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逆转录最新娱乐体验_逆转录病毒(2024年11月深度解析)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：话题更新日期：2024-11-28

逆转录

RNA提取与逆转录详细步骤解析 𐟧ꠥꌥ€师整理，详细步骤，喂饭版。 𐟓Š 包括核酸分析及电泳，聚合酶链式反应（PCR）等。 𐟓Š 结果与意义分析 OD260/OD280比值在1.8-2.0为符合实验要求。 𐟔 出现问题与解决办法无RNA沉淀勾浆不完全：基因组DNA分子仍然很大，沸液粘润。变性的蛋白质和基因组DNA一起形成絮状凝集物容易包裹RNA，使之不能有效地释放到溶液中。沉淀不完全：从小于210动植物细胞、小于2m配动物组织、小于4m植物组织或RNA含量低的动植物组织中提取RNA时，勾体积太大，将造成RNA过分稀释而不能沉淀下来。当从这样的样品中提取RNA时，应按比例减少抽提溶液。 A260/A280比率小于1.65 分光度计测量前用水而不是用TE缓冲液稀释RNA样品。低离子强度和低pH溶液会增加280nm处的光吸收值。样品匀浆化时所加的TRIZOL量太少。匀浆化后样品没有在室温下放置5分钟。分离的水样层中污染有苯酚层。终RNA没有完全溶解。 RNA降解从动物体取下的组织或细胞没有立即进行抽提或冰冻保存。水溶液或试管污染有RNA酶。 𐟧�€考题 TRIZOL法提取RNA如何避免DNA污染？凝胶有可能分辨范围广泛的DNA分子，制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度。小片段的DNA电泳应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳以提高分辨率。结果与意义分析 OD260值在1-R的比值18-2.0。因为蛋白质的吸光度值，如果溶液中有蛋白将会导致比值降低。所以有必要结合凝胶电泳等方法鉴定有无RNA。 DNA电泳条带应该是整齐清晰，无拖尾或缺损的。变性胶电泳结果显示3条条带（28S、18s、和5s）为得到完整的RNA，且28s的亮度应为18s的两倍。出现问题与解决办法电泳条带模糊或弥散：更换电泳液、使用不含核酸酶的试剂、电泳后及时成像，电压适中。思考题用琼脂糖凝胶电泳分析核酸(DNA和RNA)有哪些影响因素？实验器材应一次性使用（枪头、PCR管）。注意操作环境，戴一次性手套。严格PCR操作规程。多次取样的试剂应分装。设置阴性对照和阳性对照。降低退火温度对反应有何影响？循环次数是否越多越好？为什么？ PCR技术可应用于哪些方面？举例？

【暴露前预防的药物有哪些？应该如何正确服用？】#微访谈# 目前国内常用的暴露前预防的药物主要是口服药物，主要成分是核苷类逆转录酶抑制剂，常用的比如恩曲他滨和替诺福韦（或丙酚替诺福韦）。

RNA-seq学习笔记：第一天 ### RNA-seq转录组生信分析学习笔记：第一天 𐟓œ 中心法则 1958年，弗朗西斯ⷥ…‹里克提出了中心法则（Central Dogma），这是生命科学中最基本和最重要的规律。中心法则指明了遗传信息的流动方向：DNA→DNA（DNA的自我复制），DNA→RNA（转录），RNA→蛋白质（翻译）。大多数生命都遵循这一规律。而RNA病毒中，部分存在RNA→RNA（RNA的自我复制），逆转录病毒则存在RNA→DNA（逆转录）。 𐟓š 转录组能解决什么问题转录组广义上指在某一生理条件下，细胞内所有转录产物的集合，包括mRNA、ncRNA、rRNA等；狭义上指所有mRNA的集合。目前转录组测序及分析技术可以解决新基因的深度发掘、低丰度转录本的发现、转录图谱绘制、可变剪接的调控、代谢途径确定、基因家族鉴定及进化分析等问题。 𐟔젨𝬥𝕧𛄧š„建库测序流程组织样取样-提取RNA-去除rRNA-打断，选取特定长度的片段（约300bp）反转录-PCR扩增建库-上机测序。去除rRNA的方法有三种：试剂盒去除（适用于原核生物）、加上一个oligo DT的磁珠富集mRNA、捕获，最常用的是第二种。 𐟓ˆ 转录组数据分析流程原始数据的质控-序列比对（有参）/转录本组装（无参）-基因、转录本表达定量-基因表达差异分析。有参和无参转录组数据分析的关注点有所不同。有参指的是测序物种有参考基因组，关注不同状态下的样本表达量差异；无参指的是物种没有参考基因组，更多的关注转录本的拼接。

