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电泳液配方前沿信息_脱色液(2024年12月实时热点)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：教程更新日期：2024-12-03

电泳液配方

实验室常用缓冲液和培养基配方大全 ✅核酸电泳相关试剂和缓冲液配方 TAE MOPS 溴乙锭琼脂糖凝胶 Loading buffer ✅核酸蛋白质杂交相关试剂和杂交液配方 SSC SSPE 磷酸盐buffer Salmon DNA DNA变性缓冲液预杂交液、杂交液膜转移缓冲液 TBST buffer 封闭缓冲液 ✅实验室常用培养基配方 Ampicillin氨苄 IPTG LB培养基 TB培养基 SOB培养基 SOC培养基 YT培养基 NZCYM培养基 NZYM培养基 NZM培养基一般固体培养基

WB实验时间减半的四个实用技巧 𐟌 想要在WB实验中节省时间？以下是四个实用技巧，帮助你将实验时间缩短至80分钟以内： 1️⃣ 简化凝胶制备：通过优化试剂混合，将凝胶制备时间缩短至10分钟。TEMED催化AP生成自由基，引发双丙烯酰胺和丙烯酰胺之间的交联，形成一个三维网络。前五种试剂可以混合到一个系统中，并在4℃的黑暗中保存一个月或更长时间。 2️⃣ 优化电泳缓冲液：传统的电泳液在电压升高时会丢失部分蛋白质。通过修改运行缓冲液的配方，可以在室温下以200V在35分钟内完成电泳。令人惊讶的是，当电压设置为300V时，它仍然正常工作！ 3️⃣ 精确控制电转移时间：不同分子量的蛋白质具有不同最合适的电转移时间。根据实验经验，建议设置以下参数：10-25kDa、250V、15分钟；25-55kDa、250V、20分钟；55-70kDa、250V、25分钟；以及70-130kDa、250V、30-35分钟。 4️⃣ 选择合适的膜材料：0.22⵭的PVDF膜比0.45⵭的NC膜对小分子量蛋白的拦截能力更强。选择合适的膜材料可以减少实验时间并提高实验效率。通过这些技巧，你可以更有效地进行WB实验，节省宝贵的时间和资源。

WB缓冲液配方大全，实验必备！ 𐟓– 上样缓冲液 SDS 上样缓冲液（Laemmli 缓冲液）：63 mM Tris-HCl、10% 甘油、2% SDS、0.0025% 溴酚蓝，pH 6.8 𐟓‘ 2X 储存液配方 LDS上样缓冲液：106 mM Tris-HCl、141 mM Tris base、2% LDS、10% 甘油、0.51 mM EDTA、0.22 mM SERVA Blue G250、0.175 mM 酚红，pH 8.5 𐟓˜ 4X 储存液配方电泳缓冲液 Tris- 甘氨酸 SDS 电泳缓冲液：25 mM Tris base、192 mM 甘氨酸、0.1% SDS，pH 8.3 Tris- 甘氨酸非变性电泳缓冲液：25 mM Tris base、192 mM 甘氨酸，pH 8.3 MOPS SDS 电泳缓冲液：50 mM MOPS、50 mM Tris base、0.1% SDS、1 mM EDTA，pH 7.7 MES SDS 电泳缓冲液：50 mM MES、50 mM Tris base、0.1% SDS、1 mM EDTA，pH 7.3 Tricine SDS 电泳缓冲液：100 mM Tris base、100 mM tricine、0.1% SDS，pH 8.3 𐟓 转印缓冲液 Tris-甘氨酸转印缓冲液：12 mM Tris base、96 mM 甘氨酸， pH 8.3 Bis-Tris 转印缓冲液：25 mM bicine、25 mM Bis-Tris（游离碱）、1 mM EDTA，pH 7.2 这些配方是进行WB实验时常用的缓冲液配方，根据实验需求选择合适的缓冲液，以确保实验结果的准确性。

