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免疫共沉淀原理在线播放_如何看懂免疫共沉淀图(2024年12月免费观看)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：导读更新日期：2024-11-30

免疫共沉淀原理

免疫共沉淀（Co-IP）原理与试剂盒详解免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一种常用的蛋白质相互作用研究方法。它利用抗体的特异性结合目标蛋白，进而沉淀与之相互作用的蛋白复合物。以下是Co-IP的检测原理和试剂盒组成等详细信息。一、检测原理 𐟧ꊃo-IP的基本原理是将细胞裂解液与特异性抗体孵育，抗体结合目标蛋白后，加入能够结合抗体的固相载体（如蛋白A/G琼脂糖珠），形成抗体-目标蛋白-固相载体复合物。通过离心等方法收集复合物，去除未结合的物质，再洗涤复合物以去除非特异性结合的蛋白。最后，通过洗脱将目标蛋白及其相互作用的蛋白从复合物中释放出来，进行后续的分析，如Western blot、质谱分析等。二、试剂盒组成 𐟓抦Š—体结合缓冲液：用于稀释抗体和细胞裂解液，提供合适的离子强度和pH环境，促进抗体与目标蛋白的结合。蛋白A/G琼脂糖珠或磁珠：能够特异性结合抗体，用于沉淀目标蛋白复合物。洗涤缓冲液：用于去除非特异性结合的蛋白，通常含有不同浓度的盐和去污剂。洗脱缓冲液：用于将目标蛋白及其相互作用的蛋白从复合物中释放出来，通常含有低pH值的溶液或竞争性的抗原。阴性对照抗体：用于排除非特异性结合的可能性。说明书：详细介绍试剂盒的使用方法、操作步骤、注意事项等。三、主要参数 𐟓Š 特异性：试剂盒对目标蛋白及其相互作用蛋白的特异性识别能力，应尽量减少非特异性结合。灵敏度：能够检测到的低丰度相互作用蛋白的能力。重复性：在不同实验条件下和不同批次间的稳定性和一致性。兼容性：与后续分析方法（如Western blot、质谱分析等）的兼容性。四、适用样本 𐟧슩€‚用于细胞裂解液、组织匀浆等含有目标蛋白的生物样本。通过这些信息，你可以更好地理解和应用免疫共沉淀技术，开展蛋白质相互作用研究。

chip实验h3对照染色质免疫共沉淀（ChIP）是研究DNA与蛋白质相互作用的重要方法，深受科研人员的喜爱。通过这种方法，我们可以深入了解组蛋白修饰、转录调控和细胞凋亡等生物学过程。下面，我们来详细讲解一下ChIP实验的原理和步骤，以及一些需要注意的事项。实验原理 𐟧슥œ覴𛧻†胞状态下，通过甲醛固定DNA与蛋白质的复合物，然后使用微球菌核酸酶（Micrococcal Nucleas）将DNA随机切断成一定长度的小片段。接着，通过抗原-抗体特异性结合反应，将这些小片段富集并沉淀下来。最后，通过解除蛋白质和DNA的交联，分离出蛋白质，纯化DNA，并进行PCR检测，从而获取更多信息。实验步骤 𐟏튱%甲醛处理：使蛋白质与DNA交联。细胞裂解：采用微球菌核酸酶消化，形成染色质小片段。抗原-抗体反应：促进免疫沉淀反应。 NaCl、蛋白酶K处理：解除DNA-蛋白交联。 DNA纯化回收：分离出蛋白质，纯化DNA。琼脂糖凝胶电泳和RT-PCR：对DNA作进一步分析。注意事项 𐟓‹ 细胞数量：细胞数过多会导致交联时间增加，DNA片段过长易丢失；过少则DNA片段过短。需要通过预实验确定最佳细胞数。交联时间：推荐1%甲醛交联时间为5-60分钟。时间过长会导致片段过长，时间过短则交联不完全。对照组设置：内对照验证断裂效果，推算实验效率；阳性抗体对照用保守蛋白抗体；阴性对照用宿主血清蛋白。目标蛋白抗体：ChIP实验不同于常规免疫反应实验，因蛋白与DNA交联，抗体结合受空间阻碍影响。常规操作：ChIP实验步骤冗长复杂，涉及洗柱、离心、吸液、换管、孵育和震荡等多个步骤。操作虽基础，但每一步均需细致入微，对操作技巧要求严格。实验结果分析 𐟓Š Input DNA组：使用琼脂糖凝胶电泳，结果应显示DNA片段集中在150bp到350bp之间。 PCR扩增：对纯化DNA进行PCR扩增，再通过凝胶电泳分析对照情况。预期结果为：空白对照无条带，阴性对照条带弱或无，内对照和阳性对照条带强。只有满足这些条件，实验才为成功，可继续RT-PCR实验。通过以上步骤和注意事项，你可以更好地掌握染色质免疫共沉淀技术，从而在科研工作中取得更好的成果。

