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rna干扰前沿信息_www.sony.com.cn(2024年11月实时热点)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：教程更新日期：2024-11-26

rna干扰

circRNA实验全解 𐟔 实验原理在组织或细胞中提取的total RNA通常包含多种RNA。为了准确分析circRNA，首先需要去除样本中的核糖体RNA和poly-A RNA干扰，然后用RNase酶消化掉线性RNA，从而使circRNA富集。 𐟓Š 实验目的从总RNA中富集circRNA，采用Northern blot和特异的PCR进行验证，并对circRNA的成环特性进行评估。 𐟧ꠥꌦ料 RNA提取试剂盒核糖体RNA去除试剂盒 PolyA结合磁珠 RNAaseR试剂盒放线菌素D Northern blot试剂盒发散引物RT-PCR 𐟓 实验步骤 4.1 RNA提取样品处理组织样品：加入400ul Trizol溶液到装有绿豆大小组织块的EP管中，利用电动组织匀浆器在冰上充分匀浆1-2min，后放置室温充分裂解10min。细胞样品：12孔板细胞弃去上清，每孔加入600ul Trizol溶液。先在冰上裂解15-20min，再用1ml移液枪吹打液体充分裂解贴壁细胞，后将液体转移到RNasefree EP管中。 RNA提取按1:5比例，在Trizol溶液中加入氯仿，手动充分摇匀混合液20-30s，室温放置10min。 4度1200g离心10min，小心转移上层透明液体到EP管中。按异丙醇与Trizol溶液比例为1:2加入异丙醇，上下颠倒混匀液体，室温放置10-15min。 4度1200g离心10min，弃去上清，可见羽毛状RNA沉淀于管侧底部。按等比例加入75%乙醇，温和地悬浮RNA沉淀。 4度7500g离心5min，尽量吸除上清，室温晾干5-10min。用20ul RNase free dH20溶解RNA，测浓度后-80度保存。总RNA定量 RNA在260nm波长处有最大吸收峰，可通过测定RNA样品的OD260和OD280估算出RNA的含量和纯度。OD260值为1相当于40ug/ml单链RNA，该方法提取的RNA OD260/280值在0.8-2之间。 circRNA的预处理去除核糖体RNA和poly-A RNA 使用Invitrogen的核糖体RNA去除试剂盒RiboMinusTM Human/Mouse Transcriptome Isolation Kit（货号K1550-01）。通过磁珠法结合Poly(A)的RNA后剩余的RNA即为Poly(A)-RNA样品。 RNAaseR酶消化 RNase R是一类核糖核酸外切酶，能降解大部分线性RNA，但circRNA不易被RNase R酶消化降解。因此可以通过该实验鉴别circRNA和线性RNA。准备总RNA样品：提取细胞或组织的总RNA，测浓度后备用。 RNaseR反应体系：取5ug total RNA样品按下面体系准备消化。短暂旋转试管，添加5xFirst-StrandBuffer, 0.1MDTT, RNasin和SuperScriptM RT，轻轻移液并将反应液在25℃下孵育5分钟。在50℃下孵育60分钟，然后通过灭活反应在70℃加热15分钟。发散引物可以扩增circRNA，而不能扩增线性RNA。 𐟓š 参考文献 Chen et al. (2015). Isolation of non-polyadenylated and ribosomal-free RNAs from mammalian cells. Methods Mol Biol 1206, 69-80. Yang et al. (2016). Characterization of Circular RNA. Methods Mol Biol 1402, 215-227.

