台盼蓝最新娱乐体验_台盼蓝染色(2024年11月深度解析)
小鼠原代小胶质细胞培养全攻略(一) ꌥ觉鯼新生24小时内的清洁级小鼠。 ꠤ恨: PBS:使用PBS粉剂,每袋加ddH2O定容至1000ml,调pH至7.2,高压灭菌消毒。 0.25%胰蛋白酶消化液:使用时浓度为0.25%,含0.02%EDTA。制备时取250mg胰酶和20mgEDTA溶于100mlPBS溶液,无菌操作台上用0.22um一次性过滤器过滤,50ml分装,4℃保存。 接种液配制:DMEM-F12基础培养基90%,加入10%胎牛血清,再按1%体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素),使青霉素和链霉素的终浓度分别为100U/ml和100U/ml,置于4℃冰箱保存。 抗生素:青霉素(80万U)和链霉素(100万U)在无菌操作台内以高压灭菌过的双蒸水溶解,分别加入4ml灭菌水/青霉素,5ml灭菌水/链霉素,配制成20万U/ml,分装后置于-20℃冰箱保存,临用时4℃解冻,注意尽量避免反复冻融,并使培养基最终浓度为100U/ml。 0.01% L-多聚赖氨酸溶液:称量10mg L-多聚赖氨酸,溶于100ml灭菌去离子水,0.22um正压滤器过滤分装,-20℃保存。 0.4%台盼蓝溶液:台盼蓝4g,PBS少许(研磨),PBS定容至100ml,滤纸过滤,室温保存。 4%多聚甲醛:多聚甲醛4g,PBS溶液100ml,加热至60℃,边滴加1mol/L NaOH边搅拌,至液体澄清。 四噻唑兰溶液:MTT 50mg,PBS 10ml,磁力搅拌30min,灭菌后用0.22um微孔滤膜过滤分装,4℃保存,两周有效。 注意事项:所有试剂的配制和使用过程中,需严格遵守无菌操作规程,确保实验结果的准确性。
微生物检测的四种方法,你知道几种? 检测方法1:生长量测定法 体积测量法 通过测量一定体积的培养液中菌丝的量来反映微生物的生长状况。这种方法简单快速,但误差较大。 称干重法 ⚖️ 利用离心或过滤法进行测定。一般干重为湿重的10-20%。这种方法较为繁琐,通常用于获取微生物产品为菌体时,如干酵母、饲料等。 比浊法 슠 微生物的生长会引起培养物混浊度的增高。通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值,判断微生物的生长状况。该方法主要用于发酵工业菌体生长监测。 检测方法2:微生物计数法 染色计数法 芠 为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数,而普通计数法又无法区分死细胞和活细胞,采用染色计数法。常见染料包括中性红、台盼蓝、甲基蓝、美蓝等。 液体稀释法 ꊠ 对未知菌样做连续十倍系列稀释,根据估计数,从最适宜的三个连续的10倍稀释液中各取5毫升试样,接种1毫升到3组共15只装培养液的试管中,经培养后记录每个稀释度出现生长的试管数,然后查最大或然数表MPN得出菌样的含菌数,根据样品稀释倍数计算出活菌含量。 平板菌落计数法 銠 最常用的活菌计数法,不仅可以得出菌液中活菌的含菌数,还可以将菌液中的细菌进行分离培养,获得单克隆。 试纸条法 在平板计数法的基础上,发展了试纸条产品以供快速计数。该方法快速准确,避免了平板计数法的人为操作误差。 检测方法3:生理指标法 测定含氮量 大多数细菌的含氮量为干重的12.5%,根据含氮量㗶.25,即可测定粗蛋白的含量。含氮量的测定方法,包括用硫酸、过氯酸、磷酸等消化法和杜马斯法。 测定含碳量 𑊠 将少量样品混入1毫升水或缓冲液中,用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在100℃下加热30分钟后冷却,加水稀释至5毫升,在580nm的波长下测量吸光度,绘制标准曲线计算生长量。 还原糖测定法 슠 还原糖通常是指单糖或寡糖,可以被微生物直接利用,通过还原糖的测定可间接反映微生物的生长状况,常用于大规模工业发酵生产上微生物生长的常规监测。 其他生理物质的测定 核酸、ATP等含量以及产酸、产气,产CO2、耗氧、产热等指标,都可用于生长量的测定。
