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传代培养最新视觉报道_传代培养名词解释(2024年11月全程跟踪)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：热点更新日期：2024-11-27

传代培养

动物细胞培养全攻略：从基础到实践 𐟌𑠥Š觉駻†胞培养的基础步骤获取材料：从动物胚胎或幼龄动物的器官、组织中获取材料。剪碎处理：将材料剪碎，并用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理，形成单个细胞。培养基配制：将处理后的细胞移入培养基中，配成一定浓度的细胞悬浮液。细胞贴壁：悬浮液中的细胞会贴附在培养器皿壁上，形成细胞贴壁。接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到互相接触时，细胞会停止分裂增殖。传代培养：将出现接触抑制的细胞重新用胰蛋白酶处理，再配成新的细胞悬浮液。 𐟔젥Š觉駻†胞培养所需的器皿培养器皿：分为玻璃和塑料材质。玻璃材质易于清洗和重复使用，而塑料材质则价格便宜且一次性使用。常见的培养器皿有三种：培养瓶：用于培养及繁殖细胞，置于95%空气与5%CO2混合气体的培养箱中进行培养。培养皿：用于装取、分离、处理组织，以及进行细胞毒性、单细胞分离、同位素掺入实验。多孔培养板：用于各种检测实验，如细胞克隆及细胞毒性实验。不同颜色的多孔培养板有不同的用途。操作器皿：用于实验室中的操作，包括贮液瓶、吸管和加样器。贮液瓶：用于存放或配制培养用液体，如培养液、血清及试剂等。吸管：分为刻度吸管和无刻度吸管，前者用于吸取、转移液体，后者用于吸取、转移液体、吹打、混匀及传代细胞。移液器：又称加样器，用于吸取、移动液体或滴加样本。最好的是微量加样器，吸量准确、方便，可保证实验样品（或试剂）含量精确，重复性好。其他用品：包括离心管（收集细胞）、试管（放置试剂）、玻璃容器（存放吸管）、贮槽（存放小件培养物品）、冻存管（冻存细胞），各种注射器、烧杯、量筒、漏斗、酒精灯等。 𐟧ꠥŠ觉駻†胞培养的实践应用原代培养：从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。传代培养：当细胞从动植物中生长迁移出来，形成生长晕并增大后，将其分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。通过这些步骤和器皿的使用，可以进行有效的动物细胞培养，为科研和实验提供可靠的细胞来源。

细胞传代培养全攻略：从基础到实践细胞传代培养是细胞生物学实验的基础，当细胞在培养瓶中达到一定密度时，需要通过传代来继续生长。这个过程涉及到一系列的步骤和注意事项，确保实验的顺利进行。 𐟧젦料准备培养瓶/皿离心管移液管移液器废液缸 75%酒精所需培养细胞 𐟒Š 药品准备 DMEM培养基小牛血清或胎牛血清 0.25%胰蛋白酶 PBS缓冲液青链霉素双抗 𐟔젤𛪥™襇†备 CO₂培养箱显微镜超净台 𐟓 实验步骤从培养箱中取出细胞，镜下观察细胞状态，判断是否达到传代密度。回到超净台，吸去培养基，加入2ml左右的PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸去PBS，加入0.25%胰酶，继续晃动培养瓶使胰酶浸润所有细胞。将培养瓶放入37℃培养箱，开始消化并计时，消化时间根据细胞特性有所不同，例如HEK-293T细胞的消化时间为2分钟。用含10%血清的DMEM培养基终止消化，通过反复吹打使细胞脱离培养皿底部，尽量呈单颗细胞的悬浮液。收集细胞悬液离心，室温下1200rpm，5分钟（不同细胞离心参数设置不同），离心后吸出上清丢弃。在新的培养皿中加入新鲜培养基，用新鲜培养基将细胞重悬，吹打几下混匀细胞，将细胞接种到新培养皿，摇晃混匀。将培养皿放入培养箱。 𐟓 注意事项无菌操作规范：实验开始前和结束后，需要将超净台紫外照射灭菌30分钟，实验过程中要穿好灭菌服，戴好灭菌手套和口罩。所有物品从外面移入超净台都需要喷洒75%酒精消毒，并且同样用75%酒精消毒双手。使用胰酶消化细胞要把握好时间，切勿消化过度，及时终止消化。如果消化不够充分，可以轻拍培养皿帮助细胞脱落。弃上清的动作需一次完成，切忌抬起管口，让液体流回底部后，又再次倾倒。回流的液体会把细胞团块冲散甚至冲起来，再倾倒有把细胞团块倒掉的风险。养成在培养皿上做标记的习惯，注明传代时间，细胞种类。通过以上步骤和注意事项，可以确保细胞传代培养的顺利进行，为后续实验提供充足的细胞资源。

