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细胞培养双抗权威发布_细胞培养双抗是哪两种药(2024年11月精准访谈)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：观点更新日期：2024-11-28

细胞培养双抗

EAhy926细胞培养技巧与经验分享 𐟌𑊥Ÿ𙥅𛅁hy926细胞需要一些小技巧和经验，以下是一些实用的建议：培养条件 𐟌᯸ 首先，EAhy926细胞的培养条件比较严格。通常使用89%的H-DMEM培养基，加入10%的FBS、1X双抗，并在5%的CO2和O2环境中培养，温度保持在37℃，湿度为95%。培养过程中的小技巧 𐟧ꊧ𛆨ƒž碎片和死亡细胞：在培养过程中，会有一些细胞碎片和死亡细胞，但这些并不影响细胞的增殖。可以通过定期换液或用PBS清洗来去除这些杂质。碱性环境：EAhy926细胞不喜欢碱性环境，所以在操作过程中要尽量减少细胞或培养基在超净台中暴露的时间，并将培养箱中的CO2浓度控制在5%。细胞消化：消化细胞时不能过度。比如在T25瓶中，当细胞融合度大于95%时，加入1ml含EDTA的0.25%胰酶，湿润细胞表面10秒后吸走所有胰酶，再放置37度培养箱孵育1分钟，细胞开始变圆和脱落。然后在超净台中添加3ml H-DMEM完全培养基终止消化。换液频率：EAhy926细胞的增殖速度较快，但营养代谢较少。正常情况下，48小时换一次液，每次换液量为5ml/T25瓶。抗性筛选：EAhy926细胞对嘌呤霉素敏感，培养体系中含2ug/ml的嘌呤霉素可以杀伤这些细胞。如果需要筛选带有抗性的沉默稳定株，可以通过荧光显微镜或实时动态活细胞成像系统观察和统计。阳性率低于90%时，可以添加4ug/ml的嘌呤霉素抗性筛选48小时后，再换含2ug/ml的嘌呤霉素稳定阳性表达。荧光显微镜拍照：EAhy926细胞的核定位基因mkate2表达时，荧光略弱，不明亮。可以通过20X荧光显微镜拍照获得更明亮和清晰的细胞形态照片。传代时机：在传代时，细胞贴壁过夜后，细胞汇合度不能低于35%。太低会影响细胞通信和因子分泌，从而影响增殖。扩增密度：为了达到较高的细胞密度，当EAhy926细胞融合度达到90%时，换液5ml/T25完全培养基，扩增48小时后传代或冻存。但在药物实验或高内涵筛选时，细胞汇合度最好控制在35%-90%之间。免责说明 ⚠️ 这些方法技巧经验是自己或实验室团队真实操作心得体会而改良，不一定适用所有场景或科研工作者。故再次申明：“请谨慎模仿，本人或实验室团队不承担任何经济或安全责任。模仿前，请自我评估。” 希望这些经验能帮助你在EAhy926细胞的培养中取得更好的成果！

𐟌Ÿ揭秘细胞培养秘籍：从零开始到高手之路𐟌Ÿ 𐟔젥Ÿ𙥅𛦝᤻𖥤福�˜：胎牛血清：普诺赛特级培养基：普诺赛高糖DMEM（Gibco也用过，效果相当）双抗：必备！ 𐟔„ 传代技巧大公开：观察细胞状态，选择合适时机传代使用1250枪头，吹打细胞至悬液状态完全培养基配比：FBS:DMEM（1:9）＋1%双抗传代比例：初期1:2，状态好时1:3/1:4，大量细胞需求时1:5/6 𐟔젤𜠤𛣦—𖦜𚦊Š握：细胞密度80%-90%时传代观察细胞形态，选择合适时机 𐟔„ 吹打次数与技巧：好的细胞容易吹下，吹打次数影响不大尝试过25-35次，效果稳定 𐟏š️ 培养容器选择：圆形细胞培养皿与6孔板表现更佳 T25瓶细胞极化，不易吹打尝试T25转10cm皿，效果显著提升 𐟔젧𛆨ƒž状态观察：细胞形态多样，圆细胞下可能隐藏极化细胞不影响实验效果，无需过分筛选 𐟒ᠥ𐏨𔴥㫯𜚊培养过程中注意观察细胞状态，及时调整培养条件传代时保持无菌操作，确保细胞健康生长 𐟌Ÿ 总结：通过精心培养和传代技巧，你的细胞也能茁壮成长！𐟌Ÿ

