亚细胞结构前沿信息_亚细胞结构有哪些(2024年12月实时热点)
生物透射电镜样品制备全攻略슧物透射电镜是探索细胞超微结构的神奇工具,它能够揭示细胞的整体结构和亚细胞结构的奥秘。为了充分利用这一工具,我们需要掌握如何制备生物样品,以减少高能电子束对细胞的损伤,并突出细胞的内部形态。 砧𛆨样品的制备 对于直径大于106的细胞,使用细胞刮刀迅速刮取细胞,避免反复刮取。离心后,将细胞收集在管底,形成肉眼可见的2-3粒大米状的样品。如果细胞量过多,可以用细针尖将细胞团块分成小块,然后弃去上清液,沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液,最后放入4℃冰箱保存。 🠧𛇦 𗥓的制备 新鲜取材的组织,大小尽量控制在1-2mmⳣ取材后立即投入4℃预冷的固定液中,然后放入4℃冰箱固定保存。对于无法下沉的样品,可以通过抽真空使其沉下去。 细菌样品的制备 吸取OD0.5-0.8的培养物,离心后弃去培养基,收集菌体沉淀于管底,形成黄豆大小的样品。可以用PBS洗1-2次,弃去上清液,沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液,然后放入4℃冰箱保存。 前处理步骤 倒掉固定液,用0.1M、pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次,每次15分钟。 用1%的锇酸溶液固定样品1-2小时。 小心取出锇酸废液,用0.1M、pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次,每次15分钟。 用梯度浓度的乙醇溶液对样品进行脱水处理,每种浓度处理15分钟,再用100%的乙醇处理20分钟。 最后用纯丙酮处理20分钟。 用包埋剂与丙酮的混合液(V/V=1/1)处理样品1小时。 用包埋剂与丙酮的混合液(V/V=3/1)处理样品3小时。 用纯包埋剂处理样品过夜。 将经过渗透处理的样品包埋起来,70℃加热过夜,即得到包埋好的样品。 将样品在超薄切片机中切片,获得70-90nm的切片。 切片经柠檬酸铅溶液和醋酸双氧铀50%乙醇饱和溶液各染色5-10分钟,晾干后即可在透射电镜中观察。 通过这些步骤,我们可以准备好生物样品,以便在透射电镜下观察细胞的细微结构,探索生命的奥秘。
「阳光信用」 同工酶(Isoenzyme)是指能催化相同的化学反应,但酶的分子结构、理化性质乃至免疫性质不同的一组酶(一同三不同)。同工酶不仅存在于同一机体的不同组织,也存在于同一细胞的不同亚细胞结构中,在代谢调节中起着重要作用。
TEM科研测试,一文搞定! 젧物透射电子显微镜(TEM)是观察和研究细胞超微结构的重要工具。它不仅能揭示细胞的整体结构,还能观察到亚细胞结构的细微变化。为了充分利用这一技术,需要专门应用于生物样品观察的透射电镜,其工作电压通常在80-120kv,以减少高能电子束对生物样品的损伤。 固体取材及送样方法: 细胞类样品:使用细胞刮刀刮下106以上的细胞,经过1500-3000转离心5-10分钟,收集细胞于管底,肉眼可见2-3粒大米状样品。如果细胞量较多,可以用细针尖将细胞团块挑成几个小团块,弃去上清液,沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液,然后放入4℃冰箱保存。 组织类样品:新鲜取材,确保取材位置准确,组织大小尽量在1-2mmⳣ离体取材后立即投入4℃预冷的固定液中,然后放入4℃冰箱固定保存。 细菌类样品:吸取OD0.5-0.8的培养物,离心后弃去培养基,收集菌体沉淀于管底黄豆大小。可以用PBS洗1-2次,弃去上清液,沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液,然后放入4℃冰箱保存。 砥处理步骤: 倒掉固定液,用0.1M、pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次,每次15分钟。 用1%的锇酸溶液固定样品1-2小时。 