研究生必修：CDS与cDNA的区别嘿，研究生们！你们不会还在纠结CDS和cDNA的区别吧？𐟘… 来，咱们一起来捋一捋这两者的关系。来源大不同 𐟌𑊩斥…ˆ，CDS（编码序列）是天然存在的，它藏在所有的细胞里，负责传递遗传信息，指导蛋白质的合成。而cDNA（互补DNA）则是人工合成的，它是从mRNA（信使RNA）逆转录而来的。mRNA是真核生物细胞中的一种核酸，里面藏着合成蛋白质的指令。结构上的差异 𐟔 结构上，DNA是双链的，由两条互补的核苷酸链组成，像是个双螺旋结构。而cDNA通常是单链的，只有一条核苷酸链。用途各有千秋 𐟛 ️ DNA的主要任务是存储和传递遗传信息，它是生命的蓝图。而cDNA则主要用于研究基因的表达和功能，帮助我们了解基因是如何工作的。希望这些小知识能帮到你们，别再混淆CDS和cDNA啦！𐟒ꀀ

【科研进展】赵方庆团队建立复杂转录组智能实时测序新技术真核生物的转录组由大量蛋白编码mRNA、非编码RNA和环形RNA等多种分子组成，具有高度的复杂性和多样性。因此，如何在庞大而复杂的转录组中高效、精准地检测目标转录本，成为当前生命科学及医学研究中的一个重要挑战。传统的靶向转录组检测方法需要在测序前通过探针捕获或实验富集，操作繁琐，且常常无法保留样本中的全部转录组信息，导致文库用途受限，难以用于大规模整合分析，极大制约了靶向转录组研究的应用场景。 2024年10月23日，中国科学院动物研究所赵方庆团队在Nature Cell Biology发表了题为Real-time and programmable transcriptome sequencing with PROFIT-seq的研究论文，介绍了他们开发的全转录组可编程智能测序新技术PROFIT-seq。该技术首次将全转录组捕获技术与计算机编程实时操控算法相结合，能够在测序过程中同时进行分析和富集，实现目标转录本的单分子精确检测和全转录组的无偏定量。这一创新技术可广泛适用于生命科学研究、病原体检测和临床诊断等领域。 PROFIT-seq通过创新的复合逆转录策略和滚环扩增技术，不仅能够捕获多种类型的转录本（包括多聚腺苷酸化、非多聚腺苷酸化和环状RNA等），还可以在测序过程中实时控制，根据需要选择性地富集目标转录本。此外，该团队设计了基于最大期望算法的全转录组智能定量模型，结合目标转录本的全长序列和其他非目标分子的短时测序标签，实现了精准的全转录组定量分析。与传统方法相比，PROFIT-seq大幅提高了样本中目标转录本的检测效率和测序通量。该研究首次提出了转录组智能测序的概念，依托人工智能纳米孔自适应测序算法，能够实时判断测序分子来源，并可编程选择目标测序分子进行全长测序。这种方法无需复杂的前期实验处理，仅需提供目标转录本的参考序列，即可灵活实现测序的实时操控，满足多种类型转录本的同步检测需求。同时，通过滚环扩增技术，结合cDNA的多轮通读与纳米孔测序错误校正，实现了目标转录本的高效、精准的单分子检测。研究团队展示了PROFIT-seq技术在多种实际场景中的应用效果。在临床检测中，该技术通过实时富集痰液样本中肺炎相关病原，大幅提高了病原体的检测通量（3-5倍），并缩短了关键突变的鉴定时间（减少75%时间），实现了快速、准确的目的病原鉴定。同时，该技术还有效检测了结直肠癌相关微生物与宿主免疫系统的复杂互作，揭示了在结直肠息肉恶性瘤变过程中，宿主免疫组库与肠道微生物的相互作用规律。中国科学院动物研究所赵方庆研究员为该研究的通讯作者，副研究员张金阳，工程师侯玲玲以及吉林大学中日联谊医院主任医师马连君为共同第一作者。该研究得到了国家杰出青年科学基金、国家重点研发计划项目及博士后创新人才计划的资助。文章链接：网页链接阅文链接：网页链接

