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mops缓冲液在线播放_mops缓冲液的配制(2024年12月免费观看)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：导读更新日期：2024-11-29

mops缓冲液

RNA琼脂糖凝胶电泳实验指南 𐟌𑊤𘀣€实验目的掌握植物总RNA的非变性胶电泳原理和方法。二、实验材料、器具及药品材料：蘑菇的总RNA溶液。器具：电泳仪、电泳槽、电子天平、移液器、枪头、微波炉、紫外透射检测仪。药品：琼脂糖、1XTAE电泳缓冲液、0.5/ml溴化乙锭（EB）10X载样缓冲液。三、实验步骤非变性琼脂糖凝胶电泳用1XTAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1XTAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4于封口膜上。在实验台上再加入51XTAE电泳缓冲液及110X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。打开电源开关，调节电压至100V，使RNA由负极向正极电泳，约30分钟后将凝胶放入EB染液中染色5分钟，用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。变性琼脂糖凝胶电泳试剂： MOPS缓冲液（10X）：0.4mol/L吗啉代丙烷磺酸（MOPS）（Ph7.0），0.1mol/LNaAc，10mol/LEDTA。上样染料：50%甘油，1mmol/LEDTA，0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝。甲醛。去离子甲酰胺。电泳槽清洗：去污剂洗干净（一般浸泡过夜）——水冲洗——乙醇干燥——3%H2O2灌满——室温放置10分钟——0.1%DEPC水冲洗。操作：将制胶用具用70%乙醇冲洗一遍，晾干备用。配制琼脂糖凝胶：称取0.5g琼脂糖，置干净的100ml锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。待胶凉至60-70℃，依次向其中加入9ml甲醛、5ml10X MOPS缓冲液和0.5ul溴化乙锭，混合均匀。灌制琼脂糖凝胶。样品准备：取DEPC处理过的500ul小离心管，依次加入如下试剂：10X MOPS缓冲液2ul，甲醛3.5ul，甲酰胺（去离子）10ul，RNA样品4.5ul，混匀。将离心管置于60℃水浴中保温10分钟，再置冰上2分钟。向管中加入3ul上样染料，混匀。上样。电泳：电泳槽内加入1X MOPS缓冲液，于7.5V/ml的电压下电泳。电泳结束后，在紫外灯下检查结果。

RNA琼脂糖凝胶电泳实验全攻略 𐟌🠥ꌧ›„ 通过学习RNA琼脂糖凝胶电泳实验，掌握植物总RNA非变性胶电泳的基本原理和方法。 𐟔젥ꌥŽŸ理 RNA电泳实验可以在变性或非变性条件下进行。非变性电泳通常使用1.0%-1.4%的凝胶，使不同RNA条带分开，但无法判断分子量。变性条件下，RNA的泳动率与分子量对数呈线性关系，可用于测定RNA分子量。快速检测总RNA样品完整性时，普通1%琼脂糖凝胶即可满足实验要求。 𐟧ꠥꌦ料与器具蘑菇的总RNA溶液电泳仪、电泳槽电子天平、移液器、枪头微波炉、紫外透射检测仪琼脂糖、1XTAE电泳缓冲液 0.5/ml溴化乙锭（EB）10X载样缓冲液 𐟓 实验步骤制作琼脂糖凝胶：用1㗔AE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1㗔AE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。样品准备：在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4于封口膜上。再加入5 1㗔AE电泳缓冲液及1 的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。电泳：打开电源开关，调节电压至100V，使RNA由负极向正极电泳，约30分钟后将凝胶放入EB染液中染色5分钟，用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。 𐟔„ 变性琼脂糖凝胶检测所需试剂： MOPS缓冲液（10x）：0.4mol/L;吗啉代丙烷磺酸（MOPS） (Ph7.0);0.1mol/L NaAc;10mol/L EDTA 上样需要的染料：50%甘油；1mol/L EDTA；0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝甲醛去离子甲酰胺 𐟔砥ꌦ“作步骤：制胶：将制胶用具用70%乙醇冲洗一遍，晾干备用。称取0.5g琼脂糖，置干净的100ml锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。待胶凉至60-70℃，依次加入9ml甲醛、5ml 10X MOPS缓冲液和0.5ul溴化乙锭，混合均匀。灌制琼脂糖凝胶。样品准备：取DEPC处理过的500ul小离心管，依次加入如下试剂：10x MOPS缓冲液2ul，甲醛3.5ul，甲酰胺（去离子）10ul，RNA样品4.5ul，混匀。将离心管置于60℃水浴中保温10分钟，再置冰上2分钟。向管中加入3ul上样染料，混匀。上样与电泳：电泳槽内加入1XMOPS缓冲液，于7.5V/ml的电压下电泳。电泳结束后，在紫外灯下检查结果。 𐟓Š 案例分析 Agarose gel electrophoresis showing total RNA extracted from P. orientalis leaves using five RNA isolation methods: CTAB method (lane 1), SDS method (lane 2), TRIzol method (lane 3), plant RNAout kit protocol (lane 4), and Improved plant RNAout kit protocol (lane 5).