小心取出锇酸废液,用0.1M、pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次,每次15分钟。 用梯度浓度的乙醇溶液(包括30%、50%、70%、80%、90%和95%)对样品进行脱水处理,每种浓度处理15分钟,再用100%的乙醇处理20分钟。 最后过渡到纯丙酮处理20分钟。 用包埋剂与丙酮的混合液(V/V=1/1)处理样品1小时。 用包埋剂与丙酮的混合液(V/V=3/1)处理样品3小时。 纯包埋剂处理样品过夜。 将经过渗透处理的样品包埋起来,70℃加热过夜,即得到包埋好的样品。 将包埋好的样品在超薄切片机中切片,获得70-90nm的切片。 切片经柠檬酸铅溶液和醋酸双氧铀50%乙醇饱和溶液各染色5-10分钟,晾干后即可在透射电镜中观察。 通过这些步骤,我们可以更深入地了解细胞的内部结构和变化,为科研工作提供有力的支持。
娿五年国自然研究热点速览!劰妌续活跃的研究领域包括: 巨噬细胞、线粒体、免疫调控、细胞代谢、转录调控、泛素化等方向一直备受关注。 铁死亡、m6A/m5C/m7G、脂代谢、中性粒细胞、代谢重编程、细胞焦亡、肿瘤微环境等在近几年开始崭露头角。 细胞衰老在2022年呈现出显著增长,而类器官和胞葬等新兴领域也值得关注。 究热点包括: 血管功能:血管生成重塑、血管生成拟态、血管内皮细胞等方向。 组织生化水平:低氧缺氧、pH值改变、细胞因子分泌、炎症风暴、肠道微生物分泌物、标志物评价等。 细胞间对话:免疫调控、外泌体、迁移体、囊泡、分泌蛋白等。 细胞表型热点:非程序性死亡、自噬、胞葬、炎症小体、细胞衰老等。 重要细胞种类:干细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、T细胞、T-reg细胞等。 亚细胞结构:内质网、高尔基体、核糖体等。 亚细胞定位改变:入核、出核机制等。 代谢重编程:糖脂代谢、糖酵解、铜铁钙离子代谢等。 DNA维度的表观修饰:转录调控、增强子、组蛋白修饰(乙酰化、巴豆酰化、乳酸化、相分离)、染色质重塑等。 RNA维度的表观修饰:RNA甲基化、可变剪接、非编码RNA等。
显微镜选购指南 좜覜没有觉得显微镜这个小家伙特别神奇?它让我们看到了肉眼无法分辨的微观世界,真是打开了一个全新的视角。在你决定入手一台显微镜之前,建议你先了解一下如何选择适合自己的显微镜,以免错买不适合的产品哦! 显微镜的基本构造和功能 显微镜是一种由多个透镜组合而成的光学仪器,主要用于放大微小物体,让我们能够清晰地观察到细节。显微镜的核心部件是物镜和目镜,物镜负责放大物体的图像,而目镜则进一步放大这个图像。显微镜的放大倍数是物镜和目镜倍数的乘积,倍数越高,放大倍率就越大。通常,显微镜会配备多个物镜,比如4X、10X、40X和100X,以便适应不同的观察需求。好的物镜和目镜可以提高成像的清晰度和色彩还原度,让你看到的世界更加真实和生动。 不同类型显微镜的应用늤𝠧婁吗?显微镜的种类可真不少,每种都有它适合的应用场景。正置显微镜是实验室常见的类型,主要用于组织学研究和显微摄影。而倒置显微镜则适合细胞培养观察,因为它的光学系统位于样品上方。激光共聚焦显微镜非常适合细胞的三维成像,可以让你看到细胞的亚细胞结构。还有电子显微镜,它用电子束代替光线,能够观察到细胞和组织的微观结构。了解这些类型的显微镜及其应用,会帮助你在选择时更有方向感。 如何根据需求选择显微镜 在选择显微镜时,首先要考虑你的实际需求。如果你主要是观察生物细胞,那高倍率的生物显微镜可能是你的不二选择。如果关注材料科学研究,金相显微镜的高分辨率和反射性会更适合。此外,预算也是一个不可忽视的因素。在选择时,品牌信誉也是一个重要考量,选择正规厂家和经销商能保证产品的质量。除了这些,显微镜的便携性、护眼设计等人性化功能也值得关注。经过多方考量,再选购一台适合你的显微镜,才不会让你后悔哦! 买显微镜这件事,看似简单却有着许多细节值得注意。希望这篇指南能帮助你更好地了解显微镜的选购技巧。分享一下你的选择经验或者显微镜下的有趣发现吧!쀀
