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免疫组化笔前沿信息_免疫组化15项结果一秒看懂(2024年12月实时热点)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：教程更新日期：2024-12-02

免疫组化笔

免疫组化实验全解，必看！ 𐟔젦Š€术原理：免疫组化是利用免疫学基本原理——抗原抗体反应，通过化学反应使标记抗体的显色剂（如荧光素、酶、金属离子、同位素）显色，从而确定组织细胞内的抗原（多肽和蛋白质），进行定位、定性和定量研究。 𐟓 实验步骤：切片脱蜡至水抗原修复 3%双氧水处理，画圈，血清封闭一抗4Ⰳ过夜孵育二抗室温孵育显色苏木素染核，脱水，透明封片，显微镜观察 𐟓栩€样运输要求：石蜡切片制片：组织取样后应立即放入固定液中，避免冻存。冰冻切片制片：应取用新鲜组织，以免抗原丢失。组织蜡块可长期保存，但石蜡切片理论上不超过半年，冰冻切片不超过3个月。 𐟓 注意事项：苏木素复染时间需摸索，尤其是阳性染色在细胞核上。 DAB显色时间需优化，镜下观察达到阳性染色明显但背景不深。抗体孵育时间和浓度需摸索，尤其一抗孵育最好在4度过夜。切片脱蜡和水化要充分，加反应液时要覆盖组织充分，每次加液前甩干洗涤液，防止干片。用组化笔画圈时尽量画大一点，否则墨水排斥液体，引起片周边干片。 𐟤” 常见问题：片子着色不均匀？脱蜡不充分：可以60℃烤20分钟，立即放入新鲜的xylene。水化不全：应经常配制新鲜的梯度乙醇。抗体没混匀：用移液器充分混匀一抗/二抗等试剂。抗体孵育时，切片放倾斜。抗体孵育后PBS冲洗不充分。制片厚薄不均匀：染片盒不平，切片倾斜。 𐟌᯸ 一抗从4℃拿出后，为什么有人说要37℃复温？防止切片从4℃直接放入PBS易脱片。使抗原抗体结合更稳定。一般不需要，但对表达较弱的抗原可能有用。4℃和37℃时分子运动方式不同，前者分子碰撞机率和运动速度小于后者，后者结合更快，但敏感性也提高了并易造成非特异染色。 𐟌미 切片染色后背景太深，不易区分特异性与非特异性着色？抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体。

免疫细胞化学实验全攻略：从试剂到步骤一、实验器材及试剂 𐟧𔠥ꌥ™覝：载玻片涡旋混合器掌上离心机脱色摇床移液枪显微镜组化笔 𐟧ꠤ𘻨恥ꌨ‰‚：无水乙醇 PBS缓冲液破膜工作液正常兔血清 BSA 组化试剂盒DAB显色剂苏木素染液苏木素分化液中性树胶二、免疫细胞化学实验步骤 1️⃣ 细胞破膜：爬片稍甩干后，用组化笔在盖玻片中间画圈，防止抗体流走。加入50-100破膜工作液，室温孵育20分钟。用PBS洗3次，每次5分钟。 2️⃣ 血清封闭：在组化圈内滴加3%BSA，均匀覆盖组织。室温封闭30分钟。封闭血清一般选择和二抗同一来源的，其他来源的用BSA封闭。 3️⃣ 加一抗：轻轻甩掉封闭液，在细胞孔板里滴加按一定比例配好的一抗。将细胞培养板平放于湿盒内，4Ⰳ孵育过夜。 4️⃣ 加二抗：细胞孔板置于脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5分钟。稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗（HRP标记），覆盖组织，室温孵育50分钟。 5️⃣ DAB显色：细胞孔板置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5分钟。稍甩干后在圈内滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下控制显色时间，阳性为棕黄色，自来水冲洗切片终止显色。 6️⃣ 复染细胞核：滴加苏木素复染3分钟左右，水洗。滴加苏木素分化液分化数秒，水洗。滴加苏木素返蓝液返蓝，水洗。 7️⃣ 脱水封片：往细胞孔板依次加入75%酒精5分钟、85%酒精5分钟、无水乙醇Ⅰ5分钟、无水乙醇Ⅱ5分钟进行脱水。将盖玻片从酒精中取出，吹风机吹干后将有细胞的一面朝下用中性树胶封固在载玻片上。 8️⃣ 显微镜镜检，图像采集分析。三、免疫细胞化学结果判读苏木素染细胞核为蓝色，DAB显出来的阳性细胞为棕黄色。

