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pcr程序前沿信息_pcr扩增的三个步骤(2024年12月实时热点)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：教程更新日期：2024-11-30

pcr程序

英国转新加坡回国攻略：亲身体验分享 ✈️ 航班信息：出发日期：7月14日航班号：SQ305 起飞时间：上午9:35 𐟑谟𛢀⚕️ 核酸检测： DAM检测（布里斯托店）：48小时PCR测试，选择24小时出结果，折扣码TRAVELGATEWAY10。7月12日在市中心Gallery顶层的DAM检测，7月13日凌晨1:35收到结果。 Randox检测（希斯罗机场店）：24小时PCR测试，选择12-14小时出结果，折扣码EJ12。机场Randox几乎没人，效率超高。7月13日下午1点在Randox采样检测，下午2:25收到报告。 𐟚 绿码申请：在防疫健康码国际版小程序上传以下材料截图获得绿码：两次核酸检测阴性结果报告疫苗接种证明（小程序可得）护照信息页、签证页、BRP卡正反面 𐟕’ 时间安排：凌晨4:30从希斯罗莱昂纳多酒店打车前往希斯罗机场T2航站楼，几分钟就到。酒店提供taxi预约服务，三个大行李箱，两个登机箱，租的minivan，打到机场23镑。近期希斯罗机场罢工，我们提前5个小时到，排在最前面，5:45开放柜台后就可飞速托运，直接进入安检。 ✈️ 登机牌办理：我走的是96小时免签入境，工作人员非常熟悉，不需要出示政策页，说一声就好。登机办理可以用电子版文件，手机出示即可，亲测有效。（我打印了没用上）登机需出示的文件：疫苗接种证明两程机票行程单新加坡酒店入住凭证（xie程下载）护照原件 24小时以内核酸阴性检测报告 𐟚 新加坡入境：出海关不需要盖章，需向海关出示以下文件：疫苗接种证明护照原件 BRP卡 MyICA二维码（海关扫描护照自动检查）希望这些信息对大家有帮助，祝大家回国顺利！

新加坡回国攻略：轻松入境，愉快隔离时隔三年，终于有机会回国了！虽然一路上心情有些忐忑，但最终还是顺利入境。酒店盲盒也开得很顺利，住进了心仪的【天府国际健康服务中心】。隔离结束后，接下来的两个月，终于可以好好放松一下了！ ✈️⚠️𐟌 由于国内各城市的政策放开，回国变得方便了许多。以下是我从新加坡回国的经历分享。 𐟓‹𐟓𐟦 【关于核酸报告】目前只需要提供48小时的核酸报告，真的是省心又省钱。我是在Travel Swab做的PCR，65新/次，建议晚上8点之前去，8点后会加收15新。报告出结果很快，我预约的晚上9点，做完后回家凌晨1点就收到结果了，并没有加急哦。 𐟧찟Œ᯸𐟔슣€关于防疫健康码】在Mini程序“防疫健康码国际版”上提交核酸报告、护照、行程单等信息，很快就能收到绿码，这个会在办理登机牌时使用。 𐟒Œ𐟓… 【关于健康申报码】在Mini程序“海关旅客指尖服务”上填报出入境健康申明卡，建议截图保存，入境时使用。 𐟔㰟†—𐟛… 【入境流程】其实入境流程并不复杂，先是咽部核酸检测、填写入境卡、入关、取行李，然后等大巴去隔离酒店。 𐟛Œ𐟛𐟔‘ 【关于隔离酒店】我住的是【天府国际健康服务中心】，靠近天府国际机场，每晚费用498元房费+80元餐费，省内5晚也算便宜。房间宽敞明亮，干净整洁，略微有股甲醛味；设施齐全，吹风机、烧水壶、牙膏牙刷沐浴液都有提供；智能家电，可遥控窗帘、电动马桶、天猫精灵等；房间提供泡面、饼干和矿泉水，喝完可要求补，上限30瓶；一日三餐菜品不重样，但还比较准时，有严格配餐时间，一定要在时间段内领取，不然会收走；不能点外卖，但可以收取京东和顺丰快递；核酸检测自费，16元/次。 𐟌Ÿ𐟌Ÿ𐟌Ÿ 【关于机场购物】这次起飞前在iShopChangi上下了些单，机场出境时直接取货，省去了很多时间，品牌多还有优惠哦。