b612号小行星 𐟓– 蛋白质电泳实验中，正确的试剂和缓冲液配置至关重要。以下是详细的方法和配方，助你顺利开展实验。 1️⃣ 30%（W/V）丙烯酰胺溶液称量290g丙烯酰胺和10g甲叉双丙烯酰胺，置于1L烧杯中。加入约600ml去离子水，搅拌至完全溶解。定容至1L，用0.45滤器过滤杂质。保存于棕色瓶中，4℃保存。注意：丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请戴手套。 2️⃣ 40%（W/V）丙烯酰胺溶液称量380g丙烯酰胺和20g甲叉双丙烯酰胺，置于1L烧杯中。加入约600ml去离子水，搅拌至完全溶解。定容至1L，用0.45滤器过滤杂质。保存于棕色瓶中，4℃保存。注意：丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请戴手套。 3️⃣ 5㗔ris-Glycine Buffer（SDS PAGE电泳缓冲液）称量15.1g Tris、94g Glycine和5.0g SDS，置于1L烧杯中。加入约800ml去离子水，搅拌至完全溶解。定容至1L，室温保存。 4️⃣ 5㗓DS PAGE Loading Buffer 称量1.25ml 1M Tris-HCl(pH6.8)、0.5g SDS、25mg溴酚蓝、2.5ml甘油，置于10ml塑料离心管中。加去离子水溶解后定容至5ml。小份（500/份）分装后，于室温保存。使用前加入25的2-ME。 5️⃣ 考马斯亮蓝R-250染色液称取1g考马斯亮蓝R-250，置于1L烧杯中。量取250ml异丙醇加入烧杯中，搅拌溶解。加入100ml冰醋酸，搅拌均匀。加入650ml去离子水，搅拌均匀。用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。 6️⃣ 考马斯亮蓝染色脱色液量取100ml醋酸、50ml乙醇和850ml去离子水，充分混合后使用。 7️⃣ 凝胶固定液（SDS-PAGE银氨染色用）量取500ml甲醇、100ml醋酸和400ml去离子水，均匀混合后室温保存。 8️⃣ 凝胶处理液（SDS-PAGE银氨染色用）量取50ml甲醇、10ml戊二醛和40ml去离子水，均匀混合后室温保存。 9️⃣ 凝胶染色液（SDS-PAGE银氨染色用）量取2ml 20%AgNO₃、1ml浓NH₃ⷈ₂O和1ml 4%NaOH，加入96ml去离子水，均匀混合。如氨水浓度过低时溶液会呈混浊状，此时应补加浓氨水直至透明。现用现配，不宜保存。 𐟔Ÿ 显影液（SDS-PAGE银氨染色用）称量50mg柠檬酸和0.2ml甲醛，加入1L去离子水后摇动混合溶解。室温保存。

𐟚€ 加速WB实验的四大秘籍！𐟏 Western Blot（WB）是分子生物学中常用的实验技术，用于检测特定蛋白质的存在和量。由于步骤复杂，常规操作耗时较长。以下是四个秘籍，帮助你将整个实验过程缩短至80分钟内完成： 1️⃣ 优化电泳缓冲液： 𐟔堦高电泳效率：通过调整运行缓冲液配方，室温下200V的条件下，可在35分钟内完成电泳。 𐟔砩똧”𕥎‹适应性：即使电压提升至300V，改进后的缓冲液也能保持正常工作，不会造成蛋白质的丢失。 2️⃣ 简化凝胶制备步骤： 𐟔젨‡꧔𑥟𚥼•发反应：利用TEMED催化AP（过硫酸铵）生成自由基，引发丙烯酰胺和双丙烯酰胺之间的交联反应，形成稳定的三维网络结构。 𐟧Š 凝胶保存：将前五种试剂混合后，可在4℃黑暗环境中保存一个月或更长时间，从而简化实验前的准备工作。 3️⃣ 选择合适的转移膜： 𐟔„ 对于小分子量蛋白质，0.22⵭的PVDF膜比0.45⵭的NC膜具有更强的拦截能力，从而提高了蛋白质的检测灵敏度和准确性。 4️⃣ 调整电转移时间： 𐟕’ 不同分子量的蛋白质适合不同的电转移时间： 10-25 kDa：250V，15分钟 25-55 kDa：250V，20分钟 55-70 kDa：250V，25分钟 70-130 kDa：250V，30-35分钟通过采纳上述四大秘籍，你的WB实验不仅可以在更短的时间内完成，还能保持高质量的实验结果，有效提升实验效率和输出。大家还有其他秘籍欢迎分享探讨！