如何成为病理学高手：五步进阶指南 𐟌Ÿ 大量阅读病理切片：从浅到深，逐步深入病理读片会的切片。许多历史悠久的医院都积累了大量的病理切片材料，这些档案对你来说是一笔宝贵的财富。开始时，可以先从市级或地区级的读片会切片入手，这些切片的难度相对较低。随着经验的积累，可以逐渐挑战省级的读片会切片。通过大量的读片训练，你的知识面将大大扩展，业务能力也会显著提升。特别是在工作中遇到已经阅读过的病例，并能够正确诊断时，你会产生一种成就感。这种成就感是激发你对病理学兴趣的关键。 𐟔 每天都要学习：即使在大医院工作，也要充分利用每一天的时间。虽然你可能不是每天都在当班，但无论是否当班，都要把当天的切片“扫”一遍。已经掌握的切片可以快速浏览，而那些未见过的切片则需要仔细研究，直到水落石出。 𐟌 上网学习：利用网络资源，访问中国病理学网等网站。在这里，你可以提问、分享病例，遇到问题时也能得到老师的帮助。 𐟒𜠨🛤🮤𙋨𗯯𜚨🛤🮦˜憐升自己病理学水平的关键。通常，进修会选择省级的大医院，那里不仅有丰富的病例，还有理论水平高的老师。进修期间，会有定期或不定期的分系统病理讲座，以及免疫组化、分子病理、电镜等先进的病理技术。此外，还有成人尸检等机会。 𐟑袀𐟏려𘎨€师建立良好的关系：在进修期间，与老师和其他病理科人员（包括技师和进修人员）建立良好的关系至关重要。以下是一些建议：① 不仅要做好病理工作，还要积极参与其他卫生工作，如干杂活。② 老师交办的事一定要在规定时间内保质保量地完成。③ 取材要规范和到位，尽可能减少补充取材；描述和报告要规范，减少老师修改的工作量。④ 提高工作效率和速度。⑤ 在工作前做好充分的准备。⑥ 在上级医师复片前做好充分的准备，如补充病史，开出免疫组化单等。⑦ 注意个人仪表。通过以上步骤，你将逐步成为一名优秀的病理医生。记住，学习是一个持续的过程，需要不断努力和坚持。

免疫荧光染色封片技巧全攻略 1. 𐟧ꠦŠ—体选择：选择与目标蛋白特异性高、亲和力强的抗体，一抗浓度需通过预实验确定。过高浓度可能导致自发荧光增强。 𐟧ꠦŠ—体稀释：根据抗体说明书，使用合适的稀释液和比例进行稀释。 𐟧ꠂlocking：使用适当的Blocking液减少非特异性结合，通常采用动物血清，室温下封闭1小时，建议延长至2小时。低温时，可使用37℃孵育箱。 𐟧ꠤ𚌦Š—选择：选择与一抗种属匹配的荧光标记二抗。长时间4℃放置可能导致荧光素沉淀，建议配成工作液后高速离心，取上清使用。 𐟧ꠦ𔗦𖤯𜚦�“作后充分洗涤，去除未结合的抗体和染料。 𐟧ꠥ𐁧‰‡：选择合适的封片剂，避免荧光淬灭。 𐟧ꠥ﹧…種𞧽š设置阳性和阴性对照，确保实验结果可靠性。封片技巧：确保切片上没有多余液体，封片剂不宜过多。用10ul枪头吸取少量封片剂，点在每个样品边缘，缓慢盖片。滴加适量封片剂，避免气泡产生。用10ul枪头滴加约5ul/样品（根据组化笔大小调整），避免打出气泡！如果不小心产生气泡，可用镊子轻轻挤出。使用干净的盖玻片，轻轻按压，使封片剂均匀覆盖切片。避免在盖玻片上留下指纹或污渍。

