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细胞传代最新视觉报道_《细胞》免费观看(2024年11月全程跟踪)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：热点更新日期：2024-11-26

细胞传代

细胞培养的那些事儿 𐟘“ 每次做实验，我都觉得自己像是个小白。不是大步骤记不住，而是那些细节简直让人抓狂。比如，细胞操作时倒液要远离废液缸口，吸取液体打入培养瓶时要悬空，不能伸入瓶口。还有，每次需要提前准备试剂和枪头时，我总是懵懵的。感觉自己根本没有做实验的天赋。我同门本科时就养过细胞，而我本科基本上就没进过细胞房。之前都是看师兄操作，所以对细胞操作非常不熟。今天师兄让我自己动手做，发现好多细节根本记不住。做完上一步，完全不知道下一步要干嘛。他一个小时能搞定的细胞传代，我搞了快两个小时。真是崩溃，感觉自己拖累了他。他平时下班挺早的，但因为我做实验慢，他下班时间经常被迫延迟。不仅仅是细胞操作，很多其他生物实验也存在这样的问题。实验室对操作的要求非常严格，就算是本科做过的实验，也会有不一样的要求（包括试剂放哪，仪器在哪个实验室）。根本记不完。现在我一想到要做实验就焦虑、恐惧、难受，完全没有一点成就感。真希望自己能早点掌握这些技巧，不再让师兄失望。

无菌细胞培养操作指南（详细版） 𐟌🠦“作步骤及注意事项消毒超净工作台和紫外照射灯：首先打开风机、日光灯和玻璃门，然后进行30分钟的紫外消毒。擦拭台面和物品：关闭紫外灯后，用75%的酒精擦拭台面及所有物品。移液枪要从手柄处向头部擦拭，擦拭原则为先擦拭干净的物品，再擦拭不干净的。预热水浴锅和试剂：将所需的培养基、血清、PBS等试剂从4℃冰箱中取出，放入37℃水浴锅中预热。试剂从水浴锅中取出后，喷洒酒精并擦拭干净，然后放入工作台。点燃酒精灯：在操作区域内点燃酒精灯，火焰高度控制在10cm以内。灼烧试剂瓶口和镊子：在酒精灯外焰处旋转式灼烧所需试剂瓶口，并用镊子夹住封口胶，再次旋转式灼烧瓶口处。打开瓶盖后，再次旋转式灼烧瓶口。细胞传代操作喷洒酒精并擦拭：用75%的酒精喷洒手和培养箱，然后用无菌布擦拭干净。取出细胞：打开培养箱，取出细胞放入工作台。倒出培养基：倒出或吸出上一次的培养基。清洗细胞：用PBS溶液（3ml）清洗细胞表面分泌物2-3次。消化细胞：加入1ml胰酶，消化至90%以上的细胞呈圆形。注意胰酶适用于贴壁生长的细胞，不同细胞消化时间不同，不要过长。若细胞消化得快，则无需放入培养箱。终止消化：倒掉胰酶，加入1ml培养基终止消化（完全培养基：血清+培养基+1%双抗，血清多为胎牛血清，加双抗防污染）。吹打细胞：用吹打器轻轻吹打细胞。放入培养箱：将细胞放入培养箱（若瓶盖无孔，则盖子松开一点）。保存试剂：所有试剂的瓶口和盖子旋转灼烧后，用镊子夹住瓶盖盖上，拧紧，用封口胶封好放4℃冰箱保存。清理废液缸和实验台面：熄灭酒精灯，操作结束后清理废液缸，用酒精消毒后再放回超净台。实验台面用75%酒精喷洒后用无菌布擦拭干净。紫外消毒：关闭玻璃门，打开紫外灯消毒30分钟。通过以上步骤，您可以进行无菌的细胞培养操作，确保实验结果的准确性。

