eb染料最新视觉报道_eb染料的替代品(2024年12月全程跟踪)
核酸染料毒性知多少?슦 𘩅𘦟料的毒性其实是个复杂的问题,它不仅取决于染料的化学结构,还和实验条件、使用方法有关。下面我们来看看几个关键因素。 膜通透性:EB(溴化乙锭)是个强诱变剂,因为它的小分子量让它容易进入细胞。而EB的二聚体Ethidium Homodimer(EthD)虽然嵌入DNA的能力更强,但毒性却小得多,因为它大分子量,不能透过细胞膜。SYBR系列染料虽然低毒,但因为通常溶于DMSO(容易水解),所以如果溅到皮肤上,更容易进入皮肤。 降解速度:EB在体外很难降解,一旦进入体内可能残留很长时间,增加毒性。而SYBR Green I等染料因为不稳定,比较容易自然降解,所以毒性较低。 降解产物的毒性:用强碱法降解EB得到的产物有时比EB本身毒性更大,而有些染料的降解产物毒性却低很多,甚至无毒。 与DNA的结合能力:很多实验结果显示,即使EB染料也很难嵌入到染色体中的DNA,因为染色体中的DNA已经紧密地与各种组蛋白结合。 细胞修复能力:正常人体有很强的修复突变的能力,如修复日光中UV诱导的DNA突变。 SYBR Green I的优缺点 目前最常见替代EB的核酸染料是SYBR Green I(属于花氰类染料),虽然毒性比EB低、灵敏度比EB高,但由于其化学稳定性差(怕光、怕水、怕热),实验结果的重复性差。此外,SYBR Green I在电泳过程中能在DNA分子间移位,使DNA条带模糊和扭曲,使得电泳清晰度和分辨率不如EB。 新型低毒核酸染料的特点 低毒:主要成分未发现对人体有致癌性,未被列入有毒有害品,有利于保护使用者的健康和保护环境。 灵敏:检测灵敏度跟EB相当,满足常规核酸电泳实验要求。 稳定:对光、水和热的稳定性跟EB相当,可加入琼脂糖凝胶中反复熔化。 无分子间位移现象:不会出现SYBR染料常见的条带模糊和扭曲现象。 使用方法多样:既可以加入熔化的胶中,也可以电泳后染色,还能用于PAGE。 兼容性强:跟各种常用的核酸电泳缓冲液(如TBE、TAE)兼容,但在TBE中背景最低。 观察方便:可以使用现成的观察EB的300nm UV紫外仪。 适用范围广:可用于DNA电泳染色和RNA电泳染色。 日光下观察:DNA或RNA浓度较高时可以直接在日光下观察(需要将胶放在黑色背景下),避免了UV对DNA的伤害,非常适用胶回收实验。 总的来说,选择合适的核酸染料需要综合考虑毒性、灵敏度、稳定性和使用方便性等多个方面。希望这些信息能帮到你!좜耀
电泳结果图如何分析 实验项目:酶切反应及电泳检测 ꌧ:掌握琼脂糖凝胶电泳操作,熟悉酶切反应原理及操作 젥ꌥ理: 限制性内切酶能够识别并切割特定序列的DNA。它们分为三类:I类酶、II类酶和III类酶。I类酶在识别位点附近随机切割,II类酶在识别位点3'端24~26bp处切割DNA,而III类酶由两种酶组成,一种为限制酶,识别并切割特定序列;另一种为甲基化酶,修饰同一序列。 ꠥꌤ褸试剂: 限制性内切酶 识别4~6个核苷酸的回文序列,切割位点在识别序列中,有的在识别序列一侧,有的在对称轴处切割,形成粘性末端。 菌体、质粒、Buffer、BamHI、EcoRI 实验内容与步骤: 酶切反应: 在0.2ml Ep管中,用移液器加入以下试剂和药品:菌超纯水5,质粒5,Buffer 2,BamHI、EcoRI各1,轻混后离心。 