免疫荧光染色全攻略：从原理到操作步骤免疫荧光染色（Immunofluorescence, IF）是一种利用抗原抗体特异性结合来显示目标蛋白的技术，主要分为直接法和间接法。直接法是将蛋白与标记荧光素的一抗结合，而间接法则是蛋白先与一抗结合，然后再与带有荧光基团的二抗识别，最后在荧光显微镜下观察荧光。 𐟧꠨‰‚与材料生长于盖玻片的贴壁细胞封闭液（5% BSA/PBS）、抗体稀释液（1% BSA/PBS）固定剂：冰甲醇和冰丙酮，-20℃放置1小时以上 3%-4%多聚甲醛/PBS和0.5% Triton X-100/PBS 3%-4%多聚甲醛/PBS和冰丙酮，-20℃放置1小时以上一抗、荧光素标记二抗封片介质、湿盒、组化笔、荧光显微镜 𐟔젦“作步骤（间接法）细胞制备：从细胞培养箱取出细胞爬片，在光学显微镜下观察细胞生长成单层，弃去上清液，用PBS洗1次。细胞固定：根据抗原和组织细胞特点选择以下一种固定方法：甲醇/丙酮固定法：冰甲醇-20℃固定10分钟，弃去多余甲醇，冰丙酮-20℃透化细胞1分钟。多聚甲醛/Triton固定法：3%-4%多聚甲醛/PBS固定10分钟，PBS冲洗，0.5% Triton X-100透化细胞2-10分钟。多聚甲醛/甲醇固定法：3%-4%多聚甲醛/PBS固定10分钟，PBS冲洗，冰甲醇-20℃透化细胞5-10分钟。洗涤：用PBS浸洗3次，每次5分钟，去除多余的PBS。封闭：用5% BSA/PBS室温封闭30分钟。一抗孵育：在湿盒中滴加适当浓度的一抗，室温孵育1小时或4℃过夜。然后用PBS浸洗3次，每次5分钟。二抗孵育：加适当稀释的荧光素标记二抗，使其覆盖细胞，置于黑色湿盒内室温孵育30分钟以上。然后用PBS浸洗3次，每次5分钟。封片：滴加抗荧光衰减封片剂封片。观察：在荧光显微镜下观察结果。通过以上步骤，你可以利用免疫荧光染色技术来显示目标蛋白在细胞中的分布和定位。