𐟧쐃R、QPCR、RT-PCR全攻略𐟌Ÿ 𐟔젦Ž⧴␃R、QPCR和RT-PCR的奇妙世界！从RNA反转录到cDNA的合成，再到DNA的扩增，每一步都充满了科学的魅力。 1️⃣ RNA抽提：采用TRlzol法，借助苯酚的强力裂解作用，轻松获取RNA。准备好试剂耗材和样品，经过一系列离心和沉淀步骤，就能得到纯净的RNA啦！𐟒ꊊ2️⃣ RNA质量检测：分光光度计和凝胶电泳法是你的得力助手，确保RNA的纯度和完整性。 3️⃣ 反转录：以RNA为模板，借助反转录酶的力量，合成与RNA互补的cDNA。选择合适的引物，让反转录更加高效。𐟒ኊ4️⃣ PCR程序：三步法让你轻松掌握DNA扩增的诀窍。高温变性、低温退火、延伸，每一步都精准控制，确保DNA的准确复制。𐟔劊𐟎‰ 现在，你已经掌握了PCR、QPCR、RT-PCR的全教程！快来试试吧，用科学的力量探索生命的奥秘！

墨尔本到郑州转机攻略：国泰香港段详解准备材料：48小时的纸质PCR核酸报告和海关旅客指尖小程序。 𐟚€ 出行流程：首先，先去做核酸，然后在机场内可以吃饭、盖章和办理退税。大约1到1.5小时后，你会收到短信通知结果出来，记得回去拿纸质报告。拿到报告后，去托运行李并领取登机牌。过了安检后，排队退税，然后登机。建议提前5小时到达机场，以防万一。 𐟓 核酸地点：在T1航站楼二楼，选择79号核酸检测点。可以选择网上提前付款或现场扫码填写资料，但不能提前预约时间。我晚上1点的飞机，下午7点半去做核酸，没有排队，八点半就出结果了，速度很快。 𐟧𓠨ጦŽ托运：行李会直挂到郑州，所以在墨尔本取票时会查看核酸报告。落地郑州后，出关时会用到指尖程序，需要填写。 𐟒𐠩€€税排队：退税排队时间较长，我用了四十分钟。如果需要退税，建议提前到达。 𐟏 到达郑州：香港起飞前，工作人员会查询是否有指尖海关黑码，如果没有会帮忙填写。落地郑州后，如果已经填写好黑码，先刷护照领取打印的二维码纸条，用二维码先通过防疫关口，然后等待取行李，再过海关。出了海关就自由了，整个过程非常顺畅。 𐟔 注意事项：如果在墨尔本航空公司没有查PCR核酸的话，这次入境中国是没人查的。我朋友在香港坐船入境深圳也没有查PCR。是否要做还是看个人情况。祝大家回国一切顺利！

2023年加拿大回国攻略及注意事项大家好，今天想和大家分享一下我3月初从加拿大回国的经历。希望我的经验能帮到有同样计划的小伙伴们！ 𐟌Ÿ我乘坐的是南航CZ312航班，从多伦多飞往广州。机票是在南航官网预订的。现在真后悔当初没把回程票也买了，现在票价贵得吓人！有没有小伙伴有买便宜票的秘诀，求分享！ 𐟌Ÿ南航允许托运两件行李，订票时可以选座位，不过免费座位只有中间和靠窗的，走廊位都要加钱。如果你经常需要走动，强烈建议加钱买过道位，因为值机时随机分配的座位一般都是中间位。 𐟌Ÿ我的航班是下午4点半起飞的，我大概12:50就到了机场。南航不能网上值机，所以排队的人还挺多的，但开了很多窗口（大概有10个），所以移动速度很快，效率还是挺高的。 𐟌Ÿ3月初的航班还需要做PCR检测。我前一天早上找了一家检测机构，花了$109加币，当天下午4点就出结果了。PCR检测报告需要打印出来，值机排队时有工作人员会检查。 𐟌Ÿ13:20搞定值机和行李托运。在南航柜台可以扫一扫二维码，登陆海关小程序输入信息，生成黑码，登机前需要检查！这里要注意，不要过早弄黑码，有有效期限制。很多人提前在家弄好了黑码，结果落地广州时黑码已经过期，又要重新输入信息，浪费时间。 𐟌Ÿ登机牌上写着15:30开始登机，但实际上15:15就开始了。飞机上有正餐但真的很难吃，很多叔叔阿姨表示吃不饱。 𐟌Ÿ航班提前差不多一个小时到达广州，机组说要等海关人员来（我觉得是等摆渡车而已），大家在飞机上等了10分钟才下飞机。过海关需要扫黑码，过关后拿行李又等了差不多半个小时。以上就是我这次回国的全过程啦！希望我的分享能帮到大家。