𐟧짻†胞培养全攻略✨新手必看！ 𐟔짻†胞培养，你准备好了吗？接下来，让我们一起探索这个神秘而有趣的领域吧！𐟚€ 𐟧밟童🅥䇨‰‚与耗材： 1️⃣ 培养瓶：分为T25和T75两种，根据细胞数量和培养需求选择哦！ 2️⃣ 无菌枪头与移液枪：精准控制液体量，确保实验准确无误。 3️⃣ 完全培养基：胎牛血清、基础培养基和双抗的混合液，为细胞提供营养与保护。 4️⃣ 无菌离心管：15mL容量，方便进行细胞离心操作。 5️⃣ 胰酶：传代时必备，帮助细胞消化与分离。 6️⃣ 灭菌PBS：清洗细胞，保持培养环境清洁。 7️⃣ 冻存管与DMSO：长期保存细胞，为科研工作提供稳定保障。 𐟓‹以231细胞为例，培养步骤来啦！ 1️⃣ 细胞复苏：从液氮罐取出细胞，37度水浴溶解后离心重悬，再转移到培养瓶中培养。记得标注日期和细胞名称哦！ 2️⃣ 细胞换液：定期为细胞更换新鲜培养液，保持其健康生长。换液时间根据细胞生长情况灵活调整。 𐟒ᥰ贴士：实验过程中要严格遵守无菌操作规范，确保实验结果准确可靠。同时，要密切关注细胞生长状态，及时调整培养条件。 𐟎‰现在，你是不是对细胞培养有了更深入的了解呢？赶快动手试试吧！

细胞传代培养全攻略：从基础到实践细胞传代培养是细胞生物学实验的基础，当细胞在培养瓶中达到一定密度时，需要通过传代来继续生长。这个过程涉及到一系列的步骤和注意事项，确保实验的顺利进行。 𐟧젦料准备培养瓶/皿离心管移液管移液器废液缸 75%酒精所需培养细胞 𐟒Š 药品准备 DMEM培养基小牛血清或胎牛血清 0.25%胰蛋白酶 PBS缓冲液青链霉素双抗 𐟔젤𛪥™襇†备 CO₂培养箱显微镜超净台 𐟓 实验步骤从培养箱中取出细胞，镜下观察细胞状态，判断是否达到传代密度。回到超净台，吸去培养基，加入2ml左右的PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸去PBS，加入0.25%胰酶，继续晃动培养瓶使胰酶浸润所有细胞。将培养瓶放入37℃培养箱，开始消化并计时，消化时间根据细胞特性有所不同，例如HEK-293T细胞的消化时间为2分钟。用含10%血清的DMEM培养基终止消化，通过反复吹打使细胞脱离培养皿底部，尽量呈单颗细胞的悬浮液。收集细胞悬液离心，室温下1200rpm，5分钟（不同细胞离心参数设置不同），离心后吸出上清丢弃。在新的培养皿中加入新鲜培养基，用新鲜培养基将细胞重悬，吹打几下混匀细胞，将细胞接种到新培养皿，摇晃混匀。将培养皿放入培养箱。 𐟓 注意事项无菌操作规范：实验开始前和结束后，需要将超净台紫外照射灭菌30分钟，实验过程中要穿好灭菌服，戴好灭菌手套和口罩。所有物品从外面移入超净台都需要喷洒75%酒精消毒，并且同样用75%酒精消毒双手。使用胰酶消化细胞要把握好时间，切勿消化过度，及时终止消化。如果消化不够充分，可以轻拍培养皿帮助细胞脱落。弃上清的动作需一次完成，切忌抬起管口，让液体流回底部后，又再次倾倒。回流的液体会把细胞团块冲散甚至冲起来，再倾倒有把细胞团块倒掉的风险。养成在培养皿上做标记的习惯，注明传代时间，细胞种类。通过以上步骤和注意事项，可以确保细胞传代培养的顺利进行，为后续实验提供充足的细胞资源。