HIV是什么意思？[疑问] [火焰]HIV，这一简洁而沉重的缩写，承载着人类医学史上一个不可忽视的篇章。它，全称人类免疫缺陷病毒，又被称为艾滋病病毒，是一种逆转录病毒，以其独特的攻击方式，悄然侵袭着人类的免疫系统。 [𐟑🝈IV，如同一位狡猾的侵略者，它并不直接摧毁人体细胞，而是将矛头对准了免疫系统中的辅助T淋巴细胞——这些细胞的健康与数量，是维护我们身体免疫防线稳固的关键。HIV一旦入侵，便与这些细胞“同归于尽”，导致T淋巴细胞数量急剧下降，免疫系统逐渐崩溃，从而为各种机会性感染和恶性肿瘤的肆虐打开了大门。 HIV的传播途径，更是让人防不胜防。它可以通过性接触、血液传播和母婴传播等多种方式，悄无声息地在人与人之间蔓延。这要求我们每个人在享受生活的同时，也要时刻保持警惕，远离高危行为，守护好自己的健康。[加油] 面对HIV，我们并非束手无策。随着医学技术的不断进步，高效抗逆转录病毒疗法的出现，为艾滋病患者带来了新的希望。虽然目前艾滋病尚无法彻底治愈，但通过科学的治疗和管理，我们可以有效抑制病毒复制，延缓病情进展，提高患者的生活质量。因此，了解HIV、预防HIV、关爱艾滋病患者，是我们每个人应尽的责任和义务。让我们携手努力，共同为构建一个无艾的世界贡献力量。[心] #艾滋病#

预防艾滋病：从我做起，共同抗击艾滋病（AIDS）是一种严重的传染病，预防它对我们每个人的健康都至关重要。以下是一些有效的预防措施，让我们一起来看看吧：安全性行为 𐟛᯸ 使用安全套：在发生性行为时，正确使用安全套可以大大降低HIV传播的风险。减少性伴侣数量：保持一个固定的性伴侣，可以减少感染HIV的机会。避免共用针头 𐟒‰ 对于注射药物使用者，使用无菌针头和注射器，避免与他人共用。血液安全 𐟩𘊧ᮤ🝨𞓨ဥ’Œ血制品的安全，只接受经过HIV检测的血液和血制品。母婴传播预防 𐟤𐊥핥懨🛨ገIV检测，如果检测结果为阳性，及时接受抗逆转录病毒治疗（ART），以减少母婴传播的风险。 HIV检测和咨询 𐟧ꊥœŸ进行HIV检测，特别是对于高风险人群，了解自己的HIV状态有助于及时采取预防和治疗措施。预防性抗逆转录病毒治疗（PrEP） 𐟒Š 对于高风险人群，可以考虑使用PrEP，即在没有感染HIV的情况下，定期服用抗逆转录病毒药物以降低感染风险。暴露后预防（PEP） 𐟛᯸ 如果发生了可能感染HIV的高风险行为，应立即寻求医疗帮助，可能需要进行PEP，即在暴露后72小时内开始服用抗逆转录病毒药物，以降低感染HIV的风险。教育和意识提升 𐟓š 提高公众对HIV/AIDS的认识，包括传播途径、预防措施和对感染者的关怀。疫苗研究 𐟒‰ 虽然目前还没有有效的HIV疫苗，但科学家们正在不断研究和开发中。关怀和支持 𐟒– 为HIV感染者提供医疗、心理和社会支持，帮助他们更好地管理自己的健康。通过这些方法，我们可以有效地降低HIV的传播和感染风险。让我们一起努力，共同抗击艾滋病！

尼帕病毒包膜，CAR-T新策略！在In vivo CAR-T疗法的研究中，科学家们发现了一种独特的方法来改造和递送CAR-T细胞。他们利用尼帕病毒的包膜来进行改造，因为尼帕病毒的包膜具有独特的靶向区域和膜融合区域，这两个区域在病毒包装过程中需要分别在两个质粒中进行。基本策略是通过突变尼帕病毒的靶向区域，并添加DARPin来靶向T细胞。DARPin是一种人工设计的蛋白质，能够特异性地结合到目标细胞上。在这个研究中，DARPin被设计成靶向CD4+或CD8+ T细胞。利用假型逆转录病毒样颗粒或逆转录病毒载体（如慢病毒样颗粒或慢病毒载体），科学家们可以选择性地调节免疫细胞的不同亚型的活性。这些假型逆转录病毒样颗粒或逆转录病毒载体携带细胞特异性靶向结构域（如特异于CD4+ T细胞或CD8+ T细胞）和功能结构域（如细胞因子）。与仅包含细胞特异性靶向结构域的相应颗粒或载体相比，将功能结构域与假型逆转录病毒样颗粒或逆转录病毒载体上的细胞特异性靶向结构域结合，极大地改善了免疫细胞的靶亚型的选择性活性调节。例如，研究人员发现，呈现刺激性细胞因子的T细胞靶向颗粒在细胞类型混合培养物中和在体内人血液系统小鼠模型中选择性地激活靶T细胞亚群，并且还将包装的基因递送到靶T细胞亚型中，而无需任何刺激性培养条件。基于MeV（麻疹病毒）糖蛋白的呈现IL-7（白细胞介素-7）的CD4靶向的颗粒确实特异性地激活并促进培养的原代CD4+细胞的存活，而基于NiV（尼帕病毒）糖蛋白的呈现IL-7的CD8靶向的颗粒选择性地激活并促进CD8+ T细胞的存活。此外，研究人员还发现，利用剂量依赖性方式，这些假型逆转录病毒样颗粒或逆转录病毒载体能够有效地将GFP转基因递送至细胞混合物中的CD4+ T细胞中。与亲本CD4靶向的慢病毒载体（不共同呈现IL-7）相比，在将治疗性ErbB2CAR转基因选择性地递送到静息CD4+ T细胞方面，4H/IL7H-LV更有效。用共同呈现CD8/IL-7的NiV糖蛋白假型化慢病毒载体（8G/IL7G-LV）也观察到了类似的独特的基因转移和CD8+ T细胞的刺激。实际上，在选择性CD8+ T细胞活化和靶基因递送方面，8G/IL7G-LV比8G-LV更有效。这项研究为In vivo CAR-T疗法提供了一种新的、有效的策略，为未来的临床试验提供了重要的理论基础。