电转染实验细胞准备全攻略 1. 𐟌𑠧”𕧩🥭”前的细胞准备使用entranster-E电转染试剂时，建议在电穿孔前1-3天进行细胞传代，以确保细胞在实验时处于指数生长期，达到最佳的细胞融合度。对于生长缓慢或原代细胞，可能不需要此步骤。 𐟔젧ᮥœ€佳细胞密度不同细胞类型的最佳细胞密度有所不同。在含有电转试剂的终体系中，电穿孔时的细胞密度一般在1-10㗱0^6细胞/ml范围内。对于悬浮细胞，建议细胞密度接近10㗱0^6细胞/ml；对于贴壁细胞，推荐的细胞密度为1-5㗱0^6细胞/ml。 ⏱️ 孵育时间确定每种细胞类型和实验的最佳电转染后的孵育时间。一般而言，最佳孵育时间为4-48小时。通过这些步骤，可以确保电转染实验的成功进行，并获得最佳的实验结果。

贴壁细胞传代全攻略，一步步教你搞定！嘿，细胞培养的小伙伴们！今天我们来聊聊贴壁细胞的传代步骤，这可是细胞培养中的基本功哦！𐟒ꊧ쬤𘀦�𜚥‡†备工作首先，得把T25瓶里的原培养基吸干净，别留一滴哦！然后，加3-4ml的常温PBS，轻轻润洗细胞10-20秒，最后把润洗的PBS吸走。这个步骤很重要，能洗掉残留的培养基，保证接下来的实验更准确。第二步：胰酶消化接下来，T25瓶里加1ml左右的胰酶，轻轻晃动培养瓶，让胰酶均匀覆盖瓶底的细胞层。然后，把培养瓶放进37度的培养箱里消化。这个过程大概需要几分钟，等到细胞间隙变大但还没完全脱落的时候就可以了。第三步：终止消化消化到这个程度，就可以吸取正在消化的胰酶，先轻轻吹下细胞，再加2-3ml的完全培养基来终止胰酶的消化。这样，细胞就不会被过度消化了。第四步：离心收集把混匀的细胞转移到离心管里，900rpm离心3-5分钟，然后弃掉上清液。这个步骤能去掉多余的胰酶和培养基，让细胞更纯净。第五步：重悬分瓶最后，加新的完全培养基，轻轻重悬细胞，然后均匀分到新的培养瓶里，补足完全培养基。把培养瓶放回培养箱，静置培养。这样，你的细胞就成功传代了！希望这个攻略能帮到你们，细胞培养可不是一件容易的事，但只要掌握了这些基本步骤，一切都会变得简单起来！𐟌𑀀

细胞传代这种我已经好言好语连演示带讲解说过两三遍的+他本人在我旁观/单独做过几次的操作还要寸步不离跟着我是真的有点。。。。。。人很难不在这种时候甩脸子

动物细胞培养全攻略：从基础到实践 𐟌𑠥Š觉駻†胞培养的基础步骤获取材料：从动物胚胎或幼龄动物的器官、组织中获取材料。剪碎处理：将材料剪碎，并用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理，形成单个细胞。培养基配制：将处理后的细胞移入培养基中，配成一定浓度的细胞悬浮液。细胞贴壁：悬浮液中的细胞会贴附在培养器皿壁上，形成细胞贴壁。接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到互相接触时，细胞会停止分裂增殖。传代培养：将出现接触抑制的细胞重新用胰蛋白酶处理，再配成新的细胞悬浮液。 𐟔젥Š觉駻†胞培养所需的器皿培养器皿：分为玻璃和塑料材质。玻璃材质易于清洗和重复使用，而塑料材质则价格便宜且一次性使用。常见的培养器皿有三种：培养瓶：用于培养及繁殖细胞，置于95%空气与5%CO2混合气体的培养箱中进行培养。培养皿：用于装取、分离、处理组织，以及进行细胞毒性、单细胞分离、同位素掺入实验。多孔培养板：用于各种检测实验，如细胞克隆及细胞毒性实验。不同颜色的多孔培养板有不同的用途。操作器皿：用于实验室中的操作，包括贮液瓶、吸管和加样器。贮液瓶：用于存放或配制培养用液体，如培养液、血清及试剂等。吸管：分为刻度吸管和无刻度吸管，前者用于吸取、转移液体，后者用于吸取、转移液体、吹打、混匀及传代细胞。移液器：又称加样器，用于吸取、移动液体或滴加样本。最好的是微量加样器，吸量准确、方便，可保证实验样品（或试剂）含量精确，重复性好。其他用品：包括离心管（收集细胞）、试管（放置试剂）、玻璃容器（存放吸管）、贮槽（存放小件培养物品）、冻存管（冻存细胞），各种注射器、烧杯、量筒、漏斗、酒精灯等。 𐟧ꠥŠ觉駻†胞培养的实践应用原代培养：从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。传代培养：当细胞从动植物中生长迁移出来，形成生长晕并增大后，将其分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。通过这些步骤和器皿的使用，可以进行有效的动物细胞培养，为科研和实验提供可靠的细胞来源。