茉珂美肤揭秘，焕水嫩肌！ 𐟌𘠨Œ‰珂时光新肌弹亮美肤乳 𐟌𘊥ŠŸ效：柔滑弹性，改善暗沉：创新AOG双抗弹亮配方，含有迷迭香叶提取物、枇杷叶提取物和甜茶提取物，能柔滑肌肤，提亮光泽度，让肌肤焕发柔滑饱满的光泽。弹嫩舒护，更易吸收：大米发酵滤液精华与苹果果实细胞培养物提取物结合，柔和角质层，舒护弹力纤维，焕现弹嫩润泽肌。强韧屏障，提高防御力：富含神经酰胺成分，减缓肌肤营养流失，改善肤质，强韧肌肤屏障。使用方法：洁面后，取适量（约直径3cm）于掌心或化妆棉上，均匀地涂抹于脸部，使其充分吸收。 𐟒砨Œ‰珂「胶囊水」时光新肌清滢精华水 𐟒犥ŠŸ效：柔滑弹性，改善暗沉：创新AOG双抗弹亮配方，含有迷迭香叶提取物、枇杷叶提取物和甜茶提取物，能柔滑肌肤，提亮光泽度，让肌肤焕发闪亮饱满光泽。水润养护，有助吸收：添加50%日本秋田大米发酵滤液，柔化角质层，释放水润能量，同时优化肌肤吸收力，肌肤焕发水润通透感。强韧肌底，柔嫩肌肤：以苹果果实提取的苹果多酚提高嫩肤力，强韧肌肤弹性，焕现细腻平滑肌。水感柔滑，清爽吸收：胶囊水如精华般的柔滑触感带来丰盈吸收的体验，一拍滋润不粘腻，润养通透美肌。 𐟌🠨Œ‰珂时光新肌净润洗颜乳 𐟌🊥ŠŸ效：温和洁净，滋润不紧绷：温和的氨基酸配方柔和洁面，细腻泡沫带走污垢，洗后不易紧绷，脆弱肌肤也能放心使用。莹润保湿，加速吸收：配方蕴含大米发酵滤液和11重氨基酸保湿成分，柔和角质层，水润肌肤，同时提升肌肤吸收力，肌肤焕发通透水感。弹力舒护，平滑肌理：以苹果果实细胞提取的苹果多酚强韧屏障，维护肌肤弹力，焕现清透平滑肌。 𐟍€ 茉珂时光新肌弹亮面霜 𐟍€ 功效：柔滑弹性，改善暗沉：创新AOG双抗弹亮配方，含有迷迭香叶提取物、枇杷叶提取物和甜茶提取物，助力润滑粗糙，提亮肌肤光泽度，让肌肤焕发柔滑饱满光泽。柔嫩肌肤，助力吸收：大米发酵滤液精华与苹果果实细胞培养物提取物结合，柔和角质层，优化肌肤吸收速度，强韧肌底，焕现弹嫩润泽肌。莹润蕴养，长效保湿：蕴含角鲨烷、卵磷脂释放保湿能量，同时减缓水分流失，提升肌肤的保水力，赋活莹润肌肤。细腻质感，丰盈润养：面霜质地如优酪乳般细腻润滑，丰盈润养，焕现细腻饱满肌。