PCR结果看不懂？教你如何读懂文献最近开始带师弟师妹们，发现大家在读文献时对PCR结果图一脸懵逼。今天就来给大家分享一下如何解读PCR结果图，特别是实时荧光定量逆转录PCR（Real-time RT-PCR, RT-qPCR）的结果。 𐟓Š 图片解读：整体信息：目标基因在不同分组中的表达情况基因名：这是你检测的目标基因的名称。横坐标：代表不同的分组，也就是实验处理条件的不同。纵坐标：表示目标基因（mRNA）的相对表达量。误差棒（Error Bars）：这些线表示数据的分散程度，通常是标准差（SD）或标准误（SE）。误差线越短，数据越可靠；越长则表示数据分散程度较大。组间比较：比较对照组和处理组的基因表达量差异，通过星号（*）判断是否存在显著性差异。* 表示P值<0.05，** 表示P值<0.01，*** 表示P值<0.001。 𐟔젥—𖨍祅‰定量逆转录PCR（Real-time RT-PCR, RT-qPCR）目的：检测和定量特定mRNA的表达水平，了解基因在某些疾病、药物或实验处理中的变化。实验原理： mRNA转为cDNA：通过逆转录（Reverse transcription，RT），把样本中的mRNA转化为cDNA。扩增特定基因：然后用qPCR方法扩增目标基因片段。每次扩增，cDNA的数量都会增加。荧光信号监测：随着DNA的扩增，荧光染料（SYBR Green）绑定到新生成的DNA上，机器实时检测荧光强度，反映目标基因的数量。定量分析：通过记录荧光信号何时超过特定阈值，可以计算出样本中目标基因的初始表达水平。希望这些小技巧能帮到大家，读懂PCR结果图不再是个难题！𐟒ꀀ

【艾滋病毒早期治疗的好处是什么？】 1. 减少体内的病毒载量艾滋病毒的早期治疗可以减少体内的病毒载量。这限制了通过共用注射器、性活动、分娩或母乳喂养将艾滋病毒传播给他人的风险。降低病毒载量可以改善整体健康状况，保护免疫系统免受进一步损害。当患者按照规定服用抗艾滋病药物时，他们减少了血液中的艾滋病毒，使免疫系统处于更好的工作状态。 2. 降低艾滋病毒相关癌症风险抗逆转录病毒疗法有助于显著降低艾滋病毒感染患者的癌症风险。它可以让你的免疫系统愈合和正常运作，增加你对癌症和其他并发症的保护。 3. 防止感染如果你不治疗艾滋病毒，你的免疫系统会随着时间的推移而恶化。因此，你的免疫系统将无法对抗正常的病毒。你会更容易感染肺结核和肺炎。抗逆转录病毒联合治疗使患者能够减少病毒载量并与病毒作斗争。 4. 预防艾滋病毒传播艾滋病毒治疗可以帮助你防止艾滋病毒传染给你的性伴侣。通过艾滋病毒的早期治疗，你可以将你的病毒载量降低到无法检测到的水平。这大大降低了你将疾病传染给其他人的风险。 5. 防止艾滋病如果不及时治疗艾滋病毒，就会导致艾滋病。当你患有艾滋病时，你的免疫系统会被破坏，你会更容易受到癌症和其他威胁生命的感染。在早期阶段开始艾滋病毒治疗可以帮助您预防这种进展并长期保持健康。「艾滋」「hiv」

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