多重荧光免疫组织化学实验全流程详解 𐟔젥䚩‡荧光免疫组织化学（mIHC）是一种强大的技术，用于同时检测多种蛋白质在组织切片中的表达。以下是实验的详细步骤，帮助你更好地掌握这项技术。 1️⃣ 切片、烤片及烘片使用粘附载玻片，切片厚度为5微米。若使用组织芯片，需准备与组织芯片类型相对应的常规组织切片进行预实验条件摸索。切片后立即烤片：先在60℃条件下烘烤6-8小时，再在40℃条件下过夜烘烤。切片需避光保存，并在一个月内使用。实验前，将石蜡切片60℃烘片1小时。 2️⃣ 脱蜡水合用新鲜二甲苯浸片10分钟，重复3次，或浸片30分钟，重复2次。分别用100%、95%、90%、80%的乙醇浸片，每次5分钟。使用灭菌水洗片1分钟，重复3次。 3️⃣ 后固定用10%中性福尔马林浸片10分钟。用灭菌水洗片1分钟，重复3次。 4️⃣ 封闭内源性过氧化氢酶（可选）新鲜配制3% H2O2溶液：20ml H2O2（30%）+180ml Millipore H2O。用3% H2O2浸片15分钟。水洗3次，每次1分钟。 5️⃣ 微波修复抗原将抗原修复液放入修复杯中，在微波炉内高火5分钟至煮沸。将脱蜡水合后的玻片放入预煮沸的抗原修复液中，确保玻片全部浸没。微波低火维持15分钟（注意补液，防止蒸发过度导致干片）。将玻片取出，放入冰水浴中冷却至室温。 6️⃣ 封闭去除玻片上残留的洗液。用组化笔圈出玻片上的样本区域，滴加封闭液覆盖样本区域。室温保湿振荡10分钟。 7️⃣ 一抗孵育去除玻片上的封闭液。用移液器滴加稀释的一抗溶液，浸没样本区域。室温或37℃保湿振荡孵育1-2小时（根据不同抗体做优化调整）。用1㗔BST buffer浸洗玻片3分钟，重复3次。 8️⃣ 二抗孵育去除玻片上残存的洗液。直接滴加HRP标记的二抗工作液，浸没样本区域。室温保湿孵育10分钟。用1㗔BST buffer浸洗玻片3分钟，重复3次。 9️⃣ 荧光染色放大信号去除玻片上残存的洗液。滴加1㗔SA染料工作液100（用信号放大反应液按1:100稀释），浸没样本区域。室温保湿振荡孵育10分钟。用1㗔BST buffer室温浸洗玻片3分钟，重复3次。微波修复洗脱，室温自然冷却至室温。灭菌水洗片1次，用1㗔BST buffer洗2分钟。 𐟔Ÿ 追加染色重复步骤5至9进行多重染色。 1️⃣1️⃣ 封片使用适当的封片剂将玻片封好，避免荧光信号的损失。 1️⃣2️⃣ 阅片在显微镜下观察染色结果，记录并分析数据。

科研实验的六大“潜规则” 1. 𐟍𓠥ꌥ悧ƒ𙩥꯼Œ准备是关键做实验就像做饭，大部分时间都花在准备上。做饭要买菜、洗菜、切菜、调料，做实验则需要前期的知识储备、文献查阅、材料准备和方法设计。如果准备不足，实验中往往会遇到各种问题。比如，在消化细胞时，突然发现培养基用完了，细胞只能干等着。 𐟓 好记性不如烂笔头实验结果再漂亮也要记下来。即使是不好的结果，也要详细记录步骤和结果。这样才能从前车之鉴中吸取教训，不断进步。记录本可能是你日后科研成功的关键。 𐟒ᠥ‹䤿�家也要分时机实验室里，有些人会捡起掉在地上的灭菌枪头继续用，或者用同一个细胞培养瓶多次传代。虽然这些行为看起来很勤俭持家，但可能会带来污染问题。比如，样品因为自由落体后的枪头污染了，细胞因为被对其而言是“千年老房”的瓶子污染了，免疫组化因为国产抗体染得全国江山一片红。结果导师只会拍你的头而不是赞赏你勤俭持家的好作风。 𐟑袀𐟏력�𜚦Š𑥸ˆ兄师姐大腿在师兄师姐离开之前，学会关键技术。重要tips: 对师兄师姐好点，人家才会将真传教给你。你看，黄蓉为了让吃货洪七公教郭靖学武功，可是天天变着花样给洪七公做菜。虽然做菜这个要求有点高，但至少要尊重师兄师姐，虚心向人家请教。 𐟓Š 交接别忘看记录刚进实验室时，通常需要延续师兄师姐的工作。如果师兄师姐的实验结果不可靠，你就要承担很大的风险。因此，拿到师兄师姐的实验记录后，要认真翻阅，发现问题及时处理。 𐟌𑠦Š𑦜€好的希望，做最坏的打算读研读博时间有限，一进入实验室，就按下了研究生生涯的倒计时。因此，要未雨绸缪，设计课题时要考虑到可能出现的各种情况。无论结果为阳性或阴性，都能写文章。阳性结果说明什么，阴性结果说明什么。如果课题要求得出阳性结果，可能需要事先设计几部分，万一第一部分得不出预期结果可以用其它部分弥补损失。