银染实验全攻略：从步骤到常见问题解答银染实验是一种利用银离子对生物大分子进行染色的方法，因其高灵敏度而广泛应用于蛋白质或核酸的检测。银离子能与生物大分子的硫醇基团和其他功能基团结合，通过还原剂将银离子还原为银，形成黑色的沉积，从而使生物大分子可见。实验步骤电泳：将蛋白质或核酸样本通过SDS-PAGE或聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离。固定：电泳结束后，将凝胶从电泳槽中取出，放入固定液中进行固定，防止生物大分子在后续步骤中脱落。染色：固定后，将凝胶从固定液中取出，放入银染液中进行染色。银染液中的银离子会与生物大分子结合。显色：染色后，将凝胶从银染液中取出，放入显色液中进行显色。显色液中的还原剂会将银离子还原为银，形成黑色的沉积。停止显色：当生物大分子的条带清晰可见时，将凝胶从显色液中取出，放入停止液中停止显色。观察和记录：最后，将凝胶放在显微镜下观察结果。如果需要，可以使用相机或者扫描仪记录结果。实验常用试剂配方固定液配方：乙醇：50%（v/v）醋酸：12%（v/v）去离子水：余量敏化液配方：硫酸钠：0.02%（w/v）硝酸银：0.02%（w/v）去离子水：余量银染液配方：硝酸银：0.2%（w/v）去离子水：余量显色液配方：氢氧化钠：3%（w/v）甲醛：0.05%（v/v）去离子水：余量停止液配方：醋酸：5%（v/v）去离子水：余量注意事项：硝酸银是光敏感的，因此在操作时应当避免光照。常见问题和措施背景太深：可能是显色时间过长或停止液的使用不当。解决方法是缩短显色时间或正确使用停止液。观察不到生物大分子的条带：可能是样本的浓度太低，或电泳条件不合适。应当增加样本的浓度或优化电泳条件。条带强度不均：可能是样品上样不均匀，或者电泳过程中电场不均。应当在加样时保证均匀或检查电泳设备确保电场均匀。背景过亮：可能是银染液的浓度过高，或显色时间过长。应调整银染液的浓度或缩短显色时间。条带不清晰：可能是固定液或洗涤液的配方不对。应当查阅相关试剂配方并进行调整。条带断裂：可能是电泳凝胶的制备问题，或者样本处理不当。应当检查电泳凝胶的制备过程，改进样本的处理方法。条带出现斑点：可能是银染液或显色液中有杂质。应当使用纯净的试剂和去离子水或使用过滤器过滤银染液和显色液。

Western Blot实验步骤全解析 𐟌Ÿ 样品准备（冰盒）裂解细胞：去除培养基，加入预冷的1㗐BS，轻轻摇动1分钟，洗3次。按照6孔板每孔100加入裂解液（配方：磷酸酶抑制剂1、磷酸酶抑制剂2、1㗐BS、2㗓ample Buffer，比例为1:100），置于冰上摇动裂解30分钟。迅速刮下细胞并转移至1.5ml离心管中。全程宜在冰上操作。裂解组织：配置组织裂解液（PMSF、RIPA裂解液，比例为1:100）。加入200裂解液和2颗金属磁珠，预冷研磨机进行研磨。研磨后的组织瞬离并静置于冰上继续裂解30分钟。 12000rpm，4℃离心10分钟，收集上清即蛋白样本，置于冰上。蛋白变性：样品加2㗌oading Buffer（比例为1:1），用沸水浴或金属浴100℃加热10分钟，开盖后振荡一次，继续加热5分钟。冷却后瞬离并震荡。保存：直接上样跑胶或分装-80℃长期保存。 𐟌Ÿ 电泳清洗玻璃板，自然晾干，组装电泳槽，卡紧不漏水。按配方制备分离胶，加入纯水静置到胶凝固，倒掉纯水并用滤纸吸干多余水分。按配方制备浓缩胶，避免气泡。插入梳子（浓缩胶后立即插梳子），可以立即使用或在4℃湿润条件下保存一周。组装电泳装置，加入1㗧”𕦳𓧼“冲液，双手拔出梳子。上样：Marker孔中加入2-3ul Marker，并加入1㗌oading Buffer配平（Marker孔总体积与Sample孔差值不超过5ul）。电泳：开始为恒压60-80V，当Marker开始分离后，将电压加大到恒压90-130V。 𐟌Ÿ 转膜切胶。膜和转膜装置浸入转移缓冲液中。制备“夹心饼”（全程在转膜缓冲液中进行）：从负极到正极，黑色板-海绵垫-滤纸-SDS-PAGE胶-NC膜-滤纸-海绵垫-白色板，胶和膜间不能有气泡，对齐。转膜：NC膜接正极，凝胶接负极；恒流230mA，90分钟，冰盒转膜。丽春红染色（可不做）。 𐟌Ÿ 膜封闭及抗体孵育裁膜。 5% BSA封闭（可不做）。加入一抗稀释缓冲液，4℃摇床孵育过夜。 TBST洗膜，摇动洗膜5次，每次5分钟。加入二抗稀释缓冲液，室温平缓摇动孵育1小时。 TBST洗膜，摇动洗膜3次，每次5分钟。 𐟌Ÿ 扫膜