蛋白质-蛋白质互作研究全解析𐟔슦Ž⧴⧔Ÿ物分子之间的相互作用对于理解生物系统和工作机制至关重要。蛋白质与蛋白质、蛋白质与核酸、蛋白质与小分子的互作研究为细胞功能研究和疾病治疗提供了基础。在这篇文章中，我们将深入探讨蛋白质-蛋白质互作的研究方法，包括原理、实验步骤、技术特点和应用。 𐟔 原理：蛋白质-蛋白质互作是指两种或多种蛋白质通过特定的相互作用区域结合在一起，形成复合物或参与生物过程。这些相互作用通常通过特定的氨基酸序列、结构域或相互作用伙伴来实现。 𐟧ꠥꌦ�꤯𜚊确定研究目标：首先，确定要研究的蛋白质和它们之间的相互作用。选择实验技术：根据实验目的和样品类型，选择合适的实验技术，如免疫共沉淀、酵母双杂交等。进行实验：进行实验操作，收集数据。数据分析：对实验结果进行统计分析，确定蛋白质之间的相互作用关系。 𐟔砦Š€术特点：每种实验技术都有其独特的优点和局限性。例如，免疫共沉淀技术可以检测蛋白质之间的物理相互作用，而酵母双杂交技术则适用于研究蛋白质之间的功能相互作用。 𐟓Š 应用：蛋白质-蛋白质互作研究在细胞生物学、生物化学和药物研发中有着广泛的应用。通过了解这些相互作用，可以更好地理解细胞内复杂的过程和机制，为疾病治疗提供新的策略。 𐟓š 延伸阅读：如果你对蛋白质-核酸和蛋白质-小分子的互作研究感兴趣，可以查阅相关的研究文献和实验技术指南，以获取更深入的了解。

Co-IP实验做不好？细节揭秘！蛋白质是生命活动的终极执行者，它们通过与其他蛋白的相互作用来发挥功能，参与细胞增殖、分化、运动和代谢等过程。因此，研究蛋白间的相互作用对于理解细胞功能至关重要。今天我们来详细介绍Co-IP（免疫共沉淀）实验的原理、流程和注意事项。 Co-IP的原理 𐟐Ÿ Co-IP是研究蛋白相互作用的“金标准”，利用特异性抗体捕获抗原，进一步捕获与目标抗原相互作用的蛋白。这个过程类似于钓鱼，抗体是鱼竿和鱼线，诱饵蛋白是鱼饵，而猎物蛋白就是我们要钓的鱼。实验流程 𐟓 将抗体固定在固相介质（如琼脂糖珠或磁珠）上，形成beads；将固定好的抗体与样品共孵育；通过洗涤，去除未结合或非特异结合的蛋白；将互作蛋白从固相支持物上洗脱下来；通过WB（蛋白质印迹）或质谱的方法，对互作蛋白进行检测。对照设置 𐟔 实验设计要了然于胸，对照设置是检验实验成败的关键。以下是实验中需要设置的对照及如何通过对照结果判断实验是否成功：样品制备 𐟧ꊨエ磦𖲩€‰择：使用非变性温和裂解液，避免使用离子型去垢剂如SDS，可选择温和非离子型去垢剂（如NP-40, Triton X-100）。抗体选择 𐟧𜊦Š—体需识别诱饵蛋白的天然构象，选择经过IP验证的抗体。如果研究的目的蛋白没有商品化抗体，可通过基因改造与标签蛋白融合表达，使用标签抗体进行实验。固相支持物选择 𐟌€ 孵育顺序 𐟐𞊦𔗨„𑦖𙥼 𐟚🊥…疫共沉淀的考虑因素 𐟌 在开始实验前，我们需要弄清哪些因素会影响免疫共沉淀，这样实验出问题时，才能追根溯源找到解决方法，达到事半功倍的效果。希望这些信息能帮助你更好地理解和进行Co-IP实验！