𐟧짻†胞传代全攻略✨新手必看！ 𐟔짻†胞传代是生物实验中的一项重要技术，对于新手来说可能有些复杂，但只要按照步骤来，就能轻松掌握！ 1️⃣ 𐟧ꩦ–先，准备好完全培养基，通常是DMEM基础培养基加上10%的FBS和1%的双抗。 2️⃣ 𐟔在显微镜下观察细胞，当细胞密度达到90%左右时，就可以进行传代了。 3️⃣ 𐟗‘️将细胞培养液倒入废液缸，加入少量PBS冲洗细胞，然后吸干净。 4️⃣ 𐟔ꥊ 入胰酶消化细胞，放入培养箱消化2分钟左右。当细胞离散成单个圆形，呈沙状移动并悬浮在培养液中时，就说明消化好了。 5️⃣ 𐟛‘加入8mL完全培养基终止消化，将细胞吹打悬浮后吸取到离心管中。 6️⃣ 𐟕—将细胞在1500rpm下离心8分钟。 7️⃣ 𐟌€倒掉上清液，轻轻敲击细胞沉淀，使其散开。先加1mL培养基混匀，再加入1mL培养基稀释并充分混匀。 8️⃣ 𐟧ᦕ𐧻†胞，吸取20细胞液加入台盼蓝染液混合均匀后，在细胞计数板上计数。根据接种密度计算所需细胞液体积。 9️⃣ 𐟧륰†667细胞液加入T25培养瓶中，加入7mL左右完全培养基，轻轻摇匀后标记好细胞名、培养代数、日期等信息。 𐟔Ÿ 𐟔将培养瓶放置显微镜下观察是否摇匀，无误后放入培养箱37℃、5% CO2、90%湿度条件下培养。 𐟒ᥦ‚果是悬浮细胞，则采用直接传代法或离心传代法进行传代。直接传代法只需待细胞长满后吸弃部分悬液，加入新鲜培养基继续培养。离心传代法则需将细胞悬液转移到离心管中离心后重悬并接种到新培养瓶中。 ✨至此，细胞传代实验就完成了！是不是很简单呢？只要按照步骤来，你也能成为生物实验小能手！

如何从小鼠中提取骨髓巨噬细胞BMDM 𐟐�𓨦„：8-14周大的小鼠都可以用来提取BMDM。一只小鼠的BMDM可以铺满一个10厘米的培养皿。如果你想要获得尽可能多的BMDM，可以考虑提取两只小鼠的前腿骨髓。 𐟔ꠦ�ꤥ悤𘋯𜚊小鼠处理：首先，用足量的75%乙醇对小鼠进行喷洒消毒，或者将其浸泡消毒。剪断腿部：用手术刀沿着小鼠大腿根部的髋关节处将整条腿拆下，注意不要切断腿骨。切断跟腱，切除胫骨周围的主要肌肉。用剪刀贴着股骨方向，切除股骨周围的主要肌肉。切除膝关节软组织，以获得股骨。切断腓骨及其周围肌肉，以暴露完整的胫骨。冲洗骨髓：将骨髓冲洗到细胞培养皿中，配好的DMEM（细胞培养处理，直径10厘米），每根骨头缓慢注射约2-3毫升DMEM，直至骨髓腔变白。确保DMEM不回流，以避免污染。培养基为DMEM+10%FBS+1%双抗+100 ng/mL M-CSF。 𐟧ꠦ取骨髓巨噬细胞BMDM需要一定的技巧和耐心，但通过以上步骤，你可以成功获得大量的BMDM细胞，用于科研实验。