𐟧쒔-PCR全攻略𐟔 𐟤”你是否对RT-PCR感到困惑？别担心，这里有一份详尽的指南帮助你轻松掌握！ 𐟔쩦–先，让我们了解RT-PCR的基本原理。通过反转录酶的作用，将RNA反转录成cDNA，再通过PCR技术将特定的DNA片段进行扩增。这个过程需要经过变性、退火和延伸三个步骤。 𐟧ꦎ夸‹来，我们来看看如何进行反转录。反转录是在反转录酶的作用下，以RNA为模板合成DNA的过程。合成的DNA链与RNA互补，称为cDNA。这个过程需要选择合适的反转录引物和酶，并设置合适的反应条件。 𐟔姄𖥐Ž，我们探讨一下PCR技术的关键步骤。PCR引物设计是至关重要的，它决定了扩增的特异性和效率。此外，选择合适的PCR酶和反应体系也是非常重要的。在PCR程序中，退火温度和延伸时间的设置也是关键因素。 𐟒‰最后，我们来看看如何检测PCR产物。通常使用琼脂糖凝胶电泳来检测DNA和RNA的大小和数量。通过电泳设备将样品点在琼脂糖凝胶上，然后在特定电压下进行电泳，最后用凝胶成像系统拍照保留结果。 𐟎‰现在你已经掌握了RT-PCR的全攻略！赶快试试吧！如果你还有其他问题或需要进一步的帮助，请随时联系我们！

降落PCR：解决PCR扩增问题的新方法降落PCR，也被称为TouchDown PCR，是一种常见的PCR优化方法，操作简单且效果显著。MedPeer网站上有详细的解释和视频教程，供大家参考。 𐟌𘠐CR扩增原理在PCR扩增过程中，DNA双链解螺旋成单链后，引物在退火温度下特异性结合到DNA单链上，并在Taq酶的作用下进行延伸。退火温度越高，引物结合的特异性越好；退火温度越低，非特异性片段产生的可能性越高。 𐟌𘠩™落PCR的优势降落PCR通过设定一个较高的初始退火温度，并在每个循环中逐渐降低温度，使得在前期的高温下扩增出特异性片段，而在后期的低温下提高PCR的特异性和效率。 𐟌𘠐CR体系配置（以20ul体系为例） 2x Taq Mix：10ul 引物F/R：0.5ul（可在0.5上下调整）模板：2ul（如果PCR条带不够亮，可以增加一点模板）加水至：20ul 𐟌𘠐CR程序设置预变性：94℃ 3min 循环1：94℃ 30s 循环2：65℃ 30s 循环3：72℃ 30s（10个循环，每个循环退火温度降低1℃至55℃）循环4：94℃ 30s 循环5：55℃ 30s 循环6：72℃ 30s（20-25个循环）延伸：72℃ 10min 保存：4℃至取出跑胶 𐟌𘠥ꌦŠ€术和方案以前做实验前需要查找文献和毕业论文来确定实验方案，做的时候对原理和步骤依旧模糊不清。好在MedPeer网站上提供了各种实验的详细介绍和视频教程，如果早知道这些资源，就不用巴巴地求着师兄师姐和同学教了。

PCR实验全攻略：从引物设计到结果分析大家好！今天我们来聊聊分子克隆中的PCR实验。上一期我们已经介绍了引物设计的基础知识，这一期我们就来聊聊PCR的具体操作步骤。 PCR反应体系：你需要准备什么？𐟧ꊊ首先，PCR反应体系需要哪些东西呢？每个实验室用的酶可能都不一样，所以最好还是看看你实验室用的酶的说明书。以下是一个常见的2㗐hanta Flash Master Mix酶的加样体系：先加水：提前计算好每个样品的加水量，然后从大体积开始加，这样更准确。加酶：根据说明书上的推荐量加入。加引物：根据引物的浓度来决定。加模板：如果是基因组或菌体，变性时间3分钟；如果是质粒或片段，变性时间30秒。 PCR反应程序设置：如何设置？𐟓Š PCR反应程序的设置也是关键。以下是一个常见的2㗐hanta Flash Master Mix酶的反应程序：变性（Denaturation）在95Ⰳ下变性30秒，让DNA双链解链成单链。这个步骤不需要修改，但变性时间可以根据模板的不同进行调整。退火（Annealing）在55Ⰳ下退火30秒，让引物通过碱基互补配对与单链DNA结合。退火温度可以根据引物的设计进行调整。延伸（Extension）在72Ⰳ下延伸1分钟，聚合酶开始合成新的DNA链。这个步骤一般不需要修改。循环数设置根据需要回收的片段大小，一般30个循环左右就够了。如果不需要回收，可以设置35个循环。其他步骤除了基本的PCR步骤，PCR仪还可以进行一些固定温度的孵育，比如37Ⰳ恒温酶切等操作。小贴士𐟓 枪头只沾到一点点液体也没关系，一般都能成功PCR。但还是要确认枪头有没有吸到相应的小体积液体。不同的酶延伸速度和温度可能不一样，需要根据具体情况调整。希望这些信息对你有所帮助！如果你有任何问题或需要进一步的指导，欢迎随时留言讨论哦！

