐟒𜠥ˆ作方式灵活合作方式多种多样，可以选择年租、实验室/工位+仪器租赁、短租和技术服务等，帮助初创企业降低初期成本。 𐟏⠥…쥅𑥌𚥟Ÿ完善公共区域设施齐全，包括危废回收、环评、申报、设备使用培训、办公区和会务接待区等，让小空间也能享受大功能。

实验外包服务，轻松搞定科研难题 𐟚€ 想要在实验室里省时省力又省钱？实验外包服务来帮你！无论是染色、PCR还是动物实验，我们都能为你提供专业的服务。染色服务 𐟎芦ˆ‘们提供各种染色服务，包括但不限于HE染色、Masson染色等。无论是切片还是包埋，我们都能为你提供全方位的服务。 PCR实验 𐟧스𛎥𜕧‰騮𞨮᥈𐐃R检测，我们都能为你完成。无论是RT-PCR还是普通PCR，我们都能为你提供专业的技术支持。免疫组化 𐟧ꊥ…疫组化是科研中常用的技术之一，我们提供从包埋、切片到免疫组化操作的全过程服务。抗体费用也包含在内，让你无需担心任何细节。免疫荧光 𐟌Ÿ 免疫荧光技术可以让你更直观地观察细胞内的变化。我们提供单标、双标和三标的免疫荧光服务，全景扫描和免疫荧光分析让你一目了然。透射电镜 𐟔슩€射电镜是观察细胞超微结构的重要工具。我们提供专业的透射电镜分析服务，让你的科研工作更加精准。其他服务 𐟓抩™䤺†上述服务，我们还提供基因组DNA提取、载体构建、基因型鉴定等更多服务项目。无论你的需求是什么，我们都能为你提供专业的解决方案。

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