免疫组化全流程详解：从包埋到复染 1. 包埋组织 𐟧ꊥ…ˆ在铁模具中加入一些液态石蜡，稍微冷却后再将待包埋的组织置于石蜡中，排列整齐。盖上塑料模具盒，最后加入少许液体石蜡，进行冷冻，使石蜡变成固态。切片 𐟔ꊥ𐆥Œ…埋好的组织从模具上取下来，置于石蜡切片机上。通过调节切片机上下左右，使组织和切割方向一致。调节切片厚度一般为5⵭。如果比较难切，可以适当调整厚度。用毛笔将切割的载玻片向外拉，并用小镊子将包含有完整组织的载玻片置于40Ⰳ温水中。脱蜡 𐟔劥𐆨𝽧Ž𛧉‡依次放入二甲苯-二甲苯-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精中脱蜡。起脱蜡作用的是二甲苯，依据相似相溶的原理。一般在每个试剂中放10min，天气热可以少放几分钟，天气较冷的话，就要适当延长脱蜡时间，一般为12-15min。抗原修复 𐟧슨„𑨜ᥐŽ在清水中冲洗一段时间，加入3%H2O2浸泡10min，除去内源性的过氧化氢酶。然后倒掉H2O2，在清水中洗两次，再加入柠檬酸缓冲液，放入微波炉中中火蒸煮3min，一般刚到沸腾即可。冷却至室温，然后再蒸煮一次，冷却至室温，蒸煮的目的是为了使抗原的位点暴露出来。血清封闭 𐟚犥†𗥍𔨇𓥮䦸饐Ž，将柠檬酸缓冲液倒掉，水洗2次，并将载玻片置于PBS中5min，洗2次。擦干组织周围的PBS液，马上加上血清，使一些非特异性的位点封闭起来。然后放入37Ⰳ温箱中半小时。血清稀释10倍【900⵬PBS：100⵬血清封闭液】。加一抗 𐟧𕊥𐆦𘩧𘭧š„载玻片取出，用吸水纸擦干载玻片反面和正面组织周围的血清，加一抗。如果做对照实验，就在对照的组织上加PBS。加二抗 𐟔„ 将载玻片从冰箱中取出，放入PBS中洗3次，每次5min。擦干组织周围的PBS后加上二抗，然后置于37Ⰳ温箱中半小时。加SABC 𐟌ˆ 将片子从温箱中取出，放入PBS中洗3次，每次5min。擦干组织周围的PBS后加上SABC，然后置于37Ⰳ温箱中半小时。加显色剂 𐟎芥𐆧‰‡子从温箱中取出，放入PBS中洗3次，每次5min。擦干组织周围的PBS后加上显色剂（显色剂的配置：在1ml水中加1滴显色剂A，摇匀，然后加1滴显色剂B，摇匀，再加1滴显色剂C，摇匀）。A：DAB B：H2O2 C：磷酸缓冲液。复染 𐟌𘊥𐆦˜𞨉𒥐Ž的片子用清水冲洗一段时间后，浸泡于苏木精中染色，一般动物组织为半分钟，植物组织3-5min。