SDS-PAGE电泳及转膜全攻略一、制胶确定蛋白分子量，选择合适的SDS-PAGE胶浓度，并准备好灌胶模具。分离胶的配置：按照配方加入试剂并混匀，过硫酸铵现配现用。缓慢倒入模具，覆盖乙醇液封，等待10-20分钟。分离胶和乙醇层出现清晰界面时，倒掉乙醇。浓缩胶的配置：按照配方加入试剂并混匀（避免气泡）。将浓缩胶匀速倒入分离胶上方，避免气泡，插入梳子。等待30分钟，凝胶聚合后放入4℃保存，可加入少量电泳液或水保持湿润。二、上样与电泳内槽加入1x电泳缓冲液，确保液体浸没凝胶上端和胶板底部导电孔。外槽加满电泳液。样品与上样缓冲液按4:1比例混合，95℃-100℃加热5分钟。在同一片胶的孔中加入蛋白marker作为参照。电泳开始时使用80V低电压，待溴酚蓝跑过浓缩胶后，加大电压至120V。待marker显示的目标蛋白与其他蛋白明显分离时停止电泳。三、转膜根据胶的大小剪PVDF膜和滤纸，放入转膜缓冲液中平衡5分钟。组装转膜夹：红色朝下—海绵垫—滤纸—膜—胶—滤纸—海绵垫，夹紧后放入转移槽。加转膜缓冲液，将转移槽置于冰中。根据蛋白分子量确定转膜的电压、电流、时间。转膜结束后，切断电源，取出PVDF膜。四、封闭与免疫杂交将膜置于封闭缓冲液中，室温封闭2小时。加入稀释过的一抗，室温孵育1-2小时或4℃过夜。用TBST洗膜。加入稀释过的二抗，室温孵育1小时。 TBST洗膜。

𐟔„电转液快速转膜新体验 𐟒妎⧴⤸Š海威奥的快速转膜液，为你的电转膜操作带来革命性变革！这款特有配方的转膜液，不仅快速高效，还能显著减少蛋白损失。𐟚€ ✨特色亮点✨ 1️⃣ 快速转印：室温下，仅需20-30分钟，蛋白就能迅速转移到印迹膜上。 2️⃣ 高效转印：产生热量极低，最大程度减少蛋白损失。 3️⃣ 灵活配置：支持无水甲醇或无水乙醇的加入，效果不受影响。 4️⃣ 兼容性强：适用于多种凝胶类型，如Tris-Bis、Laemmli等。 𐟓转膜液配制指南𐟓 1000ml快速转膜液配方：100ml产品+800ml去离子水+100ml甲醇（或乙醇）。 𐟔秔𕨽줻ꨮ𞧽𚨮”犨𝬥𐧔𕦵设定为恒流400mA，电泳时间20-30分钟，即可完成转印。 𐟓操作小贴士𐟓 ✅ 使用前，用无水甲醇润湿PVDF膜30秒以上。 ✅ 100kD以下蛋白，胶浓度＜10%，20分钟即可完成转印。 ✅ 100kD以上蛋白，胶浓度≥10%，30分钟即可完成转印。 ✅ 转膜时，转膜槽内外均不可放置冰块，以免影响效率。 𐟒ᤸ𚤺†你的安全与健康，请穿着实验服并佩戴一次性手套进行操作。𐟒က

Wb实验时间缩短的4个实用技巧 Wb实验操作复杂，耗时较长。以下4个实用技巧可以帮助你缩短实验时间，提高效率。 𐟧ꠧŒ–凝胶制备步骤传统方法制备凝胶需要较长时间，但通过优化步骤，可以将整个过程缩短到10分钟。TEMED催化AP生成自由基，引发双丙烯酰胺和丙烯酰胺之间的交联，形成一个三维网络。前五种试剂可以混合到一个系统中，并在4℃的黑暗中保存一个月或更长时间。这样，整个复合步骤就被简化为预制胶系统和AP。 𐟔„ 优化电泳缓冲液传统的电泳液随着电压的升高会丢失部分蛋白质。为了加快电泳速度，可以对运行缓冲液的配方进行修改。改进后的运行缓冲液，室温下200V可以在35分钟内完成电泳。令人惊讶的是，当电压设置为300V时，它仍然正常工作。 ⚖️ 调整电转移时间不同分子量的蛋白质具有不同最合适的电转移时间。根据实验经验，建议设置以下参数：10-25kDa、250V、15分钟；25-55kDa、250V、20分钟；55-70kDa、250V、25分钟；以及70-130kDa、250V、30-35分钟。 𐟓栩€‰择合适的膜 0.22⵭的PVDF膜比0.45⵭的NC膜对小分子量蛋白的拦截能力更强。选择合适的膜可以提高实验的准确性和效率。通过以上方法，你可以有效缩短Wb实验时间，提高工作效率。

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