四川大学华西药学院:免疫细胞研究新突破 력川大学华西药学院历史沿革 四川大学华西药学院的前身是仁济医院高级药师职业学校,成立于1932年。1953年更名为四川医学院药学系,1987年组建为华西医科大学药学院。2000年,原华西医科大学与四川大学合并,药学院更名为四川大学华西药学院。经过七十余年的发展,学院已成为我国西部地区重要的药学人才培养和科学研究基地。 젥 疫细胞在免疫系统中的作用 免疫细胞在维护机体免疫稳态中扮演关键角色。小白鼠的免疫淋巴细胞和脾细胞包括T细胞、B细胞、NK细胞和巨噬细胞等,分别负责细胞免疫反应、体液免疫反应、直接杀伤被病毒感染的细胞及肿瘤细胞。脾细胞则位于脾脏内,参与过滤血液、清除病原体和产生抗体等功能。 ᠥ𗧗点与解决方案 在进行免疫细胞浓度与活率分析时,传统方法如血球计数板人工计数耗时且误差大。牛顿光学Tunin细胞计数仪通过高精度成像计数和卓越的算法,能够快速识别与区分单个细胞及细胞团簇,显著提高了实验效率。 젔unin细胞计数仪产品亮点 Tunin细胞计数仪基于明场/台盼蓝染色原理,拥有市面上最快的分析速度、高分辨率的光学成像系统,以及可自由调节的焦距轴。机身内置7英寸触摸屏,无需外接电脑,小巧的设计极大地提高了细胞房空间利用率,秒出结果,毫厘不差! 牛顿光学致力于为科研工作者提供更优质、更便捷的实验方案,助力四川大学华西药学院的免疫细胞研究取得新突破。
小鼠肺组织单细胞悬液制备全攻略 젥ꌧ:从实验室模型小鼠的肺组织中提取单细胞悬液,用于类器官培养和药物筛选研究。 砥ꌤ诼单细胞悬液制备仪JX-CKSM-6WK ꌦ 𗥓:模型小鼠一只 ꌨ材:消化酶、终止液、移液枪枪头、台盼蓝染料 实验步骤: 1️⃣ 打开仪器电源,启动管架加热和模块加热功能;将消化酶和终止液在冷水中解冻。 2️⃣ 麻醉小鼠后进行解剖,取出肺组织,并用预冷的PBS冲洗血水。 3️⃣ 用眼科剪剪取组织样本,放入装有消化液的消化管中。 4️⃣ 将消化管放入管架中预热4分钟,然后转移至运行模块中,关闭仪器盖子,选择对应程序,运行结束后取出消化管。 5️⃣ 消化后的组织块变为浑浊的细胞悬液,通过70的滤网过滤细胞,加入终止液终止消化,离心后重悬,后续可进行类器官培养。 实验结果:肺组织单细胞悬液的活率为93%。 ᠔ips:单细胞制备仪是一种集成了金属浴消化与温和剪切组织的新一代单细胞细胞悬液制备设备,适用于流式细胞术、单细胞测序和原代细胞培养等实验。它具有起始组织量小、时间短、细胞得率高、细胞活性高的特点。采用国际DIN方法设计,低噪音,使用方便,性能稳定,对样品的消化处理过程始终处在恒温状态。