#每天一个健康冷知识# #热点引擎计划# 2024年11月23日，渐冻症抗争者蔡磊与中美瑞康合作推进的第二款渐冻症药物RAG-21获美国FDA孤儿药资格认定。 ‌蔡磊与中美瑞康合作药物获突破‌ 蔡磊与中美瑞康合作推进的第二款针对渐冻症的小核酸药物RAG-21，成功获得美国FDA授予的孤儿药资格。RAG-21专门针对FUS基因突变，通过RNA干扰机制发挥作用，临床前研究显示具有显著效果和良好安全性‌。 ‌渐冻症药物研发意义重大‌ 此次RAG-21获得孤儿药资格，不仅是对蔡磊和中美瑞康合作成果的肯定，也为渐冻症患者带来了新的希望。同时，这也将促进渐冻症药物的进一步研发和临床应用，推动医学科学的进步‌。

【#FUS基因型渐冻症药物迎来新进展#：蔡磊与中美瑞康携手推进药物实现突破】2024年11月19日晚，中美瑞康官方公众号发布一则消息：中美瑞康宣布其自主研发的FUS基因靶向小干扰RNA（siRNA）疗法RAG-21，成功获得美国食品药品监督管理局（FDA）授予的孤儿药资格（Orphan Drug Designation, ODD），用于治疗肌萎缩侧索硬化症（ALS）。 RAG-21是一种专门针对FUS基因突变的siRNA疗法，可有效降低FUS蛋白的水平，靶向运动神经元退化的根源。该药物通过RNA干扰（RNAi）机制发挥作用，通过降低FUS蛋白水平而减轻FUS蛋白的错误定位和异常聚集。临床前研究显示，RAG-21具有显著的敲低效果和良好的安全性。作为一款新型RNA疗法，RAG-21为目前尚无疾病修饰疗法的FUS-ALS患者带来了改善预后的新希望。中美瑞康表示：“这是我们在ALS领域获得的第二个FDA孤儿药物认证，此前RAG-17已获得针对SOD1-ALS的认证，表明了我们征服ALS的坚定承诺。” RAG-21是中美瑞康与渐冻症患者蔡磊携手推进的第二款针对渐冻症的小核酸药物，第一款则是针对SOD1基因的RAG-17。（渐愈互助之家）

新突破！蔡磊参与推进的渐冻症药物获美FDA孤儿药资格认定从蔡磊团队获悉，渐冻症抗争者蔡磊与中美瑞康携手推进的第二款针对渐冻症的小核酸药物迎来新突破，成功获得美国食品药品监督管理局(FDA)授予的孤儿药资格。据中美瑞康消息，其自主研发的FUS基因靶向小干扰RNA(siRNA)疗法RAG-21，成功获得美国食品药品监督管理局(FDA)授予的孤儿药资格，用于治疗肌萎缩侧索硬化症(ALS)，俗称“渐冻症”。 RAG-21是中美瑞康与蔡磊携手推进的第二款针对渐冻症的小核酸药物，第一款则是针对SOD1基因的RAG-17。资料显示，RAG-21是一种专门针对FUS基因突变的siRNA疗法，可有效降低FUS蛋白的水平，靶向运动神经元退化的根源。该药物通过RNA干扰(RNAi)机制发挥作用，通过降低FUS蛋白水平而减轻FUS蛋白的错误定位和异常聚集。临床前研究显示，RAG-21具有显著的敲低效果和良好的安全性。今年4月，蔡磊与中美瑞康成立渐冻症药物开发联合实验室，双方将在渐冻症研究和治疗领域进一步整合优势资源，共享科研成果，加速渐冻症药物研发和临床应用。（4月，蔡磊与中美瑞康签约仪式） 5月，蔡磊与中美瑞康合作开发的RAG-17正式在中国获批临床，成为目前全球唯一一款在中美均获批临床的渐冻症RNAi疗法。（5月，李龙承赴北京与还在住院的蔡磊探讨临床进展）直至目前，RAG-17的一期临床还在积极推动中。