细胞传代培养全攻略：从基础到实践细胞传代培养是细胞生物学实验的基础，当细胞在培养瓶中达到一定密度时，需要通过传代来继续生长。这个过程涉及到一系列的步骤和注意事项，确保实验的顺利进行。 𐟧젦料准备培养瓶/皿离心管移液管移液器废液缸 75%酒精所需培养细胞 𐟒Š 药品准备 DMEM培养基小牛血清或胎牛血清 0.25%胰蛋白酶 PBS缓冲液青链霉素双抗 𐟔젤𛪥™襇†备 CO₂培养箱显微镜超净台 𐟓 实验步骤从培养箱中取出细胞，镜下观察细胞状态，判断是否达到传代密度。回到超净台，吸去培养基，加入2ml左右的PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸去PBS，加入0.25%胰酶，继续晃动培养瓶使胰酶浸润所有细胞。将培养瓶放入37℃培养箱，开始消化并计时，消化时间根据细胞特性有所不同，例如HEK-293T细胞的消化时间为2分钟。用含10%血清的DMEM培养基终止消化，通过反复吹打使细胞脱离培养皿底部，尽量呈单颗细胞的悬浮液。收集细胞悬液离心，室温下1200rpm，5分钟（不同细胞离心参数设置不同），离心后吸出上清丢弃。在新的培养皿中加入新鲜培养基，用新鲜培养基将细胞重悬，吹打几下混匀细胞，将细胞接种到新培养皿，摇晃混匀。将培养皿放入培养箱。 𐟓 注意事项无菌操作规范：实验开始前和结束后，需要将超净台紫外照射灭菌30分钟，实验过程中要穿好灭菌服，戴好灭菌手套和口罩。所有物品从外面移入超净台都需要喷洒75%酒精消毒，并且同样用75%酒精消毒双手。使用胰酶消化细胞要把握好时间，切勿消化过度，及时终止消化。如果消化不够充分，可以轻拍培养皿帮助细胞脱落。弃上清的动作需一次完成，切忌抬起管口，让液体流回底部后，又再次倾倒。回流的液体会把细胞团块冲散甚至冲起来，再倾倒有把细胞团块倒掉的风险。养成在培养皿上做标记的习惯，注明传代时间，细胞种类。通过以上步骤和注意事项，可以确保细胞传代培养的顺利进行，为后续实验提供充足的细胞资源。

六孔板长满多少个细胞最近在折腾新细胞种96孔板，积累了一些铺细胞的经验和心得，希望能帮到大家。如果感兴趣的话，记得点赞𐟑和关注哦！之后我会继续分享更多实验心得和经验，大家一起加油吧！目标：均匀铺细胞 𐟎铺细胞的目的是让细胞密度均匀地分布在96孔板中，这样后续的实验结果才会更准确。我用的是10mm的大皿，底面积大约等于96孔板的总面积。一般我按照1:3的比例传代细胞，所以种96孔板的时候，只需要吸取大皿中1/3的细胞总量，均匀分到96孔板中即可。操作步骤 𐟔슊前面的步骤和细胞传代的常规操作差不多：用胰酶消化细胞，培养基终止消化，离心弃上清，加入3ml培养基重悬细胞，然后取出1ml放进15ml离心管准备铺板。接着向15ml离心管中加入平时传代一大皿所需的新培养基，吹打混匀。关键公式 𐟧按照公式“总体积/96”，计算出每个孔所需的细胞悬液量。这里要注意的是，向96孔板中加的一定要是充分混匀的细胞悬液。加入细胞悬液时，手法是枪头抵住孔的9点钟方向底部，缓慢加入，这样才能保证铺得均匀。小结 𐟓 希望这些小技巧能帮到大家，让你的实验更加顺利。如果你也有类似的经验或者发现了什么细节，欢迎分享哦！让我们一起交流学习，共同进步吧！

