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原位杂交最新视觉报道_原位杂交eber(-)是什么意思(2024年12月全程跟踪)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：热点更新日期：2024-11-30

原位杂交

荧光原位杂交实验全流程详解 1. 𐟧Š 冰冻切片：厚度控制在5-8um，使用防脱片载玻片。细胞爬片的盖玻片需用多聚赖氨酸处理，以防脱片。 𐟔砥›𚥮š细胞：使用RNA Free的4%多聚甲醛室温固定20-30min，然后用DEPC水充分水洗，自然干燥后-20℃冷冻保存，可保存2周以上。 𐟌€ 制作湿盒：在湿盒内加入5㗓SC（PH:7.5）（35ml）+甲酰胺（35ml）。 𐟌𘠥Ž𛩙䨿‡氧化物：用30%H2O2 1份+9份纯甲醇混合液室温处理10min，然后用DEPC水洗3次，每次1min。 𐟧‚ 消化蛋白：切片置于湿盒内，用0.25%盐酸滴于组织上，常温15min，用DEPC水洗2次，每次1min（盐酸可中和带电荷的碱性蛋白，降低背景）。 𐟌🠨›‹白酶K处理：用蛋白酶K覆盖组织，在分子杂交仪中37℃处理20min。蛋白酶K可以消化和暴露被遮蔽的靶核酸，增加探针的结合效率。 𐟚렧𛈦�›‹白酶K：用0.2%或0.1mol/L甘氨酸洗液洗1min（现用现配），终止蛋白酶K。 𐟒砐BS清洗：用PBS洗两次，每次一分钟。 𐟔„ 固定组织：用4%PFA多聚甲醛固定组织10min。 𐟒砥†次PBS清洗：用PBS洗三次，每次1min。 𐟌€ 乙酰化处理：用acetic anhydride乙酸酐（PH=8.0）室温洗5min，2次（乙酸酐溶液配制：每50ml三乙醇胺水溶液中加126ul乙酸酐，现用现配）。然后用PBS洗5次，每次1min。 𐟌€ 预杂交：用5㗓SC（PH=7.5）洗两次，每次1min。切片放置湿盒内，用预杂交液覆盖组织，65℃预杂交1h。 𐟔젦‚交反应：用100u M的探针母液1:500—1000稀释，FITC-labeled probe覆盖切片，在杂交仪内62-70℃黑暗反应24~72h，反应温度与反应时间视不同的组织与探针而定，建议一般65℃48h。 𐟌€ 洗脱探针：用2㗓SC（PH=7.5），室温洗1次，1min。然后用甲酰胺加4㗓SC（PH=4.5）1:1混合液在60℃或65℃洗三次，每次20min。 𐟒砦œ€后PBS清洗：用PBS洗5次，每次1min，室温。 𐟌ˆ 染核：用DEPC处理水1000倍稀释DAPI，染核5min。 𐟒砥†次PBS清洗：用PBS洗3遍，每遍5min。 𐟔’ 封片观察：滴加防淬灭剂，盖盖玻片，指甲油封片，荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察。

乳腺癌FISH检测的含义是什么 𐟒᤹𓨅𚧙ŒFISH检测全称为荧光原位杂交技术检测，是一种分子遗传学检测方法，用于评估乳腺癌细胞中特定基因的异常情况。FISH检测通过检测HER2基因的扩增情况，帮助医生确定患者是否适合接受针对HER2的靶向治疗，从而为患者提供更为个体化的治疗方案。𐟔劤𙳨…𚧙ŒFISH检测的含义是指一种用于检测乳腺癌细胞中HER2基因是否发生扩增的分子生物学检测方法。这种检测有助于判断乳腺癌的生物学特性，为患者提供更加精准的治疗选择。⚠ 乳腺癌FISH检测的步骤通常包括以下几个环节：𐟒⊱、样本采集：通过手术、细针穿刺或空心针活检等方式获取乳腺癌组织样本。𐟚늲、样本处理：将采集到的组织样本进行处理，制作成可供检测的切片。𐟔” 3、FISH探针标记：使用特定的荧光标记探针，这些探针与HER2基因序列互补。𐟌𞊴、杂交：将标记好的探针与组织切片上的DNA进行杂交，探针会与目标HER2基因结合。𐟙 5、检测与分析：使用荧光显微镜观察切片，分析探针的荧光信号，判断HER2基因是否扩增。𐟍‚ 𐟑‰患者需要到正规医院进行检查，在检查后还需要注意一些事项，那么接下来请看我的图3内容。𐟌 #乳腺癌#

