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巯基乙醇最新视觉报道_巯基乙醇的作用(2024年12月全程跟踪)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：热点更新日期：2024-11-30

巯基乙醇

比昨天更困的是今天BETA-巯基乙醇_的微博视频

Western膜保存再生秘籍在多次实践的基础上，总结出一种效果极佳的Western Blot膜保存、Strip及膜再生方法，详细步骤如下：保存方法：曝光后的膜经过TBST清洗后，用甲醇浸泡5秒，然后晾干，最后用塑封膜封好，存放在-20℃冰箱中。使用方法：用甲醇清洗5秒，再经过三次TBST清洗。进行Strip操作，清洗后封闭，然后进行抗体孵育。 Stripping Buffer配方（20ml体系）： 巯基乙醇：140 10% SDS：4ml Tris（0.5M，pH 6.7）：2.5ml ddH2O：13.36ml 在50-55℃下反应30分钟（中间可晃动两次），然后用TBST清洗三次，封闭后进行抗体孵育。另一种Stripping Buffer配方（需要调pH，不常用）：甘氨酸：0.75g SDS：0.05g 加水：40ml 吐温-20：500 pH调至2.2，加水定容至50ml。实验步骤：用Stripping Buffer清洗两次，每次5分钟。用PBS清洗两次，每次10分钟。换TBST清洗两次，每次10分钟。封闭后进行抗体孵育。注意事项：加巯基乙醇时，必须在生物安全柜中进行，因为味道大且有毒。 Strip及Strip后清洗时，需加盖子防止味道散发。通过以上步骤，可以有效保存和再生Western Blot膜，确保实验结果的准确性。

OPA法测接枝率，负值咋破？有没有做过OPA法测多糖和蛋白接枝率的小伙伴？我真的是被这个问题困扰得不行了！每次测出来的接枝率不是负值就是误差大得离谱，真是让人受不了𐟘�‚ 首先，说说我的实验方法吧。我们用的是OPA法来测定接枝率，具体步骤是这样的：先配制OPA溶液，参考了Chen等（2019）的方法，把40mg的OPA溶解在1mL甲醇里，然后加入2.5mL的20%SDS，再混入25mL的0.1mol/L Na2B4O7和100的巯基乙醇，最后用蒸馏水定容到50mL。这个溶液需要现配现用哦。接下来，取200的样品（浓度是5mg/mL）和4mL的OPA溶液混合，然后在35℃下孵育5分钟。孵育完后，用紫外分光光度计在340nm下测定吸光度。通过赖氨酸作为对照品做出标准曲线来确定样品中游离氨基酸的含量。赖氨酸的标准曲线方程是：y=0.3269x+0.1155（R2=0.9985）。接枝度的计算公式是：Grafting degree = (1 - Gmax/Ginitial) 㗠100%。其中，Gmax是样品中游离氨基酸的量，Ginitial是反应前样品中的氨基酸量。可是，问题就出在这里。每次测出来的接枝率不是负值就是误差大得离谱，真是让人崩溃。有没有哪位大佬能救救孩子，告诉我这是怎么回事？该怎么解决？𐟥𙊊希望有经验的小伙伴能分享一下你们的经验和心得，真的非常感谢！

WB实验，选对洗脱液！在进行Western Blot（WB）实验时，为了节省蛋白样品和提高实验效率，我们通常会使用stripping buffer来清除膜上结合的抗体，以便重复使用同一张膜。以下是几种常用的stripping buffer及其特点：聚合美 𐟌ˆ 适用于PVDF膜。使用后，膜会变得透明。虽然洗脱效果相对较差，但可以通过延长洗脱时间来解决。过度洗脱的风险较低。博迈德 𐟒ꊠ 支持NC膜和PVDF膜，有强洗脱和弱洗脱两种选择。弱洗脱效果更好，而强洗脱含有巯基乙醇，虽然洗脱效果强，但有刺激性气味。Mild Buffer的洗脱效果表现优异。中科瑞泰 𐟔加专为PVDF膜设计，含有巯基乙醇，强洗脱效果。不过，这种洗脱液可能会将膜上的目的蛋白也洗掉，对于检测痕量蛋白的实验不太友好。使用时需要掌握好分寸。弗德 𐟌Ÿ 适用于PVDF膜，加入后膜会变透明，相对温和一些。具体效果还需要进一步实验验证。总结来说，博迈德的温和stripping buffer在避免过度洗脱方面表现较好，值得推荐。