电泳: 制备0.6%琼脂糖凝胶:取0.8g琼脂糖置于锥形瓶中,加入100ml 1XTAE,微波炉加热煮沸2次至琼脂糖完全融化。 将制胶板放入制胶槽,倒入冷却到约60℃的琼脂糖凝胶液,加入溴化乙锭(EB)染料(1:1000的比例),摇晃或振荡混合均匀后小心地倒入制胶板上,室温下静置直至凝胶凝固。 垂直轻技梳子,将凝胶及制胶板放入电泳槽中,添加1XTAE电泳缓冲液至液面超过胶板1mm。 用移液枪加入点样液,确定加样位置后通电,样品由负极向正极移动,30分钟后停止电泳。 拍照记录结果。 实验结果: 实验结果基本符合预期。由于质粒不同,形成三条带:开环、线性和超螺旋结构。开环由于展开面积较大,阻力较大,出现在最后;线性DNA在中间;超螺旋结构由于紧缩得很小,所以跑在最前面。各带亮度不同,说明超螺旋DNA含量最多。 ᠦ事项: 酶的量不能加多,否则易出现假活性。 离心时间不能太长,否则会出现乱切现象。 选择不同的酶同时进行切割时,需要确保它们有相同的Buffer。 通过本次实验,我们掌握了琼脂糖凝胶电泳操作和酶切反应的基本原理及操作方法,为后续的分子生物学研究打下了基础。
实验室有毒试剂清单|珍爱生命,远离实验 昨天在实验室搞多聚甲醛的时候,没在通风橱里操作,结果今早起来头巨痛!真是教训啊,大家做实验一定要戴好口罩,做好防护!立马整理了一下实验室里的有毒试剂,绝不做实验室的牺牲品! DMSO(二甲基亚砜)ꊨ🙤𘪤𘜨忧褺冻存液的配置,还有作为常见粉剂的溶剂。但它有血管毒性和肝肾毒性,小心为上! EB(溴化乙锭) EB用于琼脂糖凝胶电泳的核酸染料,剧毒!我们学校仪器平台都不让用EB显影,致癌性很强,大家一定要小心。 PCR实验슥PCR实验的时候,苯、二甲苯、酚、trizol、氯仿这些有机溶剂都是致癌的。还有DEPC(焦炭酸二乙酯),用于溶解RNA,但它是潜在的蛋白质变质剂。做PCR一定要戴好口罩! WB实验 WB实验中,PMSF用于蛋白提取,高强度毒性;SDS(十二烷基硫酸钠)用于SDS-PAGE电泳凝胶配置,有刺激作用,可能引起呼吸系统过敏性反应;丙烯酰胺(未聚合)是蛋白电泳凝胶原料,有潜在神经毒性;TEMED(四甲基乙二胺)用于SDS-PAGE凝胶配置,催化凝胶凝固,但易挥发,强神经毒性。 Triton x-100🙤𘪤𘜨忦刺激性,可以因吸入或皮肤吸收受害,大家要小心。 多聚甲醛♂️ 多聚甲醛用于组织固定灌流,易挥发且剧毒。昨天我就是因为这个倒霉东西头才这么痛的。 DTT (二硫苏糖醇)ꊥ子有机还原剂,散发出难闻的气味。可以因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。 吉姆萨 Giemsa 吉姆萨染料有极强的毒性,可致命或引起眼睛失明。可以通过吸入和皮肤吸收,其可能的危险是不可逆的效应。 过硫酸铵 APS动🇧 𘩓膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大危害性。吸入可致命。 甲醇有毒,致命剂量大约是70毫升。甲醇的毒性对人体的神经系统和血液系统影响最大。它经消化道、呼吸道或皮肤摄入都会产生毒性反应,甲醇蒸汽能损害人的呼吸道粘膜和视力。佩戴好防毒面具和护目镜,避免接触其蒸汽,注意在通风橱内操作。 乙醚劤高度挥发,遇明火、高热极易燃烧爆炸,并有特殊气味。化学性质不稳定,日光下去空气接触,易形成爆炸性过氧化物过氧化乙醚。应小心使用。广泛用作麻醉剂。 希望大家在做实验的时候一定要注意安全,珍爱生命!
