当前位置：网站首页 » 观点 » 内容详情

pbmc细胞权威发布_pbmc细胞培养方法(2024年12月精准访谈)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：观点更新日期：2024-12-02

pbmc细胞

T细胞的提取与培养指南（上） ### T细胞的提取 𐟧슥‡†备工作：将淋巴细胞分离液提前放在常温下复温，使用前记得颠倒混匀，避免影响实验效果。收集血液：取5ml新鲜人血，放入含有肝素抗凝剂的抗凝管中。然后取5ml PBS溶液，放入15ml的EP管中。接着将血液加入PBS中进行稀释。分离淋巴细胞：向EP管中加入5ml淋巴细胞分离液（淋巴细胞分离液：PBS：全血=1：1：1），将稀释后的全血沿管壁缓慢加入分离液中，使血液铺在分离液的上方，不能充分混合，保持中间液面清晰。离心分离：在室温条件下，以800g的转速用水平转子离心30分钟。将加速度与减速度设置成较慢的档位。收集细胞层：离心完毕后，EP管中的液体分为四层，管底部为红细胞，顶部为血浆或组织的匀浆层，中间层是细胞分离液，顶部的血浆层与中间部分分离液层的之间有较薄并且致密的一层白膜，即为淋巴细胞与单核细胞层。将这层致密的白膜缓慢吸到另一个15ml离心管中。洗涤细胞：加入三倍体积的PBS溶液将带有白膜的溶液进行稀释，充分颠倒混匀后，于室温以250g的转速用水平转子离心10分钟，随后弃掉上清，此步骤重复2次进行充分洗涤。 T细胞的提取与培养 𐟌𑊤𝿧”蔧𛆨ƒž分选试剂盒：该分选原理为，试剂盒中的磁珠将PBMC中的非T细胞成分结合，T细胞可以通过磁珠，收集流出液即可得到T细胞，从而将PBMC中的T细胞与非T细胞分离开来。孵育细胞：将细胞与磁珠进行孵育，以下体系针对107个细胞（不超过10ml外周血）进行操作。计数细胞：取出前期分离的PBMC，通过细胞计数确定其中的细胞数量。重悬细胞：向其中加入40的Buffer进行重悬混匀。标记T细胞：加入10 Pan T Cell Biotin Antibody Cocktail，进行吹打混匀后，将其放入4℃冰箱中避光孵育大约5分钟。再次重悬：从冰箱中取出后，加入30 Buffer进行重悬混匀。结合磁珠：随后向其中加入20 Pan T Cell MicroBeads Cocktail进行吹打混匀，将其放置于4℃冰箱中，避光孵育大约10分钟。分选T细胞：将分选柱安装在磁力架上，使用3ml Buffer对分选柱进行润洗。将样品加入分选柱中，收集管底流出的液体。样品流出后，再加入3ml Buffer对柱子进行润洗，将流出液收集起来。以上两部分流出液即为获得的T细胞。培养T细胞：将获得的T细胞用PBS溶液进行垂悬后，2000 rpm，离心四分钟，清洗两次后，加入1640完全培养基吹打混匀，铺于培养皿中进行培养。