𐟧쨴觲’的种类大揭秘𐟔 𐟤”你了解质粒吗？质粒是一种在细菌和其他细胞中发现的小型环状DNA分子哦！𐟧쥮ƒ们与细菌染色体分开并独立复制，通常只携带少量基因。 𐟒᧛，质粒在基因工程和生物医药领域都有广泛应用。想象一下，它们就像是小型的、可以复制和传递的基因片段，是不是超级神奇呢？✨ 𐟌Ÿ那么，质粒有哪些类型呢？让我们一起来揭秘吧！ 1️⃣ 克隆质粒（Cloning Plasmids）：这是用于促进DNA片段克隆的质粒哦！它们通常很简单，只包含细菌抗性基因、复制起点和多个克隆位点。𐟧슊2️⃣ 表达质粒（Expression Plasmid）：这种质粒用于基因表达研究。它们必须包含启动子、转录终止子序列和插入基因，让你的基因能够顺利表达出来！𐟒ꊊ3️⃣ 慢病毒质粒（Lentivirus Plasmids）：这是一种用于基因传递和基因治疗的载体，像不像是一个超级医生，能够把好的基因送到细胞里去呢？𐟒‰ 4️⃣ RNAi质粒（RNAi Plasmids）：这种质粒用于RNA干扰研究，让你的研究更加深入和精准！𐟔슊现在，你是不是对质粒有了更深入的了解呢？𐟤“质粒虽然小，但它们的作用可不容小觑哦！

基因编辑技术详解：敲除、敲低、敲入的区别基因编辑技术中的基因敲除（Gene Knockout）、基因敲低（Gene Knockdown）和基因敲入（Gene Knockin）是三种常见的基因功能研究方法。尽管它们名称相似，但实验方法和效果却大相径庭。今天，我们来详细了解一下这三种技术。基因敲低（Gene Knockdown）𐟧ꊥŽŸ理基因敲低，也称为基因敲降，是通过使用抑制剂来抑制基因的表达过程。主要有三种抑制方式：RNA干扰技术（RNAi）、CRISPR-Cas9技术和基因转染技术。这些技术虽然原理不同，但都能实现基因敲低的效果。 RNA干扰技术（RNAi） siRNA载体：短干扰RNA。在3端有两个碱基的游离，通过与目标mRNA互补结合序列，特异性地实现靶向mRNA降解。 shRNA载体：短发夹RNA。一种siRNA前体，包括一个“茎”和一个“环”结构，由RNA序列的短区域（这些区域形成“茎”）之间的碱基配对形成，由不形成碱基对的短序列（形成“环”）隔开。 CRISPRi载体包含CRISPRi靶向序列和转录抑制子，通过抑制靶向基因的转录水平实现基因敲低效果。基因敲除（Gene Knockout）✋ 基因敲除是通过基因编辑技术删除或破坏特定基因，使其无法表达。这种方法常用于研究特定基因的功能。基因敲入（Gene Knockin）𐟔„ 基因敲入是将外源基因插入到目标基因的位置，从而改变其表达模式。这种方法常用于研究基因的调控机制和功能。通过了解这些基因编辑技术，我们可以更好地理解它们在生物医学研究中的重要作用。