研究基因功能的六大经典策略 说到研究基因功能,其实前辈们已经总结出了一些经典套路,今天就来聊聊这些套路背后的逻辑和方法。 基因必要性:敲除或敲低看看 首先,我们得搞清楚这个基因是不是必要的。常用的方法有DNA层面的基因敲除(比如CRISPR及其衍生技术),RNA层面的RNAi和morpholino,还有蛋白层面的Trim-Away和抗体block。敲除或敲低后,我们要检测一系列指标,从细胞水平到生物体水平,看看这个基因到底有多重要。细胞水平上,我们会关注大小、凋亡和增殖;组织水平上,看形态和分化;生物体水平上,那就复杂了,包括存活、运动、进食、应激和代谢等等。 RNA表达谱:看看基因在不同阶段的表达量 接下来,我们想知道这个基因在不同发育阶段的表达量。常用的技术有原位杂交、RNA测序、单细胞测序和RNA FISH(比原位杂交分辨率更高)。如果你想了解这个基因在模式动物中的表达情况,可以查找DBTMEE和Zfin等数据库。 蛋白表达谱:定位和表达量 蛋白表达谱的检测方法有免疫组化和免疫荧光,可以直接看到蛋白的定位和有无;Western blot则可以看到表达量,虽然比免疫荧光容易,但需要更多样品,且不能分辨细胞类型。尽量两种方法互相佐证。 过量表达效果:看看过表达会怎样 过量表达的效果可以通过DNA水平的转基因和artifical chromosome,或者RNA和蛋白水平的显微注射来实现。检测指标和前面类似,可能会出现在各种层面上,尤其是1中出现异常的地方。同时,过量表达还可以和1中的rescue一起做,更能验证特异性。 相互作用蛋白:找到互作伙伴 通过免疫共沉淀(co-IP)后打质谱,我们可以找到一些已知功能的互作蛋白,把我们的基因放到功能网中。比如,如果质谱结果显示你的基因富集到核孔复合体蛋白,那你的基因很可能是一种与穿核运动有关的蛋白。如果你的蛋白富集到两个复合体,可能暗示了它们通过你的蛋白crosstalk。 转录因子:细胞核里的基因 对于在细胞核里的基因,我们可以猜测是不是转录因子。可以通过网站预测有没有DNA结合结构域。如果没有序列信息,那可以进一步增加实验的精度和拍照的分辨率,看看在细胞核中的具体位置(靠近核膜、与chromatin重合、或者在核仁中)。 细胞质中的蛋白 如果是细胞质中的蛋白,那也需要增加精度,看看在胞质中的具体位置,然后推测一下可能与哪些亚细胞结构有关(线粒体、内质网、Golgi),和这些结构的marker共同染色,看看有没有共定位。这样做的目的就是把你的基因定位到特定的亚细胞结构中,然后进一步推测其功能,再根据不同的细胞器功能去做进一步的对1和4的检测。 希望这些套路能帮到你,让你在研究基因功能时少走弯路!ꀀ
氢医学:抗衰抗老的科学秘密 探索氢医学的奥秘,揭开抗衰抗老的科学面纱! 什么是氢气? 氢气,听起来是不是很熟悉?就是那个给气球打气的氢气。不过,这里的氢气可是有特殊要求的哦!它是一种自然界已知最小分子的气体,能够轻松穿透细胞核等亚细胞结构,具有极强的穿透力。 ꠦ𐔥﹤𝓧作用是什么? 当氢气进入人体后,它通过选择性抗氧化作用来清除体内的有害自由基,包括羟自由基和亚硝酸阴离子。清除这些自由基是缓解炎症反应的关键。 氢医学真的可信吗? 氢医学并不是一种包治百病的神奇疗法,但它确实是一种提升免疫力的有效手段。钟南山院士在《氢气控癌理论和实践》一书中提到:“氢分子医学,因其高选择性、高弥散性和高安全性而备受关注。”此外,许多医学界著名教授也在研究氢医学,如上海交通大学出版社出版的《氢健康趣谈》、上海科学技术出版社的《神奇的氢聊临床实录》以及康敏主编的《浅谈氢分子医学》等。 如何利用氢气提高免疫力? 并不是所有的氢气都可以随意吸入哦!工业用氢气是非常危险的,具有爆炸隐患。家用型氢氧机,如海之圣HZS-HO1000型氢氧机,采用PEM纯水制氢技术,制备的氢气浓度高,安全性也很高。它不仅能制备氢气,还能同时制备氧气,相当于拥有了一台吸氢机和吸氧机。 砩䤺吸氢气,还可以喝氢水! 海之圣的超饱和富氢水杯可以在5分钟内制出浓度高达3000ppb的富氢水,99%的高纯度制氢纯度,真的是人手必备!虽然不能随时吸氢气,但有了氢水杯,富氢水就可以随时享用了。 探索更多关于氢医学的知识,让我们一起揭开抗衰抗老的科学面纱吧!