单核/巨噬细胞流式分析：新手必读指南 𐟑‹大家好，今天我们来聊聊单核/巨噬细胞流式分析的基础知识，适合新手小白哦！单核细胞的基本知识 𐟧 单核细胞在人体内可是个勤奋的小家伙，它们在脉管系统、骨髓和脾脏中不停地循环。在正常情况下，它们不会增殖，但一旦迁移到外周组织，就会分化成树突状细胞或巨噬细胞。单核细胞的特性是它们具有可塑性和异质性，能够快速调整功能表型来适应环境的变化。单核细胞的培养 𐟧늊想要研究单核细胞，首先得把它们从血液或其他组织中分离出来。你可以用阴选试剂盒从 PBMC 中分离出有活性的单核细胞，也可以用 CD14、CD64 和 CD192 作为标志物进行流式分选。原代人单核细胞可以在体外培养，但在 5 天内会在血清或 M-CSF 存在下开始分化为巨噬细胞。单核细胞以粘附和非粘附细胞混合形式生长，比例取决于培养基和刺激因子。除了原代单核细胞，THP-1 细胞系也常用于研究。它们特别依赖细胞浓度，ATCC 建议的浓度是 10E5~10E6/mL。状态不好的 THP-1 培养 3 天后数量不多，继续培养 1~2 天，培养基会严重泛黄。THP-1 适合在 pH 偏酸性环境生长，对培养基很敏感，不宜频繁换液，尽量用相同酸碱度的 1640 培养基。复苏 THP-1 细胞有难度，建议冻存时密度大些，复苏时用小培养瓶。流式分析巨噬细胞的注意事项 𐟎在分析巨噬细胞时，首先要处理组织，比如解剖、研磨、剪碎等，然后酶消化制备单细胞悬液。在上机检测前建议将样本过滤，保证准确性，还能避免堵管。单核细胞可以用特殊分化培养基分化为巨噬细胞，用 GM-CSF 和 M-CSF 能让单核细胞分化。在 1640 培养基中刺激单核细胞，添加相应物质能导致 M1 或 M2 极化。还可以用不同细胞因子先后刺激单核细胞来获得 M1 和 M2 极化。用 PMA 刺激 6 小时能诱导 THP-1 来源的巨噬细胞，然后继续培养能让其向 M1 或 M2 极化。希望这些基础知识能帮到你们，赶紧动手试试吧！𐟒ꀀ

单细胞转录组分析：数据下载与质控全流程在进行单细胞转录组分析之前，除了原始数据，我们还需要收集一些重要的元数据（metadata）。元数据是关于数据来源和实验条件的信息，这对于后续的数据处理和解读至关重要。以下是我们数据集的一些关键元数据：文库制备方法：使用10XGenomics第二版化学方法制备。测序平台：样品在Illumina NextSeq 500测序仪上进行测序。实验分组：8例狼疮患者的PBMCs（外周血单个核细胞）被分成两组。一组PBMCs加入100U/ml重组IFN-ˆ𚦿€，持续6小时；另一组PBMCs未经任何处理。样本汇集：6小时后，将每种条件下的8个样本汇集到两个最终组中（受刺激细胞和对照细胞）。捕获细胞数量：对照组和受刺激的混合样本分别捕获了12138和12167个细胞（去除双重液滴后）。预期细胞类型：由于样本是PBMC，我们期望能够划分出免疫细胞，如B细胞、T细胞、NK细胞、单核细胞、巨噬细胞和类巨核细胞。在开始数据分析之前，进行质控（QC）是非常重要的步骤。质控的目的是确保数据的准确性和可靠性，发现并排除任何可能的实验误差或技术问题。通过检查原始数据的质量，我们可以评估数据的完整性、一致性以及是否存在异常值或偏移。在进行质控时，我们通常会关注以下几个方面：数据格式和文件完整性：确保所有必要的文件都已下载，并且格式正确。数据质量评估：使用适当的工具和方法来评估数据的整体质量，包括检查序列长度、序列质量分数等。样本匹配和重复性：检查样本之间的匹配程度和重复性，以确保数据的可靠性和代表性。数据预处理：在进行正式的转录组分析之前，可能需要进行一些预处理步骤，如去除低质量序列、去除接头序列等。通过以上步骤，我们可以确保我们的单细胞转录组数据是高质量的，并且可以进行有效的生物信息学分析。