𐟧쩫˜通量测序技术大揭秘！𐟔 𐟔즎⧴⨡訧‚遗传学的奥秘，我们离不开高通量测序技术！今天，就让我们一起揭秘几种重要的高通量测序技术吧！𐟌Ÿ 1️⃣ ATAC-seq 𐟌🊊𐟎力€术原理：利用转座酶Tn5识别并切割开放的染色质区域，加上测序接头，揭示染色质开放性。 𐟒ᦊ€术特点：高效、低起始量，高信噪比和特异性，非常适合研究转录调控机制、转录因子结合分析等。 2️⃣ ChIP-seq 𐟔„ 𐟎力€术原理：通过甲醛交联目标蛋白与染色质，用抗体免疫沉淀后纯化并测序，揭示转录因子调控机制和组蛋白修饰作用。 3️⃣ CUT&Tag 𐟏𗯸 𐟎力€术原理：基于改造的Tn5转座酶，通过抗体介导实现DNA切割和测序接头的添加，简化实验流程，降低样本需求量。 4️⃣ RIP-seq 𐟒ኊ𐟎力€术原理：结合RNA免疫共沉淀和高通量测序，研究RNA与RNA结合蛋白的相互作用，适用于全转录组RNA-蛋白互作分析等。 5️⃣ CLIP-seq ✂️ 𐟎力€术原理：通过紫外交联RNA与蛋白质，免疫沉淀后测序，揭示RNA-蛋白质相互作用，具有高准确性、强特异性。 𐟔这些高通量测序技术各有千秋，为表观遗传学研究提供了强大的支持！你更想了解哪一种呢？快来探索吧！𐟚€

𐟔 探索His标签的奥秘 𐟧 你是否对His标签感到好奇？让我们一起来探索这个蛋白标签的奇妙世界吧！ 𐟒᠈is标签，也被称为His6标签，是生物化学和分子生物学领域中常用的一种蛋白标签。它通常被用于蛋白纯化过程，因为His标签能与特定的金属离子如镍离子结合，从而使得目的蛋白能够被高效地纯化出来。 𐟔젥œ觧‘研实验中，选择合适的蛋白标签至关重要。除了His标签外，还有许多其他类型的标签可供选择，如Flag标签、GST标签、HA标签等。每种标签都有其特定的用途和原理，例如，Flag标签常用于Western Blot分析，而HA标签则适用于免疫共沉淀实验。 𐟤” 那么，如何选择合适的蛋白标签呢？首先要考虑实验目的，例如，如果是为了纯化蛋白，那么His标签无疑是一个不错的选择。其次，还需要评估标签对目的蛋白的表达是否会产生干扰，以及标签应该标记在目的蛋白的N端还是C端。 𐟌Ÿ 总的来说，His标签以其独特的性质和用途，在生物化学和分子生物学领域中占据了重要的地位。通过深入了解这些标签的原理和应用，我们可以更好地设计和优化科研实验方案。 𐟔 现在，你是否对His标签有了更深入的了解呢？如果你还有其他问题或想了解更多信息，欢迎随时提问哦！