WB缓冲液配方大全，实验必备！ 𐟓– 上样缓冲液 SDS 上样缓冲液（Laemmli 缓冲液）：63 mM Tris-HCl、10% 甘油、2% SDS、0.0025% 溴酚蓝，pH 6.8 𐟓‘ 2X 储存液配方 LDS上样缓冲液：106 mM Tris-HCl、141 mM Tris base、2% LDS、10% 甘油、0.51 mM EDTA、0.22 mM SERVA Blue G250、0.175 mM 酚红，pH 8.5 𐟓˜ 4X 储存液配方电泳缓冲液 Tris- 甘氨酸 SDS 电泳缓冲液：25 mM Tris base、192 mM 甘氨酸、0.1% SDS，pH 8.3 Tris- 甘氨酸非变性电泳缓冲液：25 mM Tris base、192 mM 甘氨酸，pH 8.3 MOPS SDS 电泳缓冲液：50 mM MOPS、50 mM Tris base、0.1% SDS、1 mM EDTA，pH 7.7 MES SDS 电泳缓冲液：50 mM MES、50 mM Tris base、0.1% SDS、1 mM EDTA，pH 7.3 Tricine SDS 电泳缓冲液：100 mM Tris base、100 mM tricine、0.1% SDS，pH 8.3 𐟓 转印缓冲液 Tris-甘氨酸转印缓冲液：12 mM Tris base、96 mM 甘氨酸， pH 8.3 Bis-Tris 转印缓冲液：25 mM bicine、25 mM Bis-Tris（游离碱）、1 mM EDTA，pH 7.2 这些配方是进行WB实验时常用的缓冲液配方，根据实验需求选择合适的缓冲液，以确保实验结果的准确性。

WB实验失败？5个常见原因及解决方法 1. 样品质量问题：样品蛋白质浓度过低：通常，WB实验建议加载10-30 的蛋白质。如果信号太弱，可以尝试增加样品量，但不要超过膜的承载能力。可以使用醋酸盐沉淀法或超滤浓缩法进行样品浓缩。样品蛋白质降解：使用蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂来保护样品，避免蛋白质降解。样品的处理和保存也要注意，例如快速冻存样品并在低温条件下保存。样品受到污染：确保实验过程中使用的试剂和器材干净，并进行适当的对照实验。例如，使用纯化的蛋白质作为阳性对照，同时进行阴性对照实验。蛋白质转印问题：转印条件不正确：优化电流强度、转印时间和缓冲液成分。通常，常规WB实验使用200-400 mA的电流强度，转印时间为1-2小时。优化缓冲液的成分，例如使用含有甲胺基甲酸盐（MOPS）或三甲基氨基甲酸盐（CAPS）的转印缓冲液，以提高转印效率。膜没有完全均匀湿透：使用100%甲醇浸透膜，确保膜表面均匀湿润。在转印之前，将膜放入100%甲醇中浸泡5-10分钟，然后将其转移到转印缓冲液中进行转印。抗体问题：抗体特异性不足：选择具有高特异性的抗体。可以通过文献调研、厂家推荐或其他实验室的经验来选择抗体。此外，进行充分的验证和优化，例如通过Western blot实验使用阳性和阴性对照来验证抗体的特异性。抗体效力不足：根据实验的需要，尝试使用更高浓度的抗体。通常，建议使用1:1000至1:5000的稀释倍数。也可以优化抗体结合条件，例如优化阻断剂的浓度和洗涤缓冲液的成分。阻断和洗涤条件问题：阻断剂浓度不足：增加阻断剂的浓度，通常建议使用3-5%的脱脂奶粉或1-3%的牛血清白蛋白（BSA）。优化阻断时间，通常建议阻断1-2小时。洗涤缓冲液成分不适合：优化洗涤缓冲液的成分和浓度，例如添加Tween-20或Triton X-100来增加洗涤缓冲液的洗涤效果。优化洗涤时间，通常建议进行3-5次洗涤，每次洗涤5-10分钟。显色问题：显色时间过长或过短：根据实验条件和试剂的建议，控制好显色时间。通常，常规WB实验的显色时间为1-5分钟。如果信号过强，可以缩短显色时间，如果信号过弱，可以延长显色时间。在实际操作中，还需要根据具体实验条件和样品特性进行进一步的优化和调整。

电泳条件 𐟔 传统电泳液的局限性在实验室中，传统的Tris-Glycine-SDS缓冲液被广泛使用。然而，这种电泳液在使用时电压不能过高，通常不超过150V，否则会导致缓冲液过热，蛋白降解。因此，需要在低温条件下进行电泳（冰浴）。此外，传统电泳液的速度较慢，例如在150V电压下，10*8cm的胶大约需要90分钟才能将15-170KD的蛋白完全分开。 𐟚€ 快速电泳液的优点快速电泳液允许电压增加到250V，且缓冲液不会过热，不会导致蛋白降解，无需低温条件。它能在30分钟内将15-170kD的蛋白分开，大大提高了电泳效率。 𐟌 Bis-Tris体系 MES-SDS电泳缓冲液和MOPS-SDS电泳缓冲液适用于Bis-Tris Plus预制胶。MES具有较低的pKa，使得MES-SDS电泳缓冲液的速度比MOPS-SDS更快。MOPS-SDS电泳缓冲液推荐用于分离中等至高分子量的蛋白质，而MES-SDS电泳缓冲液则适合分离低至中分子量的蛋白质。 𐟓– 凝胶系统 SDS电泳缓冲液 Bis-Tris体系 MES-SDS：MES (50mM)、Tris base (50mM)、SDS (0.1%)、EDTA (1mM)、pH 7.3 MOPS-SDS：MOPS (50mM)、Tris base (50mM)、SDS (0.1%)、EDTA (1mM)、pH 7.7 𐟌ˆ Tris-HEPES体系 HEPES-SDS电泳缓冲液专门用于HEPES预制胶，适用于多种样本类型和宽范围分子量的蛋白，具有分离效果优良、条带清晰锐利等优点，同时还大大缩短了电泳时间。 𐟓š 凝胶系统 SDS电泳缓冲液 Tris-HEPES HEPES-SDS：Tris base (50mM)、HEPES (50mM)、SDS (0.1%)、pH 7.7

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