如何判断单细胞数据的质量? 拿到高质量的单细胞数据,首先得确保你拿到的是高质量的单细胞悬液。这个悬液的细胞活性得大于80%。常用的染色方法有AO/PI染色和台盼蓝染色。相比之下,台盼蓝染色可能会有假阴性的问题,特别是在植物原生质体的活性测定中。因为富含叶绿体的植物细胞在台盼蓝染色后颜色更深,细胞计数仪可能会误判为死细胞。所以,经验丰富的操作人员检查细胞状态也是非常重要的一步。 接下来,你需要捕获到足够数量的高质量细胞。具体的质控标准可以结合以下几点来理解: 捕获到的细胞数量:这是单细胞测序研究的重要参数。捕获到的细胞数量越多,证据越充分,越有利于发表高分文章。在后续分析过程中,还会再做一次细胞过滤,最终得到的细胞数目就是每一篇单细胞测序文章都会描述的捕获到的细胞数目。 平均reads数:这相当于测序深度,一般大于3万是比较好的数据。 中位基因值:这个值的大小与不同的组织样本有关,比如癌细胞中可能数值较高。 测序饱和度:一般大于50%即可。 高质量细胞的占比:本次测序得到的reads比对到高质量细胞的占比,也是后续用来分析的数据。如果细胞活性偏低,细胞破裂较多,游离到环境中的mRNA偏多,这个数值会偏低。 总之,单细胞数据的判定需要综合考虑多个因素,确保数据的准确性和可靠性。
CCK8细胞毒性实验详细步骤指南 1. 细胞种板:首先,用胰酶消化细胞,然后加入10台盼蓝和10细胞悬液,充分混匀后用细胞计数板计数。将活细胞重悬,按照每孔200的体积加入48孔板中,细胞数量根据细胞系不同而有所差异,例如SNU-387和SK-Hep1使用4万细胞,PLC/PRF/5使用2万细胞。加细胞悬液时,先在15ml管中吹匀,然后吸取到1.5ml EP管中,从9点钟方向每孔加200细胞悬液,速度均匀,不用摇晃即可均匀分布。每加3个孔(每个处理设置3个重复)后吹打均匀剩余细胞悬液,再继续加,不要使用排枪,一个孔一个孔加。 培养箱过夜培养:将培养板放入培养箱中过夜培养12小时,使细胞贴壁。 药物处理:弃去旧的培养基,向培养板中加入配置好的相应浓度的药物200。基线组加入200完全培养基,溶剂对照组加入200含相应浓度DMSO的完全培养基。弃去旧的培养基时,注意使用200枪头套10枪头与培养板接触吸干净,接触面积小,避免细胞丢失。 再次培养:将培养板放入培养箱中继续培养48小时。 PBS清洗:弃去旧的培养基,用PBS洗2遍。使用200枪头套10枪头与培养板接触吸干净。 加入CCK8:避光加入充分混匀的CCK8-完全培养基(每孔:20CCK8 + 180完全培养基),此时加3个空白孔。 孵育:将培养板放入培养箱中孵育0.5-4小时。注意观察液体颜色深浅,若此时颜色尚浅,适当延长孵育时间,每半个小时看一下液体颜色,至出现明显趋势即可进行吸光度测定。 吸光度测定:每孔吸取100到96孔板中,用酶标仪测定在450nm处的吸光度。空白孔OD值约为0.3,OD值在0.8-1.2较好,小于2的数据可用。 数据处理:计算细胞活率,绘制图表。 【摸索经验】 铺板数量的摸索:根据细胞加药前的细胞密度、细胞大小、细胞生长速率与培养时间来确定铺板数量。一般来说,加药前细胞密度在50-70%较为合适。 OD值的调整:根据实验具体情况调整OD值,确保数据准确可靠。
苏丹四染液 嘿,生物迷们!今天给大家分享一些超实用的生物学习小技巧,保证你们轻松应对各种考试。 斐林试剂与还原糖的反应 你知道吗?斐林试剂可以用来检测可溶性还原糖。把还原糖和斐林试剂混合,再水浴加热,就会出现美丽的砖红色沉淀。这个反应可是鉴定还原糖的经典方法哦! 苏丹III和苏丹IV与脂肪的染色 脂肪的检测也是生物实验中的一大亮点。苏丹III和苏丹IV都能用来检测脂肪,但颜色不同。苏丹III会让脂肪变成橘黄色,而苏丹IV则会让脂肪变成红色。记住这一点,考试时就不会混淆啦! 双缩脲试剂与蛋白质的检测 蛋白质的检测也很简单,只需要双缩脲试剂。把蛋白质和双缩脲试剂混合,就会出现紫色。这个反应特别适合用来检测蛋白质的存在。 碘液与淀粉的染色 淀粉的检测也不难,碘液是它的好伙伴。把淀粉和碘液混合,会出现美丽的蓝色。这个反应可是鉴定淀粉的经典方法哦! DNA的染色与鉴定 想要检测DNA?