dnaman权威发布_dnaman中文破解版下载(2024年11月精准访谈)
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PCR引物设计指南:关键步骤详解 1. 引物设计在保守区:选择模板cDNA的保守区设计引物,这是PCR成功的关键。通过在NCBI上搜索不同物种的同一基因,并使用序列分析软件(如DNAman)进行比对,找出基因的保守区。 引物长度适中:引物长度通常在15~30碱基之间,推荐使用18-27bp,避免过长导致延伸温度过高,影响Taq DNA聚合酶的反应。 GC含量优化:引物的GC含量应在40%~60%之间,并确保上下游引物的GC含量相近。引物的Tm值(解链温度)应接近72℃,以提高复性条件。 렩🥅密码子第3位终止:如果扩增编码区域,引物的3′端不应终止于密码子的第3位,因为这可能会影响扩增的特异性和效率。 3′端选择T:引物3′端选择T比A更佳,因为T的错配效率较低,而A即使在错配时也能引发链的合成。 碱基随机分布:引物序列在模板内应随机分布,避免3′端有连续的G或C,以减少错误引发的可能性。 避免引物互补:引物自身及引物之间不应存在互补序列,以防止引物折叠成发夹结构或形成二聚体,影响PCR反应。 砨𐃦𓇥如果引物二聚体和发夹结构不可避免,应尽量调整其△G值,使其小于4.5kcal/mol,以减少引物二聚体的产生。
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