𐟔젧𛆨ƒž生物学领域的高影响力期刊推荐 𐟓– 𐟓ˆ 《CELLCALCIUM》 JCR分区：Q4 中科院分区：生物二区专注于生命系统中钙代谢和信号传导的研究，涵盖无机化学、生理学、分子生物学和病理学等多个领域。 𐟔젣€ŠACTAHISTOCHEM》 JCR分区：Q4 中科院分区：生物四区主要关注细胞和组织生物学的基础研究和方法学创新。特别欢迎探讨生理或病理条件下细胞/组织水平上的功能调节机制，以及报告新技术和新方法的文章。 𐟧젣€ŠJMOLHISTOL》 JCR分区：Q4 中科院分区：生物三区致力于发表有关分子在动物细胞、组织和器官中的定位和表达的原始研究结果。特别欢迎使用组织化学、免疫组织化学、原位杂交、受体结合、自动射线摄影、图像捕捉和处理、报告分子以及最新可视化技术的文章。

𐟔젤𘴥𚊥ˆ†子生物学检验技术全解析 𐟓– 𐟓š 第四章第二节课堂笔记 𐟔 分子生物学检验技术是现代医学检验的重要手段，通过特定的实验方法，可以检测和分析生物样品中的核酸、蛋白质等生物大分子。以下是详细的实验方法和注意事项。 Southern印迹技术 𐟌 Southern印迹技术是分子生物学中的经典方法，用于检测特定DNA序列。通过电泳分离DNA，然后转移到膜上，再与探针进行杂交，从而确定特定序列的存在。 Western印迹技术 𐟍ƒ Western印迹技术主要用于检测蛋白质。通过SDS-PAGE电泳分离蛋白质，转移到膜上，再与特异性抗体进行杂交，最终通过显色反应检测蛋白质的存在。原位杂交技术 𐟌𑊥ŽŸ位杂交技术是一种在细胞或组织水平上检测特定核酸序列的方法。通过将标记的探针与细胞或组织切片中的核酸进行杂交，可以在显微镜下观察到特定序列的位置和表达情况。 DNA芯片技术 𐟌 DNA芯片技术是一种高通量的基因检测方法。将大量的DNA片段有序地固定在固体支持物上，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号的强度，可以同时检测多个基因的表达情况。蛋白质芯片技术 𐟍ƒ 蛋白质芯片技术是用于检测蛋白质相互作用和功能的一种方法。通过将蛋白质固定在芯片上，与标记的配体进行反应，可以分析蛋白质之间的相互作用关系。影响实验的因素 𐟧銦Ž⩒ˆ的选择：探针的特异性和标记方法对实验结果有重要影响。探针的浓度：过高或过低的浓度都会影响杂交效果。反应时间：反应时间过长或过短都会影响杂交效率。温度：杂交温度的选择对实验结果有重要影响。通过这些实验方法和注意事项的了解，可以更好地掌握分子生物学检验技术的原理和操作技巧，为临床诊断和治疗提供更准确的依据。

