pet28a载体新上映_pET28a载体IPTG诱导使用浓度(2024年11月抢先看)
质粒构建时如何选择合适的蛋白标签? 蛋白标签是一种在DNA体外重组技术中常用的工具,它们与目的蛋白融合表达,以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。那么,在质粒构建时,我们应该如何选择合适的蛋白标签呢?以下是一些常用的蛋白标签及其应用场景: 6xHis标签 6xHis标签可以插入目的蛋白的C末端或N末端,主要用于重组蛋白的分离纯化。这种标签在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化时非常有用。常见的带有6XHis的载体有pET-28a(+)、pET-28b、pET-22b(+)、pcDNA3.1(+)_myc-hisA、pACYC-duet1等。 Flag标签蛋白 銆lag标签蛋白广泛应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等领域。常见的带有Flag标签的载体有pESC-His、pFLAG-CMV2、pENTR4-FLAG等。 C-Myc标签 C-Myc标签是一个含11个氨基酸的小标签,这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。C-Myc标签已成功应用在Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中,可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。常见的载体有pCMV-MYC、pcDNA3.1(+)_myc-hisA、pCMV-RFP-C-Myc、pCMV-Myc等。 eGFP/eCFP/eYFP/mCherry标签 这些标签分别是增强型绿色荧光蛋白、增强型黄绿色荧光蛋白、增强型黄绿色荧光蛋白和单体红色荧光蛋白,具有不同的激发波长发射波长,均由野生型荧光蛋白通过氨基酸突变和密码子优化而来。常见的带有eGFP的载体有pEGFP-N1、pEGFP-C1、pcDNA3.1-EGFP、pIRES-EGFP等。 SUMO标签 SUMO标签蛋白是一种小分子泛素样修饰蛋白,研究发现SUMO可以作为重组蛋白表达的融合标签和分子伴侣,不但可以进一步提高融合蛋白的表达量,且具有抗蛋白酶水解以及促进靶蛋白正确折叠,提高重组蛋白可溶性等功能。SUMO标签也常用于和其他标签一起应用,作为特异酶切水解位点。常见的带有SUMO标签的载体有pET-SUMO、pET28a-SUMO等。 在选择蛋白标签时,应根据实验的具体目的和需求来决定。希望这些信息能帮助你在质粒构建时做出最佳选择!
젨𒒧多样世界 探索质粒的奇妙世界,我们发现了许多不同类型的质粒载体。在原核表达领域,pET系列载体以其高效表达能力脱颖而出,特别适合大肠杆菌中的蛋白质生产。 pET28a、pET22b等都是这一领域的佼佼者。 如果你需要更精细的控制,pBAD系列载体或许是你的不二之选。它们使用L-arabinose作为诱导剂,为低水平或可调控的表达提供了可能。ኊpUC系列载体则是一类通用质粒,虽然表达效率稍逊于pET系列,但它们在克隆和表达目标基因方面同样表现出色。 对于那些追求高效表达的科研工作者,pGEX和pRSF系列载体提供了强大的支持。pGEX专门用于GST标签蛋白的表达和纯化,而pRSF则以其高效的T7启动子为特点。 当然,还有许多定制化的载体,满足你特定的表达需求。无论是包含特定结构域、标签还是启动子,这些载体都能为你提供个性化的解决方案。 在真核表达领域,我们同样拥有丰富的选择。pCMV系列载体以其强大的启动子能力,在哺乳动物细胞中高效表达目标基因。ꊊ如果你对绿色荧光蛋白感兴趣,pEGFP系列载体将是你理想的选择。它们能轻松检测和追踪目标蛋白在真核细胞中的表达和定位。 pIRES系列载体则允许同一质粒上的多个基因以类似于多载体的方式进行表达,非常适合共表达或共转染的研究。 此外,腺病毒载体、逆转录病毒载体以及酵母载体等,都为真核细胞的短期和长期表达提供了强大的支持。𑊊在这个质粒的多样世界中,总有一款适合你!无论你是科研工作者还是生物技术爱好者,这些质粒载体都将为你提供无尽的灵感和可能!
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