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小鼠活体成像权威发布_小鼠活体成像仪(2024年12月精准访谈)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：观点更新日期：2024-11-30

小鼠活体成像

小鼠活体成像与传统成像方法在免疫研究中的优劣比较

耶鲁大学医学院招募博士后/访问学者耶鲁大学医学院的C实验室正在寻找一位充满活力的博士后或访问学者，专注于研究肺泡区组织再生的机制。我们的研究团队结合了全基因组组学、遗传小鼠模型、体内和体外活体成像、高级显微镜以及人类肺切片培养等多种技术，旨在发现基于上皮干细胞的肺部修复机制。 𐟔 最新研究成果我们开发了体内和体外完整肺组织的纵向延时成像技术，并发现肺泡干细胞在肺泡之间的迁移是修复所需的新细胞机制。目前，我们正在探索不同的信号和细胞-细胞相互作用如何调节这种机制，以及这些机制在疾病中的异常表现。 𐟏력Ÿ𙨮�Ž责任作为团队的一员，你将有机会学习到先进的成像技术、体内小鼠和人体组织平台、尖端的单细胞多组学方法、基于微流体的方法以及体内单细胞激光消融技术。你还将协助首席调查员进行研究，参与日常实验室操作，分析数据，准备手稿和演示文稿，并协助准备数字和文本以提交赠款。此外，还需要承担一些行政职责，如实验室安全、订购用品、设备维护以及数据库维护。 𐟎“ 教育与资格申请人应拥有或接近获得遗传学、细胞生物学、分子生物学、发育生物学或相关领域的博士学位。 𐟒𜠥…𓩔验和能力拥有鼠标遗传模型的实践经验对肺上皮干细胞领域有浓厚兴趣掌握基本的哺乳动物细胞/分子生物学技术熟练应用2P和共聚焦显微镜能够使用ImageJ、IMARIS等工具进行定量图像处理和分析熟练使用R和Matlab等编程语言在高影响力的科学期刊上发表研究结果，并出席国际会议表现出高度的个人主动性和时间管理能力能够有效地安排时间，以实现短期和长期目标能够与他人合作，并具有出色的沟通技巧，能够保持准确和翔实的实验室笔记本，并创建和提供面对面的演示文稿。我们期待你的加入，共同探索肺部修复的奥秘！

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T细胞杀伤肿瘤细胞，这个视频使用活体成像技术来观察小鼠T细胞杀死小鼠肿瘤细胞。总成像时间超过6小时，每20秒拍摄一张图片。小小春花儿的微博视频

小动物活体成像常见问题解答 𐟐�”슑: 荧光素酶的发光是否需要激发光？ A: 荧光素酶的发光是生物自发过程，不需要激发光，但需要底物荧光素（Luciferin）。 Q: 在体外的细胞培养中，为什么要经常用抗生素筛选？ A: 在体外培养过程中，虽然不筛选也可以，但建议使用抗生素筛选，特别是接种代数较多时。这样可以保证细胞发光的强度，常用的抗生素有puro、bsd等。 Q: 底物荧光素（Luciferin）是如何进入小鼠体内的？需要多少？ A: 荧光素通常通过腹腔注射或尾部静脉注射进入小鼠体内。腹腔注射后约一分钟即可扩散到全身，但发光较慢且持续时间长。静脉注射则扩散迅速，发光快但持续时间短。一般情况下，150mg/kg的荧光素足够，20克的小鼠约需3mg。 Q: 荧光素酶的发光特性如何？ A: 注射荧光素酶后，小鼠体内的发光通常在15-35分钟达到最高峰，持续20-30分钟后开始衰减，三小时后完全消失。建议实验人员在进行不同实验前绘制连续时间点的发光曲线，以确定最佳检测时间。 Q: 如何保证荧光素酶（Luciferase）的稳定性？ A: 荧光素酶基因被插入细胞染色体上，随着细胞的分裂、转移和分化，荧光素酶会持续稳定表达。 Q: 标记的肿瘤接种后，会发生Luciferase的丢失吗？ A: 标记的细胞在动物体内存活多年仍能持续发光，说明Luciferase基因的标记非常稳定，丢失的可能性极小。 Q: 可以用肿瘤块而不是细胞接种吗？ A: 可以先用标记的细胞在皮下接种，然后取出肿瘤块进行原位接种。 Q: 标记细胞与标记基因所用的启动子有何不同？ A: 标记细胞一般使用能在细胞内稳定表达的启动子，显示细胞的数目。标记基因则使用该基因的启动子，显示该基因的表达数目。 Q: 荧光素酶的表达高低与所用启动子的活性有关吗？ A: 是的，启动子的活性越高，荧光素酶的表达水平也越高。