荧光原位杂交（FluorescenceInSituHybridization，FISH）是一种利用荧光标记的核酸探针与目标序列进行杂交的技术，通过荧光显微镜观察荧光信号的位置和强度，从而实现对基因或染色体的精确检测和定位。 FISH技术的原理是基于核酸互补配对的特性，通过设计与目标DNA或RNA序列互补的探针，在特定条件下使探针与目标序列结合，再通过荧光显微镜观察杂交的结果。该技术可以实现单细胞水平的精确检测，具有高灵敏度和高特异性，因此在检测染色体异常、基因扩增、基因重排等方面有独特的优势。荧光原位杂交的操作步骤样品制备样品制备是FISH技术中至关重要的一步，直接影响杂交的效果和信号的清晰度。根据研究目的的不同，样品可以是组织切片、细胞涂片、或培养细胞。需要将样品固定在载玻片上，通常使用甲醇和乙醇混合液进行固定。固定的目的是保持细胞形态和核酸结构，同时使细胞膜通透，以便探针能够进入细胞内与目标序列结合。探针标记探针是FISH实验的关键组件，通常是寡核苷酸或cDNA。为了实现荧光检测，探针需要通过化学方法标记荧光染料，如FITC、Cy3、Cy5等。标记后的探针能够与目标核酸序列特异性结合，通过荧光显微镜观察探针位置来确定目标序列的存在和位置。杂交杂交是FISH技术的核心步骤。在杂交之前，样品通常需要经过预处理，包括DNA变性（通常在70-75Ⰳ的温度下处理，以使双链DNA解链成单链）和探针变性。变性后的探针与样品共同孵育，通常在湿润的条件下孵育数小时至过夜，使探针与样品中的目标序列结合。杂交后洗涤为了去除未结合的探针，需要在杂交后进行严格的洗涤步骤。这一步骤非常重要，可以显著减少非特异性结合的背景信号。洗涤通常在含有盐溶液的缓冲液中进行，具体的洗涤条件（如温度和时间）需根据探针的长度和杂交温度来调整。荧光显微镜观察杂交后，样品会被转移到荧光显微镜下进行观察。通过特定的滤光片，能够看到探针标记的荧光信号。通过比较荧光信号的位置和强度，可以判断目标序列的位置、数量以及其在细胞中的分布情况。常见的FISH应用包括染色体核型分析、基因扩增检测、和染色体重排等。结果分析最后一步是对获得的图像进行分析。通常，FISH结果以图像形式呈现，研究人员通过图像分析软件进行定量分析，例如测量荧光强度、统计荧光点的数量等。这些数据能够为研究提供有力的支持，并帮助科学家们做出准确的判断和结论

【[上课了]#朝政小课堂# #历史上的今天# | 中国科学院成功合成脱氧聚核苷酸】 1974年11月6日，中国科学院上海实验生物研究所成功地用化学方法合成了脱氧寡聚核苷酸。寡核苷酸，是一类只有20个以下碱基的短链核苷酸的总称(包括脱氧核糖核酸DNA或核糖核酸RNA内的核苷酸)，寡核苷酸可以很容易地和它们的互补对连结，所以常用来作为探针确定DNA或RNA的结构，经常用於基因芯片、电泳、荧光原位杂交等过程中。

𐟧즟“色体基因定位FISH实验全解析✨ 𐟔 实验原理：染色体荧光原位杂交技术，结合了细胞遗传学与DNA技术的精髓。它基于Southern blot原理，利用荧光素或半抗原间接标记的核酸分子作为探针。这些探针与靶序列双链DNA在适宜条件下杂交，形成稳定的异源双链DNA。通过荧光显微镜观察杂交信号，并利用FISH分析软件进行定量分析。此技术快速、灵敏且特异性高，能同时分析多个细胞，并精确检测染色体畸变和复杂核型。 𐟓Œ 实验目的：确定目标分子在染色体上的确切位置。 𐟓 实验步骤概览： 1️⃣ 样本玻片制备： - 收获细胞：贴壁细胞用胰蛋白酶消化，悬浮细胞则直接离心收获。 - 低渗处理：加入预温的氯化钾溶液，放入培养箱低渗处理。 - 预固定与固定：使用甲醇和冰醋酸的混合液进行预固定和固定。 - 玻片老化：在20℃～37℃的2㗓SC液中浸泡或56℃烤片2分钟。 𐟒ᠥ𐏨𔴥㫯𜚊- 确保实验环境清洁，避免污染。 - 操作过程中要严格遵守无菌原则。 - 使用新鲜配制的试剂，以保证实验结果的准确性。 ✨ 通过这一系列精细化的操作步骤，我们可以准确地定位染色体上的基因，为遗传学研究和疾病诊断提供有力支持！

这么漂亮的海星，一定没见过吧！原来是利用组织透明技术，结合荧光标记及光学成像，实现海星神经系统的三维成像。近年来，组织透明化技术的发展，为研究各种生物组织深层结构与功能提供了新的技术手段和视角。在这项研究中，作者开发了一种名为See-Star的透明化方法，可实现海洋无脊椎动物的透明化，该方法与常见的分子技术兼容，包括免疫组化(IHC) 和原位杂交 (ISH)。能够对大样本中的分子标记进行跨尺度成像，从细胞结构的高分辨率成像到器官系统的全身成像。