细胞重编程 𐟒Ž 巨噬细胞与TREM2：免疫细胞中的明星 𐟌Ÿ TREM2在脾脏和骨髓中高表达，而在正常心脏组织中相对较低。与其他免疫细胞相比，BMDMs中TREM2的表达最高。外周白细胞的RNA-seq分析显示，TREM2也在树突状细胞和单核细胞中表达，但巨噬细胞是表达TREM2的主要细胞。 𐟒‰ TREM2+巨噬细胞在心肌梗死中的作用 𐟒‰ 心肌梗死后，心脏中TREM2的表达水平明显高于假性心脏，主要在梗死区和边缘区表达。大多数TREM2+细胞是CD68+巨噬细胞。为了进一步了解哪个亚群的巨噬细胞是TREM2增加的来源，作者对心脏中的巨噬细胞进行了划分。这些发现表明，心肌梗死患者PBMCs中TREM2表达的升高可能是由于TREM2表达的诱导，而不是单核细胞数量的变化。 𐟔砥𗨥™짻†胞特异性TREM2缺陷对心肌梗死的影响 𐟔犤𘺤𚆧 ”究TREM2+巨噬细胞对心肌缺血的具体影响，作者产生了巨噬细胞中TREM2的条件性基因敲除。结果表明，巨噬细胞中TREM2的特异性敲除导致心脏功能显著下降。Masson染色显示，Mac-TREM2KO组整个心脏的一系列切片纤维化减少，梗死区左心室壁厚度显著下降。进一步的组织学评估表明，Mac-TREM2KO小鼠体内坏死细胞的清除能力受损，纤维化生成减少，两组小鼠的血管生成情况没有明显差异。此外，作者还对巨噬细胞亚群进行了细胞学评估，结果表明，TREM2可能调控巨噬细胞的功能和极化，但TREM2的缺乏并不影响外周血中中性粒细胞或单核细胞的总数。 𐟚렧ᮨ𘻨恤𝜧”觚„巨噬细胞来源 𐟚늤𘺤𚆨🛤𘀦�ᮨ“ꧧ来源的巨噬细胞在MI中发挥了主要作用，作者用CCR2趋化因子受体拮抗剂RS504393阻断了循环中单核细胞的招募，但这并不影响常驻巨噬细胞的数量。结果表明招募的CCR2+TREM2+巨噬细胞在心肌梗死中起了作用，而不是TREM2+常驻巨噬细胞。

T淋巴细胞激活的流式检测指标详解 𐟌🠔细胞介导的免疫应答是细胞免疫的核心，而T淋巴细胞的活化则是这一过程的关键。活化的T细胞表面会表达多种分子，包括CD69、CD25、CD38、CD71和HLA-DR等。Ki67的表达与CD71呈正相关。在激活的早期（30-60分钟），CD69基因的转录表达可以被检测到，但在4-6小时后迅速下降；而CD69蛋白的表达在刺激2-3小时后就能被检测到。因此，CD69被广泛用作早期活化的标记物。 𐟌🠤𝓥䖥ˆ𚦿€T细胞的方法包括使用anti-CD3和anti-CD28的抗体或磁珠，PHA, PMA等。例如，使用PHA体外刺激PBMC，然后将PBMC置于37℃，含有7%的CO2的培养箱中继续培养，检测不同时间点CD3阳性细胞群中CD25、CD69、CD71和HLA-DR的表达。结果显示，CD69是最早被检测到的分子，在15小时达到峰值，之后随着时间延长，表达量降低；CD25和CD71在刺激15小时后才能被检测到，并分别于刺激后144小时和96小时达到峰值。HLA-DR在刺激后的峰值表达量最低，但HLA-DR、CD25和CD71在刺激后可在较长一段时间内维持较高的表达。 𐟌🠃D38和Ki67也是T细胞的活化抗原，且Ki67的表达与CD71的表达呈正相关。用Anti-CD3/CD28抗体体外刺激PBMC、CD4+和CD8+细胞上的CD25、CD69、CD38、CD71和Ki67后，各时间点的表达量如图2和图3所示。刺激早期就可以检测到CD69的表达，在刺激4小时内可以检测到CD25、CD71、CD38的表达，但Ki67在刺激4小时未见明显增加；刺激后6小时，CD8+细胞群的CD25、CD69和CD38表达量显著上调，而在CD4+细胞群中这些活化抗原表达量未见明显变化，Ki67在CD4+和CD8+细胞群中表达量都显著上调；刺激后24小时，CD4+和CD8+细胞群中的CD25和CD69表达都大于90%，CD71和Ki67在CD8+细胞群的表达明显高于其在CD4+中的表达；刺激后48小时，CD25、CD69、CD71和Ki67在CD4+和CD8+细胞群的表达量均达到90%以上且一直持续到72小时（除CD69），CD69的表达在刺激后72小时则呈下降趋势；CD38在CD8+细胞群的表达于刺激后48小时达到90%以上，而在CD4+细胞群则在刺激后72小时达到90%以上。