超声波细胞粉碎机 在分子生物学实验室中,有一款设备被誉为“万能工具”,它就是美国Sonics的超声波破碎仪。这款设备以其卓越的性能和耐用性,成为科研人员的得力助手。 应用领域广泛: 生物学:用于处理动植物细胞、大肠杆菌、酵母菌、链球菌、葡萄球菌等生命科学研究。 医学:微生物检验样品的破碎,适用于检验科微生物科等。 农学:提取叶绿体等亚细胞结构、提取植物蛋白和核酸。 制药:EPO(红细胞生长素)等转基因细胞、细菌的破碎,新药开发部门。 材料学:纳米、微米材料的制备、分散。 化学:高分子聚合物、改变分子量。 物理学:乳化、清洗、分散、消泡等。 ꠥ质保证: 美国Sonics 品牌成立于60年前,以其卓越的品质和耐用性,在全球销量领先。许多仪器已经使用了5-10年,甚至20年以上,依然保持着良好的性能。 性价比之选: 如果您追求性价比,同时又担心产品质量,那么美国Sonics的超声波破碎仪无疑是您的理想选择。 想要了解更多关于这款设备的信息,或者寻找其他相关产品,欢迎继续探索。
亚细胞定位实验常见问题解答 什么是亚细胞定位? 亚细胞定位是指生物大分子物质或脂类在细胞内的具体位置。蛋白质在细胞质中合成后,通过蛋白质分选信号被转运到特定的亚细胞结构中,参与细胞的各种生命活动。这个过程称为蛋白质亚细胞定位。 实验原理 利用GFP、RFP等荧光蛋白的独特荧光性质和灵敏性,可以示踪细胞内的蛋白。将目标蛋白与荧光蛋白的N端或C端融合,通过瞬转或稳转,使融合蛋白在受体材料细胞内表达。目标蛋白会牵引荧光蛋白一起定位到目标细胞器。经过激光共聚焦显微镜激光照射,荧光蛋白会发出荧光,通过观察荧光蛋白在细胞内显示的位置,可以确定目标蛋白的亚细胞定位情况。 常见问题 构建亚细胞定位载体时,GFP融合位置为什么有N端、C端之分? 如果序列中存在信号肽,构建载体时需避开这一端来融合荧光蛋白。不同的融合方式可能会得到不同的定位结果,例如融合在荧光蛋白N端的目标蛋白一般无法得到过氧化物酶体的定位结果;融合在荧光蛋白C端的目标蛋白一般无法得到线粒体、质体的定位结果。 为什么不同的受体材料有时得到的定位结果不一样? 不同物种的细胞在翻译表达基因时,其表达模式和影响因子不同。受物种差异的影响,同一个载体在不同的受体材料中表达的位置可能不同,因此建议实验时尽可能选用与目的基因来源相近的受体材料进行表达。 为什么要提供GFP空载的对照图片? 作为整个实验过程中的操作参照,可排除因实验操作而导致目的基因没有荧光信号的影响。作为载体体系的参照,确认构建载体时所使用的载体是可正常表达荧光蛋白的。 拍摄时为什么有明场通道? 显示细胞状态,有活力的细胞应该有正确且明显的细胞形态,变形或破碎的细胞说明此时细胞不是最适状态或细胞已死亡。显示荧光确实是细胞内蛋白表达的,而不是细胞碎片及杂质产生的杂光。 为什么不先对基因做预测,在预测的结果上直接做共定位? 不同的预测网站有不同的计算方法,同一个基因在不同的预测网站也可能得出不同的定位结果。另外所有的结果都应是基于实验得到的,对于不清楚可能定位在哪里的基因,一般推荐先做普通定位,根据普通定位的结果再决定做哪种细胞器的共定位。 适用于什么实验场景? 基因功能研究:文章里总少不了这一项。 研究蛋白相互作用:与酵母双杂实验结果相互验证。
英文名:Cell-Tracker Red CMTPX 中文名:活细胞示踪探针(红色) 供应商:陕西新研博美生物科技 Emission (Em):614 Excitation (Ex):586 分子式:C42H40ClN3O4 分子量:686.24 规格:5mg,10mg,25mg 纯度:≥95% 外观性状:蓝色到深蓝色固体 CellTracker Red CMTPX具有细胞透性,可作为细胞示踪剂用于监测细胞运动和定位。Cell-Tracker Red CMTPX是一种性能优异的活细胞示踪探针(红色),广泛应用于细胞生物学研究中。该探针具有出色的荧光特性和光稳定性,能够在长时间观察中保持稳定的荧光强度,确保持续、准确地追踪细胞的变化。Cell-Tracker Red CMTPX能自由穿透细胞膜进入细胞,并在细胞内转化为不具细胞膜渗透性的反应产物,这种产物能在几代细胞中保留,且对细胞毒性较小,不影响细胞的正常生理功能。其荧光信号通常表现为红色,激发波长和发射波长分别为577nm和602nm左右,这一特性使其成为荧光显微镜成像或流式细胞仪分析的有用工具。此外,Cell-Tracker Red CMTPX还具有优秀的特异性和稳定性,能够在各种实验条件下对细胞进行准确的追踪和定位,适用于细胞迁移、细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡以及细胞亚细胞结构等方面的研究。
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如图1所示为某细胞的亚显微结构示意图,请回答下列问题
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如图甲,乙分别是两类高等生物细胞的亚显微结构模式图,请据图
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下图是植物细胞亚显微结构的示意图,请据图回答
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