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lipo2000新上映_lipo2000 thermo(2024年12月抢先看)

内容来源:麦吉窗影视所属栏目:导读更新日期:2024-11-30

lipo2000

慢病毒包装全攻略:从细胞培养到病毒收集 𐟓– 细胞分盘:首先,用胰酶消化收集293T细胞,并将其接种到100mm的培养皿中(根据实验需求)。将细胞放入含有5%CO2的37℃细胞培养箱中培养8-24小时。当细胞贴壁且密度达到培养皿总面积的80%以上时,进行转染。 𐟧ꠥ‡†备质粒和脂质体:吸弃293T中的培养液,加入4ml新鲜完全培养基。然后,将目的质粒和包装质粒混合。在一个无菌的1.5ml EP管中,加入250⵬无血清DMEM,加入12ⵧ目的质粒、9ⵧ psPAX2和9ⵧ pmd2.G。在另一个EP管中,加入250⵬无血清DMEM和30⵬ lipo2000,静止5分钟后,将两管充分吹打混匀,静置15分钟。 𐟕𐯸 孵育:将500的混合液逐滴加入细胞培养皿中,确保均匀滴入培养皿的各个部分。轻轻摇动培养皿,使其混匀后,继续置于含有5%CO2的37℃细胞培养箱中孵育。 𐟌€ 换液:8-12小时后,加入10ml预热过的完全培养基,注意不要冲刷掉已经贴壁的细胞。加入完全培养基后,继续将细胞放置在细胞培养箱中孵育。 𐟧Š 收集病毒上清:转染后24小时和48小时左右,收集含有慢病毒的上清液放入离心管中。用1500rpm离心10分钟去除杂质,或者使用0.45um滤器过滤后分装冻存于-80℃。避免反复冻融。或者将离心或过滤后的上清液加入病毒浓缩管中浓缩后分装。 𐟦  病毒感染:将细胞平铺于35mm培养皿,12-24小时后换液,最佳密度为50%。加入收集的病毒上清液和适量polybrene进行培养。细胞长满后传代或检测表达。

外泌体作为天然的纳米级细胞外囊泡,因出色的生物相容性、稳定性、长效的体内循环时间以及精准的组织靶向能力,逐渐成为优化RNA递释的研究热点。然而,天然外泌体进入细胞主要依赖内吞作用,导致RNA分子易在溶酶体中被迅速降解,限制了其递释效率。中国科学院科学家团队采用外泌体工程化可控修饰策略,定量化调控了不同种类外泌体中胆固醇的含量如牛奶外泌体、生姜外泌体、肿瘤细胞来源的外泌体等,并利用透射电子显微镜等技术对其进行了全面表征。研究表明,外泌体膜中胆固醇含量的增加增强了其与靶细胞膜的相互作用,促使外泌体通过膜融合而非内吞途径进入细胞,降低了溶酶体降解的限制。同时,分子模拟研究显示,富含胆固醇的外泌体具有更强的膜变形能力,能够扩大其与细胞膜的接触面积,从而通过膜融合机制将小干扰RNA(siRNA)直接高效递送至细胞质内。体外实验中,富含30%胆固醇的牛奶外泌体(30% Chol/MEs)递送了PLK1 siRNA,下调了PLK1 mRNA和蛋白表达水平,诱导了肿瘤细胞凋亡,且其效果优于传统的转染试剂Lipo 2000和RNAiMAX。进一步,体内实验证实,30% Chol/MEs/siPLK1通过口服或静脉注射方式,在小鼠结直肠肿瘤模型中均能够有效抑制肿瘤生长,展现了其作为基因治疗载体的潜力[强]『前沿科技 | 中科院科学家等合作研究揭示胆固醇在外泌体递释RNA药物中的作用』前沿科技 | 中科院科学家等合作研究揭示胆固...