小鼠活体成像技术是种功能强大的生物医学研究工具

小动物活体成像实验常见问题解答 𐟔✨ 小动物活体成像实验疑难解答 𐟒ᑱ. 荧光素酶有哪些种类？特性如何？ 𐟔𙧭”：常见的荧光素酶有两种：Luciferase和Renilla荧光素酶。Luciferase的底物是D-luciferin，发光波长在540-600nm，容易透过组织；Renilla荧光素酶的底物是coelentarizine，发光波长在460-540nm，体内代谢较快。𐟔슊𐟒ᑲ. 组织切片能否观察到生物发光？ 𐟔𙧭”：可以，但荧光素酶在体外的活性保持时间较短，大约只有几十分钟。有相关文献支持这一观点。𐟓– 𐟒ᑳ. 正常成体小鼠能否看到体内发光？是否必须使用裸鼠？ 𐟔𙧭”：可以！成体小鼠与裸鼠、幼鼠及胚胎的主要区别在于对可见光的穿透性。可见光穿透能力达3-4cm，因此大鼠也适用。𐟐튊𐟒ᑴ. 荧光素酶的发光强度与细胞数量有何关系？ 𐟔𙧭”：成正比！荧光素酶的发光强度与标记的细胞、基因、细菌和病毒的数量成正比。𐟓ˆBrian Ross的研究已证实这一点。 𐟒ᑵ. 荧光素酶发光波长与体内穿透性有何关联？ 𐟔𙧭”：荧光素酶发出偏红光，其穿透性比绿色荧光蛋白强近百倍。因为血红蛋白主要吸收蓝绿光波段，而对红光波段吸收作用小。𐟌ˆ 𐟒ᑶ. 为何推荐用RFP而非GFP检测体内发光？ 𐟔𙧭”：红光在体内的穿透性比绿光强近百倍。在条件允许下，建议选择波长较长的荧光染料。𐟔𔰟’š

小动物活体成像，照亮科学路小动物活体成像技术是一种强大的工具，它利用生物发光现象来可视化生物体内的动态过程。这种技术主要基于荧光素酶基因的标记，通过将Fluc基因整合到细胞染色体DNA上，使得细胞能够表达荧光素酶。当细胞被注射荧光素（luciferin）后，它们会在几分钟内发出可见光。这种发光现象在活细胞内发生，并且光的强度与标记细胞的数目线性相关。 𐟔 生物发光成像系统体内可见光成像系统主要由三部分组成： CCD镜头：选择合适的CCD镜头对于体内可见光成像是至关重要的。成像暗箱：暗箱能够屏蔽宇宙射线及一切光源，使暗箱内部保持完全黑暗，确保CCD检测的光线完全来自被检动物体内。软件系统：软件系统负责仪器控制和图像分析。 𐟧젦 ‡记细胞的方法通过分子生物学克隆技术，将荧光素酶基因插入到预期观察的细胞的染色体内，然后通过单克隆细胞技术的筛选，培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株。 𐟌ˆ 结果观察将标记好的细胞注入小鼠体内后，观测前需要注射荧光素酶的底物——荧光素。注射一次荧光素能保持小鼠体内荧光素酶标记的细胞发光30-45分钟。使用高度灵敏的制冷CCD相机及特别设计的成像暗箱和成像软件，可以观察到细胞的发光情况。 𐟌᯸ 光学原理光在哺乳动物组织内传播时会被散射和吸收，光子遇到细胞膜和细胞质时会发生折射现象。不同类型的细胞和组织吸收光子的特性并不一样。在偏红光区域，大量的光可以穿过组织和皮肤而被检测到。在相同的深度情况下，检测到的发光强度和细胞的数量具有非常好的线性关系。可见光体内成像技术的基本原理在于光可以穿透实验动物的组织并且可由仪器量化检测到的光强度，同时反映出细胞的数量。 𐟔젥ꌨ🇧苊通过分子生物学克隆技术，应用单克隆细胞技术的筛选，将荧光素酶基因稳定整合到预期观察的细胞的染色体内，培养出能稳定表达荧光素酶蛋白的细胞株。