细胞免疫共沉淀实验（Co-IP）全攻略细胞免疫共沉淀实验（Co-IP）是一种研究细胞内蛋白质相互作用的重要方法。其基本原理是，如果细胞内两种蛋白质（A和B）有直接或间接的相互作用，那么在温和的裂解条件下获得的蛋白样品中加入A蛋白的抗体，可以将A蛋白沉淀下来，与其直接或间接相互作用的B蛋白或C蛋白也会一起被沉淀下来。通过Western blot检测沉淀中是否存在B或C蛋白，可以确定B或C蛋白与A蛋白的相互作用。 𐟔 用途检测A、B蛋白在体内是否相互结合分离与A蛋白相互作用的蛋白复合物 𐟧ꠦ料与仪器【样品和试剂】 293T细胞（以该细胞做转染为例）转染质粒（Flag-A，HA-B） Flag抗体 2㗠loading buffer PBS Flag-beads 1㗠TBST 5㗠SDS loading buffer 蛋白酶抑制剂磷酸酶抑制剂A和B RIPA裂解液【实验仪器】磁力架金属浴 RIPA裂解液旋转混合仪 WB实验相关设备 𐟓 实验步骤一、细胞的铺板与转染提前一晚将293T细胞铺板至6cm皿中，铺板量以达到相应的转染试剂要求为准；用各实验室相应的转染试剂将以下质粒组合转染2皿细胞：Flag空载+HA-B；Flag-A+HA-B；每质粒2微克。二、免疫沉淀转染24小时后，收获细胞，每皿加入500裂解液，收集细胞至1.5mL EP管中，在冰上超声破碎细胞；超声好后，4℃，12,000g，离心30分钟，取400上清液用于免疫沉淀，80上清用作总蛋白并加入等体积的2㗠loading buffer；将400上清加入用裂解液清洗了3遍的beads中，加入0.3-0.5 Flag抗体，4℃孵育3-4小时； 4℃，2,000g，离心3分钟，去除未结合的液体，留下beads沉淀，用预冷的蛋白裂解液清洗沉淀3次，每次5分钟；最后一次去除清洗液，往沉淀中加入602㗬oading buffer，和总蛋白一起在沸水中煮沸15分钟。三、Western Blot检测通过SDS-PAGE分离样品，利用全蛋白样品作为对照，检测Flag-A和HA-B蛋白是否发生结合。 ⚠️ 注意事项对于内源的Co-IP检测应该用10cm皿来培养目的细胞，并维持较好的生长状态；如果该实验用于新蛋白的鉴定，应注意抗体重链和轻链的影响；该实验不能确定蛋白之间的相互作用是直接还是间接的。

免疫共沉淀（Co-IP）实验全攻略 𐟔젥…疫共沉淀（Co-IP）简介：免疫共沉淀是一种利用抗体与抗原之间的特异性免疫反应来研究蛋白质间相互作用的方法。 𐟔 基本原理：在细胞裂解液中加入抗原特异性抗体，通过免疫沉淀反应形成免疫复合物。经过纯化、洗脱后，可以通过SDS-PAGE电泳、Western blot或质谱鉴定出与抗原相互作用的蛋白质。 𐟌ˆ 优点：相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态。蛋白的相互作用在自然状态下进行，避免人为影响。可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。 𐟚렧𜺧‚𙯼š 可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用。两种蛋白质的结合可能不是直接结合，可能有第三者起桥梁作用。必须在实验前预测目的蛋白，选择检测抗体，若预测不正确，实验可能无结果。 𐟎›„：研究一种已知蛋白质与已知或未知蛋白质间的相互作用。 𐟛 实验步骤：用RIPA裂解缓冲液裂解细胞。用PBS配制50%的Protein A/G-agarose工作液。加入Protein A/G agarose工作液，4℃摇动10分钟去除非特异性蛋白。 4℃，14000g离心15分钟，去除Protein A/G-agarose微球。使用BCA法或其他方法测定总蛋白浓度。加入一抗，4℃过夜。 14000g离心收集沉淀，用预冷洗涤缓冲液洗涤3遍。收集上清，进行SDS-PAGE、Western blot或质谱分析。 𐟓š 总结： Co-IP是研究蛋白质相互作用的经典方法，虽然存在一些局限性，但通过精心设计和操作，可以获得可靠的实验结果。

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