没问题,甲基绿和二苯胺是你的好帮手。甲基绿会让DNA染色成绿色,而二苯胺则会让DNA在水浴加热后变成蓝色。记住这两个反应,考试时轻松应对! 吡罗红与RNA的染色 RNA的检测也很简单,吡罗红是你的好伙伴。把RNA和吡罗红混合,RNA会变成红色。这个反应特别适合用来检测RNA的存在。 台盼蓝与死细胞的染色 台盼蓝可以染死细胞,让它们变成蓝色。这个反应在生物学实验中也很常见,记住它可以帮助你更好地理解细胞死亡的过程。 健那绿与线粒体的染色 健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料,可以让活细胞呈现蓝绿色,而细胞质则接近无色。这个反应特别适合用来观察线粒体的形态和分布。 酒精与重铬酸钾的反应 酒精的检测也很简单,橙色的重铬酸钾溶液在酸性条件下与酒精发生化学反应,变成灰绿色。这个反应特别适合用来检测酒精的存在。 CO₂的检测 CO₂可以和澄清石灰水反应,生成碳酸钙沉淀,使溶液变得浑浊。另外,CO₂还可以和溴麝香草酚蓝水溶液反应,溶液由蓝变绿再变黄。记住这些反应,考试时轻松应对! 染色体染色 染色体容易被碱性染料染成深色。这个反应在生物学实验中也很常见,记住它可以帮助你更好地理解染色体的结构和功能。 特别提示 考试中千万别写错字!一个字错了就没分啦!一定要仔细检查,标记出容易出错的地方。 希望这些小技巧能帮到你们,祝大家考试顺利!ꊊ封面来源: canva可画
细胞计数新手指南:台盼蓝染色法 嘿,大家好!今天我们来聊聊细胞计数的那些事儿。在细胞培养的世界里,了解细胞的生活状态、鉴别死活、确定接种浓度和数量,以及计算存活率和增殖度,都是非常重要的。而这一切,通常都需要用到台盼蓝染色法。 首先,台盼蓝是一种活体染料,它不能透过活细胞的完整细胞膜,所以活细胞不会着色。但是,一旦细胞死亡,它们的细胞膜通透性会增加,台盼蓝就能进入细胞内,让细胞变成蓝色。这样一来,我们就可以通过观察细胞的染色情况,来判断细胞的死活。 在实验中,我们通常会用到血细胞计数板来计数。这个计数板的设计非常巧妙,它让每个细胞都落在特定的方格内,方便我们计数。而且,我们还会按照白细胞计数的方法来计数,这样就能更准确地了解细胞的生活状况。 那么,实验中需要用到的材料有哪些呢?通常我们需要准备0.4%的台盼蓝溶液、无水乙醇或95%的乙醇溶液、脱脂棉、相差显微镜、试管、吸管、毛细吸管以及细胞计数板。这些材料都是实验中必不可少的哦! 在实验过程中,有几个小细节需要注意。首先,向计数板中滴加细胞悬液时要干脆利落,加量要适中,多了盖片会漂移,少了又容易有气泡。其次,如果镜下观察到方格中的细胞分布不均匀,说明细胞悬液没有混合好,需要重新混合后再计数。 总之,细胞计数是一个非常实用的实验方法,通过台盼蓝染色法,我们可以更准确地了解细胞的生活状态和死活情况。希望这篇文章能帮到大家,祝大家实验顺利!갟쀀
细胞培养必备技能:细胞计数全攻略 在细胞培养中,了解细胞的生长状态、鉴别死活细胞、确定接种浓度和数量以及计算细胞存活率和增殖度是非常重要的。以下是细胞计数的详细步骤和原理。 细胞计数原理 细胞悬液制备后,常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色。台盼蓝不能透过活细胞的正常细胞膜,因此活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高,染料进入细胞内使细胞着色(蓝色)。细胞计数一般使用血细胞计数板,按白细胞计数方法进行计数,便于确定细胞的生活状况。 𐦖 制备细胞悬液:将动物细胞用PBS制备成适当浓度的细胞悬液备用。 