小线虫立大功！2024年诺贝尔生理学或医学奖公布啦，获奖者维克托ⷥ𘃧𝗦–勒Œ加里ⷩ𒁥䫦˜†虽然是第一次获得诺奖，但他们的研究对象，一种叫秀丽隐杆线虫的小虫子却是诺奖的常客。到目前为止，共有四届诺奖都与这种不起眼的小虫子有关。「这种小虫子成诺奖常客」秀丽隐杆线虫是一种生活在土壤中的非寄生线虫，它们有生命力强、容易饲养的优势，而且通体透明很方便观察，因此一直都是备受生物学家青睐的模式生物。今天获得诺奖的两位科学家，正是通过它，发现了微小RNA（microRNA），并确定了这种分子在基因表达调控中起到的重要作用。尽管这种线虫只有1毫米长，但它拥有许多与更复杂动物相似的专门化细胞类型，因此成为研究多细胞生物组织发育的有用模型。线虫第一次登上诺奖舞台是在2002年。布伦纳（Brenner）、霍维茨（Horvitz）和苏尔斯顿（Sulston）三位研究者通过这种小虫子发现了器官发育和细胞程序性死亡方面的基因调控规律。在此之后的2006年，线虫研究再次让安德鲁ⷦ𓕥Ž„（Andrew Fire）和克雷格ⷦⅦ𔛯𜈃raig Mello）获得了诺贝尔生理学奖。这一次，他们的发现是RNA干扰机制。而更厉害的是，线虫研究甚至还得过2008年的诺贝尔化学奖——这一次的研究主题是绿色荧光蛋白，三位获奖者当中的马丁ⷦ𒙥𐔨𒦭㦘力Š这种蛋白质用在了线虫身上。听我说，感谢虫虫𐟐›！「诺贝尔奖」「2024诺贝尔生理学或医学奖公布」图1：(A) 线虫是了解不同细胞类型如何发育的有用模式生物。(B) Ambros 和 Ruvkun 研究了 lin-4 和 lin-14 突变。Ambros 证明 lin-4 似乎是 lin-14 的负调控因子。(C) Ambros 发现 lin-4 基因编码一种微小的 RNA，即 microRNA，它不编码蛋白质。Ruvkun 克隆了 lin-14 基因，两位科学家意识到 lin-4 microRNA 序列与 lin-14 mRNA 中的互补序列相匹配。｜nobelprize 图2：显微镜下的秀丽隐杆线虫。图片：kdfj / wikimedia 图3：秀丽隐杆线虫有着优雅的正弦波走路方式，这是它名字里“秀丽”的由来 | Bob Goldstein / wikimedia

Cy5.5探针，四大妙用！ Cy5.5（Cyanine5.5）是一种荧光染料，因其较长的波长和较高的荧光稳定性，在DNA/RNA探针中有着广泛的应用。以下是Cy5.5在DNA/RNA探针中的四种主要应用：原位杂交 𐟧슥𐆃y5.5标记在DNA或RNA探针上，可以进行原位杂交实验。例如，将Cy5.5标记在一段与目标序列互补的DNA探针上，通过原位杂交可以观察到目标序列的存在和分布。这种技术常用于基因表达分析、基因组定位和细胞核酸定位等研究。荧光原位杂交（FISH）𐟔슃y5.5也可以用于荧光原位杂交实验。例如，将Cy5.5标记在一段与目标RNA序列互补的DNA探针上，通过荧光原位杂交可以直接观察到目标RNA的存在和分布。这种技术有助于研究基因表达调控、细胞核酸定位和染色体结构等。全基因组筛选 𐟧 将Cy5.5标记在全基因组引物上，可以进行全基因组筛选实验。例如，将Cy5.5标记在一组引物上，通过PCR扩增所有基因组的DNA，并进行荧光检测，可以识别特定的基因组序列。这种技术常用于基因组分析、SNP检测和位点筛选等。 RNA干扰（RNAi）⚗️ Cy5.5还可以用于RNA干扰实验。例如，将Cy5.5标记在siRNA或shRNA上，通过RNA干扰技术可以特异地抑制目标基因的表达，并通过Cy5.5的荧光信号进行检测和验证。这种技术有助于基因功能研究、基因调控和疾病治疗等。通过将Cy5.5标记在DNA或RNA探针上，可以实现对特定基因序列或RNA分子的检测和可视化。这种应用可以帮助研究人员了解基因表达、基因组结构和细胞核酸定位等。结合不同的实验技术和分析方法，可以实现对特定基因或RNA序列的定位、筛选和功能研究。相关染料 𐟌ˆ 花氰染料CY5.5-羧基 (CY5.5-COOH) 花氰染料CY5.5-氨基 (CY5.5-NH2) 花氰染料CY5.5-活性酯 (CY5.5-NHS)