𐟎‰新细胞到手啦！𐟎‰ 𐟓栥Œ…裹终于到啦！打开一看，新买的细胞静静躺在T25培养瓶中。 𐟔 首先，得仔细检查包装是否完整，培养瓶有无破损或漏液哦。 𐟍𖠦Ž姝€，用75%的酒精轻轻擦拭培养瓶外部，然后放入37摄氏度、5%二氧化碳的细胞培养箱中，让细胞们安静地“睡”3-4小时。 𐟔젤𙋥Ž，取出培养瓶，用显微镜仔细观察细胞的生长情况。别忘了在不同倍数（40x, 100x, 200x）下拍照保存，为售后留个底哦。 𐟌𑠥悦žœ细胞密度达到80%以上，就要考虑传代培养啦。否则，就移除培养基，预留6毫升左右继续培养，等密度合适再传代。新细胞到手，一切都得小心翼翼地呵护它们哦！𐟒•

𐟌𑦖𐦉‹必读ⷈK-2细胞培养全攻略𐟌𑊱️⃣ 细胞复苏：首先，将含有1mL细胞悬液的冻存管放入37℃的水浴中快速晃动，然后加入4mL培养基并搅拌均匀。接着，在1000RPM条件下离心4分钟，倒掉上清液，加入1-2mL培养基后吹匀。将所有细胞悬液加入培养瓶中过夜培养（或加入10cm皿中，加入大约8mL培养基，过夜培养）。第二天换液并检查细胞密度。𐟔 2️⃣ 细胞传代：当细胞密度达到80%-90%时，可以进行传代培养。𐟘Š (1️⃣) 直接倒掉培养容器中的培养上清。用PBS洗涤细胞2次，洗涤后的PBS直接倒掉，不需要保留。𐟚🊨2️⃣) 用PBS洗涤培养容器1~2次，把所有细胞悬液收集到离心管中，250g离心4分钟。⏰ (3️⃣) 离心后去除上清液。加入2mL预热的完全培养基，轻轻吹打细胞沉淀，充分吹散、混匀。𐟌꯸ (4️⃣) 把细胞按照(2.5~4.0) 㗱0^4个活细胞/cmⲧš„比例接种到适合的培养容器中。𐟔슦𓨦„：如果没有计数，也可以按照适当的比例进行传代。首次传代建议按照1:2进行，后续可以根据细胞实际生长情况参考说明书自由调整传代比例范围。𐟓 3️⃣ 细胞冻存：当细胞生长到可以传代的密度时，可以准备冻存啦！𐟆’ (1️⃣) 消化细胞，取少量细胞悬液进行计数。细胞悬液经过250g离心4分钟。𐟧ꊨ2️⃣) 离心后倒掉上清液，用适量4℃预冷的冻存液重新悬浮细胞。然后按比例或数量将细胞分装到冻存管中。一般冻存密度为(1.0~2.0)㗱0^6个/mL。𐟒犦𓨦„：如果用冻存液重悬计数后，细胞长时间放置在非培养条件下会严重影响细胞状态。请把细胞放在4℃的冰箱中以减缓细胞代谢，更好地保持细胞状态。❄️ (3️⃣) 使用海星一步冻存液时，直接把冻存管竖放在-80℃冰箱里就能完成“一步”冻存。如果使用程序冻存液，则需要先把冻存管放入提前预冷的程序降温盒中，然后再放入-80℃冰箱。𐟧ꢝ„️ (4️⃣) 24小时后，可以把冻存管转移到液氮中进行长期保存。⏳❄️ 注意：细胞不能长时间保存在-80℃冰箱中，请尽快在24小时内转移到液氮中保存。❄️𐟒Ž

「果蝇在中国空间站画面」神舟十九号航天员已将果蝇从天舟八号运飞船放置在空间站实验柜，开展亚磁果蝇实验。亚磁果蝇实验是我国首次在空间站开展亚磁，微重力环境对果蝇基因，生存繁衍的影响研究。这些果蝇将有望成为第一种在空间站实现“三代同堂”的动物，果蝇实验传代培养由航天员在软手套袋里面操作。航天员会从实验模块里面取出培养单元，然后把它转移到手套袋里面，手套袋里面有一个取样的气泵，把果蝇抽出来放到另外一个新的培养盒里面，从而将上行的这一代和在天上培养的一代分开。视频:中国载人航天办公室China航天的微博视频