2024年10月28日，徐州医科大学吕凌、南京医科大学周浩明共同通讯在Advanced Science 在线发表题为“E2F2 Reprograms Macrophage Function By Modulating Material and Energy Metabolism in the Progression of Metabolic Dysfunction-Associated Steatohepatitis”的研究论文。该研究表明，巨噬细胞E2F2的表达在小鼠和人类的MASH肝脏中显著下调，并且这种表达与疾病的严重程度呈负相关。髓系特异性E2F2耗竭会加剧MASH进展过程中的肝内炎症、肝星状细胞活化和肝细胞脂质积聚。从机制上讲，E2F2可以直接抑制SLC7A5转录。E2F2缺乏会上调SLC7A5的表达以介导氨基酸通量，从而以Leu-mTORC1依赖的方式导致糖酵解增强、线粒体功能受损和巨噬细胞促炎反应增加。此外，生物信息学分析和CUT&Tag分析确定Nrf2与E2F2启动子直接结合，促进其转录和核转位。Nrf2的遗传或药理学激活可有效激活E2F2以减弱MASH进展。最后，用CDK4/6抑制剂治疗的患者在PBMCs中表现出E2F2活性降低但SLC7A5活性增加。这些发现表明巨噬细胞E2F2通过SLC7A5-Leu-mTORC1信号通路重新编程氨基酸代谢来抑制MASH进展。激活E2F2有望成为MASH的治疗策略。「iNature」

LAK细胞是什么细胞 𐟛LAK细胞大家可能比较陌生，并不明白这种细胞到底是什么细胞，同时也不明白这种细胞对身体有什么作用，下面做详细的分析与介绍。𐟥‡ LAK细胞，全称为“lymphokine-activated killer cells”，即淋巴因子活化杀伤细胞。这是一种通过体外培养和特定的激活因子（如白介素-2，IL-2）处理外周血单个核细胞（PBMCs）或淋巴细胞后产生的免疫细胞。LAK细胞具有杀伤肿瘤细胞的能力，其功能类似于自然杀伤细胞（NK细胞）和细胞毒性淋巴细胞（CTL）。𐟒 LAK细胞的功效与作用𐟌Ÿ 1、抗肿瘤作用：LAK细胞具有广谱抗瘤作用，能够识别和攻击多种肿瘤细胞，包括肾细胞癌、恶性黑色素瘤、白血病等。当LAK细胞接受适当的激活因子刺激时，会释放多种细胞毒性分子，如穿孔素和肿瘤坏死因子（TNF），以杀伤肿瘤细胞。𐟓⊲、免疫治疗：LAK细胞疗法可以作为一种综合免疫治疗手段，通过体外扩增和激活LAK细胞，然后将其输注回患者体内，从而增强机体对肿瘤细胞的免疫攻击能力。𐟘𚊳、联合治疗效果更佳：LAK细胞与IL-2联合使用，能够显著提高治疗效果，因为IL-2能够维持LAK细胞在体内的杀伤活性。𐟥Ž 𐟑𖌁K细胞在治疗的时候也有一些注意事项，可以参考图片内容，别忘了点赞并留言分享你的看法哦！𐟖#LAK细胞#