斑马鱼荧光原位杂交与免疫荧光全攻略 𐟐Ÿ 大家好，今天我们来分享一下斑马鱼整胚荧光原位杂交和免疫荧光的实验步骤，希望对正在进行相关实验的小伙伴们有所帮助哦！ 𐟌ž 第一天：准备工作胚胎梯度复水：首先，将胚胎进行梯度复水处理，具体操作可以参考之前的分享。内源过氧化物酶活性去除：复水后，用含有0.6% H2O2的PBST溶液，在室温下遮光处理胚胎30分钟，以去除内源过氧化物酶活性。洗涤：用PBST溶液洗涤胚胎两次，每次5分钟。蛋白酶消化与固定：进行蛋白酶消化，然后用多聚甲醛固定胚胎。接着进行预杂交和杂交，使用Dig标记的单色荧光原杂探针。 𐟌ž 第二天：探针回收与抗体孵育探针回收：回收探针并洗涤，具体操作同普通原杂。抗体孵育：最后一次用0.2㗓SCT洗涤后，换成TNT溶液，室温摇床5分钟两次。然后用含5% blocking reagent的TNT封闭液室温封闭1小时以上。接着用封闭液稀释Anti-Dig-POD（Roche，11633716001）抗体，4℃摇床过夜。 𐟌ž 第三天：洗抗体与显色洗抗体：吸去抗体，加1 mL TNT溶液，室温摇床洗涤25分钟六次。显色：吸走TNT溶液，置换成显色底物，按照TSA试剂盒（PerkinElmer）稀释比例为1:75，室温避光显色。终止显色：吸走底物，加入1 mL TNT溶液室温洗涤胚胎5分钟三次。接着用含3% H2O2的TNT溶液洗涤15分钟四次，再用0.1 M甘氨酸-盐酸溶液洗涤15分钟四次。单色荧光原位杂交结束后，胚胎可直接拍照或进行免疫荧光实验。封闭：用PBST洗涤胚胎三次，每次5分钟，吸除PBST，加入1 mL封闭液（10%山羊血清的PBST），室温封闭1小时以上。孵抗体：吸除封闭液，按比例加入稀释过的抗体，4℃过夜孵育。使用Anti-ZsYellow（Rabbit，1:200）和DAPI（1:3000）。 𐟌ž 第四天：二抗孵育洗抗体：吸除抗体后，用PBST溶液洗涤，室温摇床洗涤25分钟六次。封闭：加入1 mL封闭液（10%山羊血清的PBST），室温封闭1小时以上。孵抗体：吸除封闭液，加入1:500的Rabbit 594和DAPI（1:3000）。 𐟌ž 第五天：最终洗涤与拍照洗抗体后，胚胎即时拍照，或者避光后置于4℃冰箱暂时保存。 𐟌Ÿ 希望这个流程能帮助到正在进行相关实验的小伙伴们！如果有任何问题，欢迎留言讨论哦！𐟒쀀

荧光原位杂交样本制备与运输全攻略荧光原位杂交技术是一种非放射性的分子生物学方法，它利用标记了报告分子的核酸探针与染色体或DNA纤维切片上的靶DNA进行杂交。当两者互补时，会形成杂交体，然后通过免疫化学反应检测荧光信号，从而实现对待DNA的定性、定量或相对定位分析。 𐟓栩€样要求包埋：石蜡包埋、OTC包埋动物组织：已固定在4%多聚甲醛中。处死动物后立即取材，生理盐水冲洗表面，4%的多聚甲醛固定，一般组织固定48小时后进行包埋，大小不超过1cm*1cm*0.5cm。装组织的管子要比组织大，固定液是样品体积的5倍以上，以保证充分固定，封口膜封好避免运输过程中固定液洒出。植物组织：新鲜取材后固定于FAA固定液中。大小不超过1cm*1cm*0.5cm，如果组织悬浮于固定液上，可以抽真空使其下沉。常温或少量冰袋运输。 𐟔ꠥˆ‡片：石蜡切片、冰冻切片石蜡包埋的组织：冰袋运输。 OTC包埋的组织：干冰运输。 𐟎蠦Ÿ“色：脱蜡至水、苏木素染色、伊红染色、脱水封片石蜡切片：石蜡切片码齐装在塑料切片盒中，冰袋运输。冰冻切片：冰冻切片码齐装在塑料切片盒中，干冰运输。 𐟓𘠦‹照：光学拍照(白光)、数字扫描(白光) 已染色的切片，常温或少量冰袋运输。通过以上步骤，可以确保样本的质量和实验的准确性，为荧光原位杂交实验打下坚实基础。

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