RNA琼脂糖凝胶电泳实验指南 𑊤𘀣实验目的 掌握植物总RNA的非变性胶电泳原理和方法。 二、实验材料、器具及药品 材料:蘑菇的总RNA溶液。 器具:电泳仪、电泳槽、电子天平、移液器、枪头、微波炉、紫外透射检测仪。 药品:琼脂糖、1XTAE电泳缓冲液、0.5/ml溴化乙锭(EB)10X载样缓冲液。 三、实验步骤 非变性琼脂糖凝胶电泳 用1XTAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶,加1XTAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。 在超净工作台上,用移液器吸取总RNA样品4于封口膜上。在实验台上再加入51XTAE电泳缓冲液及110X载样缓冲液,混匀后,小心加入点样孔。 打开电源开关,调节电压至100V,使RNA由负极向正极电泳,约30分钟后将凝胶放入EB染液中染色5分钟,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。 变性琼脂糖凝胶电泳 试剂: MOPS缓冲液(10X):0.4mol/L吗啉代丙烷磺酸(MOPS)(Ph7.0),0.1mol/LNaAc,10mol/LEDTA。 上样染料:50%甘油,1mmol/LEDTA,0.4%溴酚蓝,0.4%二甲苯蓝。 甲醛。 去离子甲酰胺。 电泳槽清洗:去污剂洗干净(一般浸泡过夜)——水冲洗——乙醇干燥——3%H2O2灌满——室温放置10分钟——0.1%DEPC水冲洗。 操作: 将制胶用具用70%乙醇冲洗一遍,晾干备用。 配制琼脂糖凝胶: 称取0.5g琼脂糖,置干净的100ml锥形瓶中,加入40ml蒸馏水,微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。 待胶凉至60-70℃,依次向其中加入9ml甲醛、5ml10X MOPS缓冲液和0.5ul溴化乙锭,混合均匀。 灌制琼脂糖凝胶。 样品准备: 取DEPC处理过的500ul小离心管,依次加入如下试剂:10X MOPS缓冲液2ul,甲醛3.5ul,甲酰胺(去离子)10ul,RNA样品4.5ul,混匀。 将离心管置于60℃水浴中保温10分钟,再置冰上2分钟。 向管中加入3ul上样染料,混匀。 上样。 电泳:电泳槽内加入1X MOPS缓冲液,于7.5V/ml的电压下电泳。 电泳结束后,在紫外灯下检查结果。
实验室毒物大揭秘! 实验室里,那些看似神奇的化学试剂,其实隐藏着不小的危险。今天,我们就来聊聊那些让人闻风丧胆的有毒试剂。 DMSO(二甲基亚砜)ꊄMSO常用于冻存液的配置,也是许多粉剂的溶剂。然而,它具有血管毒性和肝肾毒性,使用时一定要小心。 EB(溴化乙锭)슅B是琼脂糖凝胶电泳中的核酸染料,具有致癌性。在我们学校的仪器平台,使用EB时甚至不允许显影,因其毒性极强。 PCR实验中的有毒试剂CR实验中使用的苯、二甲苯、酚、trizol、氯仿等有机溶剂都有致癌风险。DEPC(焦炭酸二乙酯)用于溶解RNA,是潜在的蛋白质变质剂。进行PCR实验时一定要戴好口罩。 WB实验中的危险试剂ꊗB实验中使用的PMSF用于蛋白提取,具有高强度毒性;SDS(十二烷基硫酸钠)用于SDS-PAGE电泳凝胶配置,具有刺激作用,可能引起呼吸系统过敏性反应;丙烯酰胺(未聚合)作为蛋白电泳凝胶原料,具有潜在神经毒性;TEMED(四甲基乙二胺)用于SDS-PAGE凝胶配置,能催化凝胶凝固,易挥发,且具有强神经毒性。 