台盼蓝vs AO/PI，谁更胜一筹？细胞计数和状态判断是生物学研究中的重要环节，其中台盼蓝染色法和AO/PI染色法是两种常用的方法。以下是这两种方法的详细介绍： 𐟔 台盼蓝染色法台盼蓝：蓝灰色粉末，溶于水，微溶于乙醇，不溶于其他有机溶剂。它是一种细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，从而判断细胞是否存活。实验原理：活细胞胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使其无法进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。因此，细胞膜完整性丧失通常意味着细胞已经死亡。借助台盼蓝染色，可以快速区分活细胞和死细胞。染色浓度：一般成品试剂为0.4%的储存液，使用时需稀释10倍。优点：价格低廉。缺点：在PBMC分离过程中，红细胞可能残留，其大小与PBMC接近，台盼蓝法无法分辨红细胞与活的PBMC，可能导致浓度与活率差异；CHO细胞在培养过程中会产生细胞碎片和杂质，台盼蓝法无法准确区分。 𐟌ˆ AO/PI染色法 AO/PI：指吖啶橙（AO）和碘化丙啶（PI）的组合。吖啶橙（AO）：可以发出绿色荧光的DNA结合染料。碘化丙啶（PI）：可以发出红色荧光的DNA结合染料。染色原理：AO可以通过完整的细胞膜，嵌入所有细胞的细胞核，呈现绿色荧光；PI只能通过不完整的细胞膜，即死细胞的细胞膜，嵌入所有死细胞的细胞核，呈现红色荧光。当两种染料均存在于细胞核内时，在合适的AO、PI配比下，两种染料发生能量共振转移，死细胞在绿色通道下激发出红色荧光。染色浓度：一般都是买的成品试剂。优点：弥补了台盼蓝染色法的不足；由于AO和PI为DNA结合染料，可有效排除杂质以及红细胞的干扰，确保对样品进行准确计数。缺点：成品试剂的成本较台盼蓝高。通过以上介绍，可以看出台盼蓝染色法和AO/PI染色法各有优缺点，选择时需根据具体实验需求和条件来决定。

生物信息学个性化分析服务，满足不同需求！我们上海仟奥盈福生物科技有限公司由三位海归博士共同创立，专注于提供生物信息学的个性化分析服务。自成立以来，我们已经为众多客户提供了专业的解决方案。通过对客户需求的细致分析，我们发现需要生物信息学分析服务的人群主要可以分为三大类：学生、医生以及实验室PI或博士后研究员。 𐟎“ 学生群体学生群体通常面临毕业论文的压力，但可能在生物信息学分析方面缺乏必要的技能。大致可以分为两类： 1.1 有自己的单细胞测序数据，但缺乏分析能力，可能是完全不懂分析，或者虽有一定的分析基础，但缺乏熟练使用package和debug的能力； 1.2 没有自己的单细胞数据，需要通过TCGA或GEO数据库进行数据挖掘和分析。 𐟑颀⚕️ 医生群体医生群体可能因为日常工作繁忙，缺乏进行数据分析的时间。他们的情况也可以分为两类： 2.1 拥有资金和样本资源，比如基金资助和来自患者的样本（cancer/pbmc等等），但在送样后，缺乏分析、制图和撰写文章的时间； 2.2 缺乏样本资源，同样需要利用TCGA或GEO数据库进行数据挖掘和分析。 𐟔젧瑧 ”团队科研团队，尤其是那些规模较小的实验室，PI可能没有专业生信分析的学生或者RA。那么我们公司能够接收这些团队的测序数据，并提供个性化分析、答疑和无限次的修图服务。我们的服务不仅直接面向PI，也包括与博士后研究员的合作。一般情况下，PI或者博后，通常都拥有自己的测序数据，只是需要进行个性化的分析。

细胞计数新选择，8通道高速计数器 𐟎‰ 细胞计数的新时代来临！这款全新的pbmc计数器，不仅性能卓越，而且操作简便，让你的实验更加高效。𐟚€ 𐟔젦— 需使用一次性计数板，节省成本，减少浪费。𐟒𘊊𐟌 拥有8个通道，一次可以检测8个样品，大大提高了检测速度。⚡ 𐟏… 选择这款计数器，让你的细胞计数更加准确、快速，实验数据更加可靠。𐟓Š

专栏内容推荐

5000 x 5000 · jpeg
人类PBMC的简介_pbmc细胞-CSDN博客
素材来自:blog.csdn.net
2500 x 2357 · png
你的血液里究竟有什么？
素材来自:chemicalbook.com

821 x 829 · png
外周血单个核细胞（PBMC）-企业官网
素材来自:sakumedical.com
600 x 448 · jpeg
PBMC细胞-上海沪震生物科技有限公司
素材来自:hbzhan.com

1024 x 794 · jpeg
细胞系列【1】PBMC细胞的解读 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com
1280 x 1024 · jpeg
PBMC污染？求鉴定和指导 - 细胞技术讨论版 -丁香园论坛
素材来自:dxy.cn