5种常见溶解曲线错误及解决方法大家好，今天我们来聊聊荧光定量PCR（qPCR）中常见的五种溶解曲线错误及其解决方法。溶解曲线下滑 𐟓‰ 当溶解曲线的平台期出现得太晚，求导时可能会出错。这通常是因为产物过长或GC含量过高导致的。解决方法是更换引物，避开高GC序列，选择较短产物的引物。宽峰问题 𐟏ž️ 有时你会发现溶解曲线的峰比其他人跑出来的要“胖”，但又是单峰。这其实是宽峰由几个峰叠加形成，出现了与产物TM值相近的非特异性产物。解决办法是重新设计引物，并在NCBI上进行Blast比对，选择特异性好的引物。双峰现象 𐟏”️ 当非特异峰出现在特异峰左侧时，可能是扩增出引物二聚体；当非特异峰出现在特异峰右侧时，则是出现了非特异性产物。解决方法首选重新设计引物，或者降低引物用量，更改实验程序。阴性对照起峰 𐟌꯸ 如果实验结果中发现阴性对照（NTC）起峰，不要慌张，这并不意味着引物不能用。查看实验样品的溶解曲线，如果只有一个产物特异峰，说明引物二聚体会在没有模板时产生，加入模板后，引物二聚体的产生会受到抑制。无溶解曲线 𐟚늦œ‰时你可能发现结果中只有扩增曲线，没有溶解曲线。这可能是因为仪器没有设置溶解曲线的程序。不同仪器的溶解曲线程序可能有所不同，需要手动添加。溶解曲线的原理 𐟌᯸ qPCR程序结束后，将温度升到95℃，DNA开始解链，DNA的小沟区域也逐渐消失，SYBR Green从小沟区域释放出来，荧光信号值开始逐步降低。当温度达到产物解链一半时的温度，即Tm值时，SYBR Green大量游离出来，荧光信号值会突然下降达到0，这就是溶解曲线的来源。原始曲线进行导数分析后，溶解曲线会变成一个峰。了解这些原理后，你就能更快地解决上述问题了。溶解曲线的Tm值是溶解曲线中的重要参数，在使用同一qPCR试剂下，目标基因溶解曲线的Tm值由其产物长度和GC含量决定。只要不改变qPCR试剂，其TM值不会发生改变。因此，如果引物不会扩增出非特异性产物，就只会有一个峰；存在多个非特异性产物时，就会有多峰的情况产生。

英国回国航班攻略及最新政策详解 𐟌Ÿ 英国回国直飞航班信息汇总： CA938 伦敦-北京（每周一） CA850 伦敦-上海（每周六） CZ304 伦敦-广州（每周三） MU552 伦敦-上海（每周五） JD432 伦敦-青岛（每周五） HU754 曼彻斯特-北京（每周一） 𐟧𓠨ጥ‰准备清单：护照提前三个月购买的机票行程单预约48小时和24小时核酸检测准备申请绿码所需的材料在小程序“防疫健康码国际版”上申请绿码 𐟓„ 申请绿码所需材料：两次核酸检测阴性报告赴华机票行程单护照首页和签证页 𐟒‰ 检测要求“双核酸”：旅客需在赴华航班起飞前48小时内进行两次PCR核酸检测，最后一次须在登机前24小时内进行。检测报告应包括姓名、出生日期、采样时间和检测结果等信息。两次检测需在不同机构进行，且间隔24小时以上，但不限制检测机构。 𐟛‚ 起飞后流程：申请海关入境码（黑码）搜索小程序“海关旅客指尖服务”，选择“健康申报”，按照要求填写个人信息。黑码务必截图保存，入境时需要。抵达国内后，进行核酸检测、过海关、取行李。跟随大巴车前往酒店隔离（随机分配），内地统一实施7+3隔离政策。 𐟓⠤𛥤𘊥𐱦˜廓𑥛𝥛ž国系列直飞航班的详细攻略，希望对您有所帮助！

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