𐟌𑦖𐦉‹必读ⷈK-2细胞培养全攻略𐟌𑊱️⃣ 细胞复苏：首先，将含有1mL细胞悬液的冻存管放入37℃的水浴中快速晃动，然后加入4mL培养基并搅拌均匀。接着，在1000RPM条件下离心4分钟，倒掉上清液，加入1-2mL培养基后吹匀。将所有细胞悬液加入培养瓶中过夜培养（或加入10cm皿中，加入大约8mL培养基，过夜培养）。第二天换液并检查细胞密度。𐟔 2️⃣ 细胞传代：当细胞密度达到80%-90%时，可以进行传代培养。𐟘Š (1️⃣) 直接倒掉培养容器中的培养上清。用PBS洗涤细胞2次，洗涤后的PBS直接倒掉，不需要保留。𐟚🊨2️⃣) 用PBS洗涤培养容器1~2次，把所有细胞悬液收集到离心管中，250g离心4分钟。⏰ (3️⃣) 离心后去除上清液。加入2mL预热的完全培养基，轻轻吹打细胞沉淀，充分吹散、混匀。𐟌꯸ (4️⃣) 把细胞按照(2.5~4.0) 㗱0^4个活细胞/cmⲧš„比例接种到适合的培养容器中。𐟔슦𓨦„：如果没有计数，也可以按照适当的比例进行传代。首次传代建议按照1:2进行，后续可以根据细胞实际生长情况参考说明书自由调整传代比例范围。𐟓 3️⃣ 细胞冻存：当细胞生长到可以传代的密度时，可以准备冻存啦！𐟆’ (1️⃣) 消化细胞，取少量细胞悬液进行计数。细胞悬液经过250g离心4分钟。𐟧ꊨ2️⃣) 离心后倒掉上清液，用适量4℃预冷的冻存液重新悬浮细胞。然后按比例或数量将细胞分装到冻存管中。一般冻存密度为(1.0~2.0)㗱0^6个/mL。𐟒犦𓨦„：如果用冻存液重悬计数后，细胞长时间放置在非培养条件下会严重影响细胞状态。请把细胞放在4℃的冰箱中以减缓细胞代谢，更好地保持细胞状态。❄️ (3️⃣) 使用海星一步冻存液时，直接把冻存管竖放在-80℃冰箱里就能完成“一步”冻存。如果使用程序冻存液，则需要先把冻存管放入提前预冷的程序降温盒中，然后再放入-80℃冰箱。𐟧ꢝ„️ (4️⃣) 24小时后，可以把冻存管转移到液氮中进行长期保存。⏳❄️ 注意：细胞不能长时间保存在-80℃冰箱中，请尽快在24小时内转移到液氮中保存。❄️𐟒Ž

𐟧줸€图掌握细胞密度判断技巧 𐟔짻†胞培养是细胞生物学实验的基石，而细胞传代则是确保细胞健康生长的关键步骤。𐟓ˆ当细胞密度达到80%-90%时，它们的生长状态最佳，此时进行传代最为适宜。𐟔在显微镜下，你可以通过4㗦”𞥤稧‚察细胞密度，而10㗦ˆ–20㗦”𞥤祈™能更清晰地看到细胞的形态。𐟒ᦎŒ握这些技巧，让你轻松成为细胞培养高手！

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