640 x 853 · jpeg
外周血单个核细胞（PBMC） - 细胞技术讨论版 -丁香园论坛
素材来自:dxy.cn
640 x 853 · jpeg
外周血单个核细胞（PBMC） - 细胞技术讨论版 -丁香园论坛
素材来自:dxy.cn

1080 x 697 · jpeg
细胞专刊 | PBMC/人骨髓单个核细胞_正常人pbmc数量-CSDN博客
素材来自:blog.csdn.net
900 x 657 · jpeg
PBMC细胞提取怎么操作？看看这篇分享 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

1000 x 909 · gif
一种PBMC细胞的冻存方法及复苏方法与流程
素材来自:xjishu.com
1000 x 671 · gif
一种CD40联合PD-L及细胞因子扩增PBMC的方法与流程
素材来自:xjishu.com

650 x 458 · jpeg
一种快速的分类外周血PBMC细胞亚群的方法_生物器材网
素材来自:bio-equip.com
1500 x 1101 · jpeg
PBMC细胞|人外周血单核细胞价格,详情介绍-960化工网 – 960化工网
素材来自:chem960.com

4032 x 3024 · jpeg
科研小白，请教各位前辈指教：PBMC培养48h后流式检测T细胞凋亡发现细胞凋亡的很多。-丁香实验
素材来自:pro.biomart.cn
1024 x 645 · jpeg
Ficoll密度梯度离心法提取PBMC原理及注意事项-丁香实验
素材来自:biomart.cn

1024 x 795 · jpeg
一文解读PBMC：药物研发的最佳搭档 - 儒百生物科技
素材来自:schbio.com
812 x 733 · png
细胞の计数系列【1】全血中PBMC细胞的提取分离与检测-深圳市亨睿生物科技有限公司
素材来自:szhrbio.com

1300 x 1300 · jpeg
PBMC丨PBMC细胞丨外周血单个核细胞价格_品牌:IPHASE-丁香通官网
素材来自:biomart.cn
450 x 345 · jpeg
动员外周血单个核细胞PBMC品牌：IPHASE北京规格:1ml-盖德化工网
素材来自:china.guidechem.com

1080 x 1079 · jpeg
PBMC 人外周血单个核细胞 PBMC细胞分离服务价格_品牌:YaYuBio-丁香通官网
素材来自:biomart.cn
590 x 443 · jpeg
LONZA外周血单个核细胞PBMC
素材来自:bjzeping.com

600 x 450 · jpeg
细胞系列【1】PBMC细胞的解读 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com
720 x 526 · jpeg
PBMC细胞提取怎么操作？看看这篇分享 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

900 x 283 · png
【罗工秘籍4】在做免疫细胞分型时，CD45可有可无吗？
素材来自:univ-bio.com

424 x 571 · png
人外周血单个核细胞（PBMC）——ADCC过程中的“主角” - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com
875 x 844 · png
上海浚行生物科技有限公司-新药研发体外服务平台
素材来自:junx-bio.com

718 x 557 · jpeg
红细胞残留的PBMC精确计数和活性分析中洪博元（深圳）生物技术有限公司-实验外包_医学实验外包_动物实验外包_实验外包服务_课题外包服务
素材来自:chinazglab.com
1200 x 986 · jpeg
PBMCs: Mononucleated and Multipurposed | The Scientist Magazine®
素材来自:the-scientist.com

675 x 401 · png
外周血的处理——将外周血处理成PBMC
素材来自:univ-bio.com
1094 x 618 · png
ELISPOT进阶指南——PBMC样本制备（分离、冻存、复苏）
素材来自:univ-bio.com

920 x 1302 · png
外周血PBMC的分离
素材来自:zhuangpeitu.com
435 x 269 · jpeg
PBMC的流式细胞图上几群细胞是哪些细胞_百度知道
素材来自:zhidao.baidu.com

708 x 435 · jpeg
细胞系列【1】PBMC细胞的解读 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com
845 x 333 · png
关于Ficoll，您不得不知的那些事儿 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

素材来自:查看更多內容

当前用户设备UA：Mozilla/5.0 AppleWebKit/537.36 (KHTML, like Gecko; compatible; ClaudeBot/1.0; +claudebot@anthropic.com)