Lipo2K转染秘籍𐟔劣## 转染前的准备工作 𐟧ꊧ𛆨ƒž铺板密度:这个可是关键!根据Lipofectamine 2000(Lipo2K)的说明书,不同孔板的铺板密度有不同的建议。我用的是12孔板,铺板密度是2㗱05cells/孔。大概培养20小时后,细胞密度可以达到60-70%。转染前一定要检查细胞的生长状态,浓度最好在60-70%之间。太稀的话,转染后细胞会死亡(虽然我有一篇笔记里转化效率高,但因为细胞密度低,结果部分细胞死了);太浓的话,转染试剂无法有效输送到每个细胞中。 铺板的均匀度:这个对我来说是个难题。底部细胞密集而四周稀疏会影响转染效果。我最近发现一个有效的方法,就是把稀释好的细胞悬液充分混匀,加入孔板后不要晃动,静置5-10分钟。这样铺出来的板子特别均匀!不过我只在24孔板和12孔板这样试过,96孔板可能还是需要敲打一下。 培养时间:铺完板子后大约16-24小时就可以做转染了,注意观察细胞状态。 培养基是否含抗生素:说明书建议使用不含抗生素的培养基铺板,但对于293T细胞来说,含抗生素的培养基也可以使用。 质粒DNA转染 𐟌€ 准备质粒:这个过程一定要保证卫生! 质粒的量:根据说明书给出的建议质粒用量和Lipo2K用量,实际用量可以根据需求调整。 制备复合物(以12孔为例): 使用50 不含血清的Opti-MEM I培养基(或其他不含血清的培养基)稀释1ug DNA。轻轻混匀。 使用前轻轻混匀Lipo2K,然后取4在50  Opti-MEM I培养基中稀释。 混合(1)和(2)(总体积=100)。轻轻混匀并在室温下孵育15-20分钟(溶液可能变得浑浊)。注意:Lipo2K加入后会开始产生纳米球,应尽快将稀释好的Lipo2K加入混匀的质粒中。 将100 复合物轻轻添加至含有待转染细胞的孔中。通过轻柔的摇动平板轻轻混匀。 培养基可在4-6小时后更换(换液有助于减少Lipo2K转染导致的细胞毒性,对于293T细胞,不换也可以)。 将培养板放回细胞培养箱即可。18-48小时可见GFP表达。 希望这些步骤能帮到你,祝你实验顺利!𐟚€

握草!起子哥怎么也想不到 真我GT7 Pro还没发布,“后院就起火了” 猪队友提前曝光首个骁龙8至尊版新机发售价,3999起步! 如果价格属实,真我这波算是打破行业底线了,友商全员涨价上探4.5k,而真我虽有涨幅,但依旧一枝独秀,真就赔本赚吆喝了。结合目前爆料的配置来看,即便3999价格属实,性价比也还是拉满了: ①芯片:率先搭载骁龙8Elite,搭配GT性能引擎以及11480mmⲩ’⥌–双VC散热,那打起来游戏就不会掉帧。起子哥说是即便开启最高画质也依旧持久满帧不烫手,怎么说呢,还有苍穹通信系统2.0和4D游戏振感,妥妥对标游戏机,不掉帧、不发热、不掉网; ②屏幕:首发行业唯一三星Ecoⲯ𜌧퉦𗱥››微曲屏,万元三星折叠屏显示技术下放,全球首款去偏光片直板机,并且支持全局硬件级DC调光(全球首发非偏振自然光护眼技术),2000nit全局亮度,120%的DCI-P3色域。同档,甚至超越高端级的显示和护眼,更何况还上了8T LIPO低功耗技术; ③影像:能抓拍高速动态人物,还有大底潜望式长焦,CMOS参数还未知,但从目前直出照片来看,真我GT7 Pro有点越级了; ④其它:没有无线充,但有超级快充/AI问屏后续OTA会升级/高通超声波指纹,支持水下解锁/NFC/红外等等。 总之真我GT7 Pro这次强的可怕,无论性能、影像还是屏幕都顶满了,基本就是要啥有啥,能打游戏机,能打影像旗舰,真就妥妥水桶旗舰了呗。不过按照前几代爆的价格,可能发售价还会再低两百,我寻思还要啥自行车啊?大家说呢?

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