免疫组化全流程详解：从载玻片到结果 1. 𐟧𔠦𔗨𝽧Ž𛧉‡：将载玻片放入重铬酸钾和浓H2SO4的混合液中，目的是去除硅胶等杂质，使表面变得平整，便于组织吸附。然后，用清水冲洗约一个小时，去除残余的重铬酸钾和浓H2SO4。接着，将载玻片浸泡在酒精中，放在37Ⰳ温箱中，涂布多聚赖氨酸。由于Lys带正电，而大多数组织带负电荷，产生吸附作用。 𐟧𓠥Œ…埋组织：在铁模具中加入液态石蜡，稍微冷却后，将待包埋的组织置于石蜡中，排列整齐。盖上塑料模具盒，加入少许液体石蜡，进行冷冻，使石蜡变成固态。 𐟔ꠥˆ‡片：将包埋好的组织从模具上取下来，放在石蜡切片机上。调节切片机上下左右，使组织和切割方向一致。调节切片厚度一般为5⵭，如果较难切，可适当调整厚度。用毛笔将切割的载玻片向外拉，用小镊子将包含完整组织的载玻片置于40Ⰳ温水中。 𐟌Š 捞组织：将组织载玻片置于40Ⰳ温水中前，先赶走水浴中的气泡。用载玻片捞组织时，一般取载玻片的下1/3或下1/2，每种组织捞5-6张，其中2-3张备用。每张载玻片上通常捞两份组织，做对照使用。将捞出的载玻片置于架子上，放入37Ⰳ温箱中烘干。 𐟧𔠨„𑨜᯼š依次将载玻片放入二甲苯-二甲苯-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精中脱蜡。依据相似相溶的原理，一般在每个试剂中放10分钟，天气热可少放几分钟，天气较冷则适当延长脱蜡时间，一般为12-15分钟。 𐟔堦Š—原修复：脱蜡后在清水中冲洗一段时间，加入3%H2O2浸泡10分钟，去除内源性过氧化氢酶。倒掉H2O2，在清水中洗两次，加入柠檬酸缓冲液，放入微波炉中蒸煮3分钟（中火），刚到沸腾即可。冷却至室温后，再蒸煮一次，冷却至室温，蒸煮目的是使抗原位点暴露出来。 𐟧𔠨ဦ𘅥𐁩—�š冷却至室温后，将柠檬酸缓冲液倒掉，水洗2次，并将载玻片置于PBS中5分钟，洗2次。擦干组织周围的PBS液，加上血清封闭非特异性位点。然后放入37Ⰳ温箱中半小时。血清稀释10倍（900⵬PBS：100⵬血清封闭液）。

黑枸杞泡水有什么功效姐妹们有没有发现，最近大家都在讨论黑枸杞泡水！作为一个健康养生博主，我也忍不住来跟大家分享一下黑枸杞泡水的神奇功效。今天，咱们就来聊聊黑枸杞泡水的三大健康效益吧！𐟌🊊✨增强免疫力黑枸杞之所以这么火，主要是因为它能显著增强我们的免疫力。这主要得益于黑枸杞中富含的枸杞多糖和原花青素。枸杞多糖是一种活性成分，可以显著增强机体的非特异性免疫功能，提高我们对疾病的抵抗力。而原花青素还能穿越血脑屏障，保护脑神经不受氧化损伤，进一步稳定脑组织功能，为大脑提供坚实的免疫屏障。𐟒ꊊ𐟌Ÿ改善血液循环黑枸杞中的花青素是改善血液循环的关键成分。这种强效的抗氧化剂能够清除体内的自由基，减少氧化应激反应对血管的损害。同时，它还能促进血管内皮细胞的修复与再生，增强血管的弹性和韧性。此外，花青素在抗衰老和美容养颜方面也有着显著效果，能够淡化色斑、紧致肌肤，使肌肤焕发青春光彩。✨ 𐟒䦔𙥖„睡眠对于许多因生活节奏快、工作压力大而导致睡眠问题的小伙伴们来说，黑枸杞无疑是一种理想的养生选择。这主要得益于黑枸杞中的花青素、多糖以及黄酮类化合物等成分。花青素能够穿越血脑屏障，保护脑神经不受氧化损伤，从而稳定脑组织功能，为我们创造一个更为健康、宁静的睡眠环境。同时，这些成分还具有一定的镇静作用，能够缓解焦虑、疲劳等症状，进一步促进深度睡眠。𐟌™ 黑枸杞泡水作为一种简单易行的养生方法，不仅方便快捷，更能充分发挥其独特的健康效益。从增强免疫力到改善血液循环，再到改善睡眠，黑枸杞以其丰富的营养成分和科学的功效，为人们的健康生活增添了浓墨重彩的一笔。𐟌🊊好啦不说那么多了，赶快去试试吧！有任何问题或者想了解更多的朋友们都可以留言告诉我哦！感谢您的关注！𐟌Ÿ

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