擦拭计数板和盖玻片:用无水乙醇或95%乙醇溶液擦拭计数板,然后用绸布擦净。另取一张擦净的盖玻片覆盖在计数板上。 染色:用滴管吸取0.4%台盼蓝染液,按1∶1比例加入细胞悬液中。从计数板边缘缓缓滴入,使之充满计数板和盖片之间的空隙中。注意不要使液体流到旁边的凹槽中或带有气泡,否则要重做。稍候片刻,将计数板放在低倍镜下(10㗱0倍)观察计数。 计数:按图计算计数板的四角大方格(每个大方格又分16个小方格)内的细胞数。计数时,只计数完整的细胞,若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。在一个大方格中,如果有细胞位于线上,一般计下线细胞不计上线细胞,计左线细胞不计右线细胞。二次重复计数误差不应超过Ⱶ%。镜下观察,凡折光性强而不着色者为活细胞,染上蓝色者为死细胞。 换算细胞数:计完数后,需换算出每ml悬液中的细胞数。由于计数板中每一方格的面积为0.01cmⲯ똤.01cm,这样它的体积为0.0001 cm⳯1 mmⳣ由于1ml=1000 mm⳯以每一大方格内细胞数㗱0,000=细胞数/ml,故可按下式计算:细胞悬液细胞数/ml=4个大格细胞总数/4㗱0,000。 稀释倍数:如计数前已稀释,可再乘稀释倍数。 计算存活与死亡细胞比例:计数后,计算细胞悬液浓度并求出存活与死亡细胞数的比例。 附:细胞计数原理图 通过以上步骤,你可以准确地了解细胞的生长状态和数量,为后续的实验提供重要参考。
细胞计数仪:9999元值不值得买? 最近,细胞治疗领域又出现了一个大新闻!某公司推出了一款名为Zorro的明场细胞计数仪,售价仅需9999元!这个价格简直让人心动,但到底值不值得买呢?让我们来一探究竟。 市场调研:明场细胞计数仪的多样性 首先,我们先来了解一下细胞计数仪的基本分类。细胞计数仪主要分为明场细胞计数仪和荧光细胞计数仪。明场细胞计数仪适用于简单的细胞计数和活率测定,而荧光细胞计数仪则需要不同的激发光源。 目前市场上,明场显微镜品牌大多为进口,国产品牌相对较少。Zorro想要在国内市场占据一席之地,确实需要拿出足够的实力来竞争。 国产细胞计数仪的现状 细胞计数仪是细胞实验室的标配仪器,尤其是制药企业,对细胞计数的需求非常大。目前,国内市场上主要的细胞计数仪品牌都是进口的,国产品牌主要集中在荧光细胞计数仪领域。 根据统计,国内有10家生产细胞计数仪的厂家,主要集中在北上广深和江苏等地。其中,Countstar是国内市场的绝对领导者,2022年的销售额超过了1亿人民币。其他国内品牌的销售额都在千万级别,甚至百万级别。 Zorro细胞计数仪的优势 据传,Zorro细胞计数仪采用了先进的图像处理系统和人工智能算法,能够快速准确地识别并计数细胞。相较于传统的人工计数,Zorro的单样品分析时间仅需两秒钟!操作也非常简单,只需五个步骤: 使用专业数据线将计数仪与笔记本连接。 取出细胞计数板,撕开保护膜,将25的细胞样品注入样品槽(如需测量细胞活率,则需要将台盼蓝与细胞进行1:1混合)。 根据指示灯和计数板左边的刻度提示,将计数板插到指定位置。 点击智能分析,通过拨动仪器上方的旋钮将细胞调节至中心透亮边缘锐利的状态。 点击开始分析,两秒后即可查看分析结果。 结论 总的来说,Zorro细胞计数仪在价格和性能上都具有一定的竞争力。对于那些需要大量进行细胞计数的实验室来说,这款仪器无疑是一个不错的选择。当然,具体是否值得购买还需要根据实际需求和预算来决定。如果你对这款仪器感兴趣,不妨亲自体验一下再做决定!
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