Triton x-100riton x-100具有刺激性,可能因吸入或者皮肤吸收而使人受害。 多聚甲醛ꊥ䚨甲醛应用于组织固定灌流,易挥发且属于剧毒物质。 DTT (二硫苏糖醇)ꊄTT是一种小分子有机还原剂,会散发出难闻的气味。可能因吸入、咽下或者皮肤吸收而危害健康。 吉姆萨 Giemsaꊥ姆萨染料毒性极强,可能致命或者导致眼睛失明,能够通过吸入和皮肤吸收进入人体,其可能造成的危险具有不可逆的效应。 过硫酸铵APSꊨ🇧 𘩓黏膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤具有极大的危害性。吸入甚至可能致命。 甲醇𗊧有毒性,致命剂量约为70毫升。甲醇的毒性对人体的神经系统和血液系统影响最为显著,不论是经消化道、呼吸道还是皮肤摄入,都会产生毒性反应。甲醇蒸汽会损害人的呼吸道粘膜和视力。因此,要佩戴好防毒面具和护目镜,避免接触其蒸汽,并注意在通风橱内进行操作。 乙醚ꊤ是一种高度挥发,遇明火、高热极易燃烧爆炸,并具有特殊气味的液体。其化学性质不稳定,在日光下与空气接触,易形成爆炸性过氧化物过氧化乙醚。使用时应倍加小心。乙醚广泛用作麻醉剂。 进入实验室时,一定要严格遵守安全规定,戴好防护用具,手套、护目镜一个都不能少!生命只有一次,千万不能掉以轻心!让我们一起远离危险,保护好自己!
本科生PCR实验全攻略,注意事项全在这! PCR,全称聚合酶链式反应,是实验室中一种常用的鉴定试验动物基因型的方法,也是本科生学习的第一个基础实验。虽然PCR实验看似简单,但稍有不慎就可能导致结果不显著。本文以小鼠基因型鉴定为例,详细介绍PCR实验的整体流程和一些注意事项。 1⃣️ DNA提取 a) 准备组织样本(如脚趾或尾巴)+ 400 NaOH(确保样本全部浸于NaOH中) b) 100℃水浴20min(每隔5min开盖透气,防止蒸汽使EP管盖弹开) c) 加入40 Tris-HCl,混匀 d) 12000rpm,4℃,2min离心,取上清液,可在4℃储存数周 2⃣️ PCR体系配制 a) 根据目标基因型找到对应的引物,计算PCR体系(体系量应略多于样本数量) 2X Taq 10 F 0.5 R 0.5 RNase-free H2O 7 b) 将所需试剂冰上解冻后,按照计算体系配于EP管中(EP管应做好标记) c) 在八联管盖上做好对应样本的标记,按照18ul体系+2ul DNA加入八联管,并设置一个WT和水样作为对照组 d) 根据目标基因型选择对应PCR程序,扩增DNA 3⃣️ 制备琼脂糖凝胶 a) 2% 琼脂糖凝胶(大胶):1.4g琼脂糖+70ml TAE(或1.6g琼脂糖+80ml TAE),微波炉加热1min,振荡后再加热1min,待溶液中无结晶颗粒后,冷却至40-50℃ b) 按1:20000加入EB核酸染料,摇匀(一定要充分摇匀,否则染料会单独跑出一条条带,而基因型不明显) c) 倒入凝胶托盘,待20-30min凝固。注意不要产生气泡(可以用枪头拨到角落) 4⃣️ 电泳 加入marker和样本各8(根据梳尺大小或绿酶活性酌情增加或减少),最大电流,恒压110V条件下跑胶20-30min,关注marker最前端条带,勿使样本跑出凝胶。 5⃣️ 扫膜 (具体步骤略) 通过以上步骤,你就能顺利完成PCR实验,鉴定出小鼠的基因型啦!