《酶学方法》（Methods in Enzymology）是一套权威的实验方法和技术手册，每一卷涵盖了生物化学和分子生物学中不同领域的详细实验方法。第546卷专注于核糖核酸生物学（RNA Biology），是对RNA研究方法的深入解析。这一卷的主题主要涵盖了以下内容： RNA的分离和纯化：包括不同类型RNA的提取技术，如mRNA、tRNA、rRNA等的分离方法。 RNA的合成和修饰：介绍了如何进行体外转录、RNA修饰，以及RNA的标记和检测技术。 RNA与蛋白质相互作用：描述了研究RNA-蛋白质相互作用的方法，如RNA免疫沉淀（RIP）和交联免疫沉淀（CLIP）。 RNA的结构研究：包括RNA的折叠、RNA二级结构的预测和实验验证，以及利用各种技术来探究RNA的结构。 RNA功能研究方法：包括使用RNA干扰（RNAi）、CRISPR-Cas系统等来调控基因表达的实验方法。 RNA测序技术：详细介绍了RNA-seq技术，涵盖从样本制备到数据分析的整个过程。

10/8，十月正在迅速成为RNA领域的重要月份。刚过一周时间，已有两家专注于RNA干扰（RNAi）的公司脱颖而出，获得了巨额融资，另一家公司则准备上市并已签署生物制药合作协议。最新的生物技术公司City Therapeutics尤为引人注目，因其创始团队拥有来自RNAi先锋企业Alnylam Therapeutics的丰富经验，特别是该公司的创始CEO John Maraganore担任执行主席。City Therapeutics周二首次亮相，宣布获得由ARCH Venture Partners领投的1.35亿美元A轮融资，旨在开发下一代小干扰RNA（siRNA）工程平台。 City Therapeutics的亮相紧随Judo Bio之后，后者在周一宣布获得Atlas Venture、TCG和Droia Ventures投资的1亿美元A轮融资，专注于将寡核苷酸直接递送至靶向肾脏细胞。本月引起轰动的还有CAMP4 Therapeutics，该公司与BioMarin Pharmaceutical达成了一项RNA合作协议，并计划进行7500万美元的首次公开募股（IPO）。 **“重聚之旅”** City Therapeutics的目标是通过改进递送和提高疗效，将RNAi药物提升到一个新的高度，进展速度非常快。该公司计划在2025年底前将其领先项目推向临床，并在之后每年提交一到两个IND申请。 Maraganore表示，团队对实现这些里程碑充满信心，因为他们在Alnylam已经达成过这样的生产力目标。他说：“我们知道我们可以再次做到！” 除了Maraganore，City Therapeutics团队还包括Alnylam前总裁Barry Green，他现担任董事会成员，还有首席科学官Tracy Zimmerman，她曾在Alnylam担任研究高级主任。 “Alnylam在RNAi领域取得了惊人的成功，并将继续取得更多成果，但新创新也有机会推动下一代RNAi药物的发展，”Maraganore表示。与此同时，ARCH也再次加入这个团队。ARCH早在支持Alnylam时，就推动了RNAi药物的创建，开辟了医学的新领域。ARCH的管理董事兼联合创始人Robert Nelson表示：“现在是重新进入RNAi革命的时机，我们对City Therapeutics的投资基于对RNAi药物扩展为突破性药物大类的坚定信念。” Fidelity、Invus、Slate Path Capital、Rock Springs Capital、Regeneron Ventures和AN Ventures也参与了本轮融资，预计该融资将为公司提供至2026年的运营资金，并支持初步IND的提交和人体数据的生成。 **推动RNAi的边界** City Therapeutics的三大平台正由公司内部开发，Maraganore表示该平台旨在利用人类遗传学提高靶点特异性并优化临床开发。平台的另一主要部分涉及设计更小的RNAi触发剂，具有独特的细胞机制以增强治疗效力。最后，City正在开发更好的递送策略。Maraganore补充道：“我们认为有机会通过改进siRNA的理化性质和靶向配体来优化递送，包括针对肝外组织。”网页链接

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