⏩⏩细胞培养时总会遇到些问题[黑线][黑线]。。 𐟔Ž1、细菌污染常见的污染细菌有革兰氏阴性菌𐟧죀大肠杆菌和假单胞菌等，革兰氏阴性菌中白色葡萄球菌等比较常见。 𐟔Ž2、真菌污染真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，⚠️尤其在梅雨季节进行细胞培养更易污染。细胞培养时需要提供无菌环境：添加一定量的抗生素和两性霉素（青+链=双抗，青+链+两=三抗），防止微生物的污染。使用无菌培养皿、培养板等一次性耗材，减少污染的可能 𐟔Ž3、细胞生长缓慢，死细胞较多。 1️⃣原因一：制备单细胞悬液时细胞活率和得率较低，到时初始活细胞较少。可以选择合适的单细胞悬液制备仪。量少时的样本，尤其是临床穿刺，可以用每管处理量小的仪器（最少可以达到5mg）；量大时可以用每管处理量大的仪器（每管可达4000mg），选择合适的仪器进行制备，确保制备的单细胞悬液得率和活率都在较高水平。[庆祝][庆祝] 2️⃣原因二：培养基不合适[捂脸][捂脸]，更换成熟的培养基，一些细胞的培养还会添加适量血清。 3️⃣原因三：调整到最佳的培养条件，37Ɒ.5℃（一些昆虫𐟐ž𐟐𐟦—可能在25-28℃），7.2~7.4；二氧化炭培养箱等（开放式细胞培养中，需要5%的二氧化炭气体环境）。 𐟔Ž4、支原体污染支原体是一种大小介于细菌和病毒之间，最小直径0.2并独立生活的微生物。细胞培养时⠤𝿧”覔漏Ÿ体清除试剂擦拭培养箱及超净工作台、培养试剂中加入支原体清除试剂，尽可能使用一次性耗材及成品培养基。 𐟔Ž5、黑胶虫污染𐟐›𐟐› 黑胶虫是细胞培养中一种常见的污染物。𐟘“首先可以尝试用抗生素处理，若抗生素处理效果不佳，黑胶虫可能来源于血清，可更换新批次的优质血清，重新培养细胞。#实验室日常# #细胞培养# #细胞实验# #科研日常# #单细胞悬液制备#

周末加班成果：绿色荧光PC-9细胞稳定株上周末加班，成功构建了绿色荧光标记的人肺腺癌细胞（PC-9）稳定株，感染效率超高。老板给了2000元作为加班费，感觉还不错。以下是在周六晚上传代，周日下午未换液前的成像照片，阳性率接近99%。细胞培养条件 𐟌𑊥Ÿ𙥅𛥟𚯼š89% 1640 + 10% FBS + 1X 双抗气体环境：5% CO2 + 37Ⰳ + O2 + 95% 湿度细胞培养技巧 𐟔슥…𗤽“的培养技巧需要私信咨询。细胞特征编码 𐟓… STR-12497-PC-9-GFP-O-1640-Adherent T=24h-Try EDTA=1min-Tran SM=72h-DT=24 希望这些信息对你有帮助！

Caco-2细胞冻存全攻略，轻松搞定！细胞冻存是实验室中一项重要的技术，今天我们来分享一下Caco-2细胞的冻存步骤。准备好以下试剂和材料：胰酶、冻存液、15毫升EP管、完全培养基和PBS（含双抗）。 1️⃣ 首先，将所有试剂放在操作台上，并用紫外照射至少30分钟进行消毒。 2️⃣ 打开安全柜通风橱，用酒精擦拭台面。 3️⃣ 从培养箱中取出细胞，在显微镜下观察细胞的形态和密度。通常在细胞密度达到80-90%时进行传代和冻存。 4️⃣ 将培养皿中的培养基去除，用PBS清洗1-2遍（10cm皿用3ml，T25瓶用2ml，6cm皿用1ml）。 5️⃣ 吸走PBS后，向10cm皿中加入3ml胰酶，放入培养箱中，37度消化5分钟。 6️⃣ 当细胞变悬浮变圆后，加入3ml完全培养基终止消化，将未脱落的细胞轻轻吹下，转移至15毫升离心管中。 7️⃣ 将细胞放置离心机中，以1200rpm离心5分钟。 8️⃣ 弃掉上清液，加入适量细胞冻存液，吹打均匀，分装至细胞冻存管中。在离心途中提前将冻存管进行标记，注明细胞名称、冻存时间和冻存者姓名。 9️⃣ 将分装好的细胞盖紧，并用封口膜进行封口。 𐟔Ÿ 直接将细胞放置-80冰箱储存。通过以上步骤，你就能成功冻存Caco-2细胞啦！记得在操作过程中保持无菌操作，确保细胞的健康和安全。

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