小动物活体成像技术：15个关键问题解答荧光素酶有两种常见的类型：Luciferase和Renilla荧光素酶。它们的底物不同，前者使用D-luciferin，后者使用coelentarizine。这两种酶的发光颜色也不同，Luciferase的光波长在540-600nm，而Renilla荧光素酶的光波长在460-540nm。Luciferase的光更容易穿透组织，而Renilla荧光素酶在体内的代谢速度较快。大多数发表的文章使用Luciferase作为报告基因，但也有一些文章使用两者进行双标记。 11. 组织切片能否观察到生物发光？可以，但荧光酶在体外的活性保持时间较短，大约只有几十分钟。有相关文献支持这一点。 12. 正常成体小鼠能看到体内发光吗？是否需要裸鼠？可以。成体老鼠、裸鼠、幼鼠和胚胎的区别主要在于对可见光的穿透性不同。正常情况下，成体老鼠的体内发光是可以观察到的。可见光的穿透能力大约在3-4cm，因此大鼠也可以作为活体成像的动物，并且有很多关于大鼠的文章。 13. 荧光素酶的发光强度与细胞数量成正比吗？是的，荧光素酶的发光强度与标记的靶点数量成正比，包括细胞、基因、细菌和病毒。密西根大学的Brian Ross发表的一篇文章专门研究了这个问题，确定荧光素酶的发光强度与细胞数成正比关系，并且线性关系到0.9以上。 14. 荧光素酶发光的波长与体内穿透性有何关系？荧光素酶发出的光主要是偏红光，与绿色荧光蛋白（GFP）的绿色荧光不同。荧光素酶的偏红光比GFP的绿光在体内的穿透性要强近一百倍。光在哺乳动物组织内传播时会被散射和吸收，不同类型的细胞和组织吸收光子的特性并不一样。血红蛋白（hemoglobin）是造成体内可见光被吸收的主要因素，其在可见光中蓝绿光波段的大部分吸收作用较强。然而，在可见光大于600纳米的红光波段，血红蛋白的吸收作用却很小。因此，在偏红光区域，大量的光可以穿过组织和皮肤而被检测到。 15. 为什么建议尽量用RFP而不是GFP来检测体内发光？红光比绿光在体内的穿透性要强近一百倍。波长越长的荧光越容易透过组织，因此在条件允许的情况下，建议选择波长较长的荧光染料。

𐟘𒩣Ÿ用色素竟能活体成像？！ 𐟤肋‡塞！你听说过用食用色素实现活体成像吗？这不是开玩笑吧！但确实，有人用这种方法成功了哦！𐟎‰ 𐟔他们是怎么做到的呢？原来，Stanford的一个研究小组发现，一种FDA批准的常见食用色素——柠檬黄tartrazine，可以让活体动物的皮肤、肌肉、结缔组织变得透明！𐟘𐟒ᩀš过给小鼠腹部涂上这种色素，他们成功地将小鼠的腹部变得透明，并观察到了荧光蛋白标记的肠神经元。而且，这种方法无需手术，无需替换overlying tissues，真是太神奇了！✨ 𐟔짎𐥜诼Œ他们已经用这种方法成功观察到了脑血管和肌肉sarcomeres的高分辨率显微成像。这简直就是医学成像的一大突破啊！𐟚€ 𐟒꧜‹来，科学真的是无奇不有，只要我们敢于想象，勇于探索，就一定能发现更多未知的奥秘！加油！𐟒–

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