免疫荧光技术：揭秘细胞世界的荧光秀 𐟌ˆ 免疫荧光（Immunofluorescence），简称IF，是一种利用抗原抗体反应原理的技术。简单来说，就是把不会影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体或抗原上，然后通过荧光显微镜观察，从而确定抗原或抗体的性质和定位。这个过程就像是给细胞世界披上了一层荧光的外衣，让我们能够更直观地看到细胞内的奥秘。实验步骤 𐟧ꊧ𛆨ƒž准备对于单层生长的细胞，传代培养时把细胞接种到预先放有处理过的盖玻片的培养皿中。等细胞快长成单层时，取出盖玻片，用PBS洗两次。对于悬浮生长的细胞，取对数生长的细胞，用PBS离心洗涤（1000rpm，5min）两次，然后用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片。固定根据需要选择适当的固定剂来固定细胞。固定好的细胞可以放在含叠氮纳的PBS中，4℃保存3个月。然后用PBS洗涤3次，每次5分钟。通透用交联剂（如多聚甲醛）固定的细胞，在加入抗体孵育前需要进行通透处理，以保证抗体能够到达抗原部位。选择通透剂时要考虑抗原蛋白的性质。通透时间一般在5-15分钟，通透后用PBS洗涤3次，每次5分钟。封闭用封闭液对细胞进行封闭，时间一般为30分钟。一抗结合在室温下孵育1小时或4℃过夜。然后用PBS漂洗3次，每次5分钟。二抗结合间接免疫荧光需要使用二抗。在室温避光条件下孵育1小时。然后用PBS漂洗3次，每次5分钟，再用蒸馏水漂洗一次。封片及检测滴加一滴封片剂，封片后用荧光显微镜检查。标记好荧光的细胞片可以直接观察，但为了保存结果，通常需要进行封片处理。常规的方法是采用甘油或中性树脂封片，为了增强封片效果，可以在封片时添加特殊的抗荧光淬灭剂。通过这些步骤，我们就能看到细胞在荧光下的美丽景象，深入了解细胞的奥秘啦！𐟔

MC38小鼠结肠癌细胞培养全攻略𐟧ꊱ️⃣ 细胞复苏：首先，将含有1mL细胞悬液的冻存管放入37℃的水浴中，快速摇晃至完全解冻。然后将解冻后的细胞悬液加入含有4-6mL完全培养基的离心管中，充分混合。以1000RPM的速度离心3-5分钟，弃去上清液，加入6-8ml完全培养基至培养瓶（或皿）中，用显微镜观察细胞生长情况和密度。𐟔찟” 2️⃣ 细胞传代：当细胞密度达到70%-90%时，可以进行传代培养。MC38细胞为“轻微贴壁”和“悬浮培养”类型。传代步骤如下：收集：将培养瓶中的悬浮细胞收集到离心管中。𐟧ꊦ𖈥Œ–：向培养瓶中加入0.25%（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），放入37℃培养箱中消化1-2分钟。如果消化不完全，可适当延长时间。用显微镜观察细胞消化情况，当大部分细胞变圆并迅速脱落时，轻轻敲击培养瓶，加入3-4ml含有10%FBS的培养基终止消化。𐟔찟’犧滥🃯𜚥𐆦”𖩛†到的悬浮细胞、PBS清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpm离心5分钟，去掉上清液。补加1-2mL培养液，重悬混匀。将细胞悬液按1：2的比例分装到新的T25瓶中，加入6-8ml新的完全培养基，保持细胞生长活力。根据实际情况，以1:2~1:5的比例进行后续传代。𐟧갟” 3️⃣ 细胞冻存：在培养前3代时，建议冻存一批细胞种子，以备后续实验使用。以下以T25瓶为例说明步骤：收集细胞：将消化好的细胞收集到离心管中，用血球计数板计数，确定冻存密度。一般推荐的冻存密度为1㗱06~1㗱07个活细胞/ml。𐟒‰𐟓ˆ 离心：使用1000rpm的速度离心3-5分钟，去掉上清液。用配制好的细胞冻存液将细胞重悬，每1ml冻存液含有1㗱06~1㗱07个活细胞/ml的细胞分装到冻存管中。在冻存管上标注好名称、代数、日期等信息。冻存：将冻存管放入程序降温盒中，在-80度冰箱过夜，之后放入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置，方便之后查阅和使用。❄️𐟧ꀀ