Marker条带越跑越淡? DNA电泳时,marker条带为什么会变得越来越淡呢?这可能是由多种原因导致的。 1️⃣ DNAmarker上样量不足可能是其中一个原因。确保按照说明书加样,或者根据实验样品情况调整加样量哦。 2️⃣ 电泳过程中,DNA可能已经跑出凝胶。注意,电泳时溴酚蓝跑到胶长的2/3处即可停止,避免DNA条带变弱。 3️⃣ DNA条带可能被示踪染料所遮盖。尝试使用不同的电泳loading dye,或者适当降低loading-dye用量,让待检测的DNA样品避开示踪染料的干扰。 4️⃣ 凝胶中未加或后染时核酸染色不均匀也可能导致条带变淡。比如,过夜存放的凝胶中的EB会分解,第二天使用时DNA条带会明显变弱。建议使用当天制备的凝胶,并确保加入适量的核酸染料。 解决这些问题,你的marker条带应该会更清晰、更稳定!如果还有其他问题,不妨查阅更多资料或咨询专业人士哦。
精选酸性染料推荐,满足你的染色需求 经过精心整理,我们终于推出了部分高牢度酸性染料,虽然数量有限,但我们会尽力满足您的需求。以下是我们推荐的一些酸性染料: 1️⃣ Acid Rhodamine B 2️⃣ Acid RED F-2R 3️⃣ Acid BROWN M-B 4️⃣ Acid BLACK LD 5️⃣ Acid SKY BLUEL-2B 6️⃣ Acid VIOL FTN-EB 7️⃣ Acid blue GLW 8️⃣ Acid NAVY R 9️⃣ ACID RED 2B ACID RED S-G 1️⃣1️⃣ ACID RED S-B 1️⃣2️⃣ ACID YELLOW 4GN 1️⃣3️⃣ ACID YELLOW 2R 我们提供多种颜色的染料,满足您不同的染色需求。无论是手染线还是其他染色项目,我们都能为您提供优质的染料。快来选择您需要的染料吧!
「女儿患红斑狼疮单亲爸爸一夜白头」系统性红斑狼疮的病因尚不十分明确,发病机制较复杂。明确的是跟遗传、紫外光、性激素、感染或某些药物等多种因素相关,红斑狼疮逐越来越高发,还有以下几个因素可能容易诱发狼疮。 ◾️压力过大 压力过大不仅会诱发红斑狼疮,资料显示:长期处于精神紧张、焦虑、烦躁、沮丧悲观、恐惧、消沉抑郁等状态下,也会导致雌激素分泌失调,导致红斑狼疮复发 ◾️环境因素、环境恶化 注意防晒、注意保持居室环境卫生整洁,预防EB病毒感染。 ◾️饮食不健康 食物如芹菜、草头菜,羊肉、狗肉、驴肉和鹿肉等,食用后可能会增加光敏感或加重病情,建议红斑狼疮患者谨慎食用 ◾️狼疮患者在选择职业时需要特别注意,尽量避免到下述环境中工作:暴露在烈日下工作、染料绘画工作、以及工作中长时间接触油漆、化工厂、油漆工、建筑材料(化工品)、美容美发、美甲、陶瓷制作、制鞋业等职业,加班熬夜、过于辛苦的工作。 红斑狼疮也不是不治之症,目前医疗技术正在不断提升,坚定信念,积极配合医生接受治疗,愿奇迹降临,让这个家重拾温暖与欢笑。
쨭榃!这些染料可能危害你的健康 觧研实验中,我们经常会接触到各种染料,它们或许能为我们揭示科学的奥秘,但同时也可能带来潜在的健康风险。 例如,EB(溴化乙锭),这款曾被广泛使用的核酸染料,具有强烈的诱变性,能够轻易穿透细胞膜,与DNA结合,对细胞造成损害。长期接触可能影响生殖细胞的正常功能,进而对生育能力构成威胁。芊幸运的是,现在我们有了更安全、毒性更低的替代品——GelRed。这款新一代的核酸电泳染料,不仅保持了与EB相同的光谱特性,可以直接替代而无需更换成像系统,而且其灵敏度更高,能够更清晰地展示核酸条带。更重要的是,GelRed经过严格的安全测试,确保分子量足够大,不能自由穿梭细胞膜,接触后不会通过皮肤进入人体细胞,从而大大降低了实验人员的健康风险。 ᥜ詀择染料时,我们必须时刻铭记:安全永远是第一位的。只有确保自己的健康和安全,我们才能更好地投入到科研工作中去。因此,让我们共同警惕那些可能危害健康的染料,选择更安全、更健康的替代品吧!ꀀ
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