简述巯基乙醇的作用

请问，苯酚和巯基乙醇谁更臭……..[困]

在冰箱乱放𗯥Ÿ𚤹™醇的人毕不了业，文章发不出去，延毕了也会再延毕。

𐟌𙦎⧴⩝ž变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的奥秘 𐟔줻Š天，我们将一起揭开生物科技领域的一个神秘面纱——非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE）。这个看似复杂的术语，实际上隐藏着生物科学的无数奥秘。 𐟎‰非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种在不添加任何变性剂（如SDS和巯基乙醇）的情况下，对蛋白质进行电泳分析的技术。它能够保持蛋白质的天然形状和电荷，从而让我们更准确地了解蛋白质的特性和功能。 𐟒ᩂ㤹ˆ，它的实验原理是什么呢？简单来说，非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳主要依赖于蛋白质的电荷和大小进行分离。在电场的作用下，不同电荷和大小的蛋白质会以不同的速度在凝胶中移动，从而实现分离。由于不添加变性剂，蛋白质在电泳过程中能够保持其天然状态，这对于酶的鉴定、同工酶分析和提纯等实验具有重要意义。 𐟔쥜襮ž验过程中，我们需要准备一些必要的器材和试剂，如电泳仪、电泳槽、离心机、丙烯酰胺、Tris、HCl等。在配置电泳缓冲液时，我们需要注意不要添加任何变性剂，以确保实验的准确性。 𐟓œ接下来，让我们来了解一下实验步骤。首先，我们需要制备聚丙烯酰胺凝胶，并配置好电泳缓冲液。然后，将待测蛋白质样品加入到凝胶中，进行电泳分离。在电泳过程中，我们可以观察到不同蛋白质在凝胶中的移动情况。最后，将凝胶进行染色和观察，就可以得到蛋白质的分布情况了。 𐟒ᩜ€要注意的是，由于蛋白质的电荷和大小不同，所以在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中，我们需要根据蛋白质的性质选择合适的电泳条件。例如，对于碱性蛋白质，我们需要使用低pH值的凝胶系统；而对于酸性蛋白质，我们则需要使用高pH值的凝胶系统。 𐟎‰通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，我们可以更加深入地了解蛋白质的特性和功能，为生物科学领域的研究提供有力支持。希望这篇笔记能够帮助大家更好地了解非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，激发大家对生物科学的热爱和兴趣！

Trizol法提RNA，超全攻略！ 𐟌ˆ 实验原理： Trizol试剂的主要成分是苯酚，它能有效裂解细胞，使细胞中的蛋白质和核酸物质解聚。尽管苯酚能使蛋白质变性，但它不能完全抑制RNA酶的活性。因此，Trizol中还加入了8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、B-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（即RNA酶）。存放在Trizol中的样品可以在-80Ⰳ保存半年左右。 𐟔젦 𗦜쥤„理方法：贴壁培养细胞吸出培养液，用预冷的1xPBS清洗细胞两次。吸出PBS洗液，然后每1㗱08-2㗱07的培养细胞中加入1ml的Trizol，轻摇培养皿，确保溶液均匀分布于细胞表面。（可用细胞刮刀剥离细胞）使用移液器反复吹打使细胞脱落，然后将内含细胞的裂解液转移至离心管中，再用移液器吹打直至裂解液中无明显沉淀（溶液清亮）。室温静置5-10分钟后，再进行后续的RNA提取操作。悬浮培养细胞将悬浮细胞收集至离心管中，12000 rpm 4Ⰳ离心2分钟，弃上清，用预冷的1xPBS清洗两次。向1x106-2㗱07细胞中加入1ml的Trizol。用移液器吹打至裂解液清亮无明显沉淀。室温静置5-10分钟后，再进行后续的RNA提取操作。动物组织、植物材料样品将准确称取的RNA提取样品转移至液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织（研磨过程中需要不断向研钵中补加液氮），直至研磨成粉末状，然后向粉末中加入适量的Trizol并混匀。（针对柔软易裂解的组织样本，可以使用匀浆器加入适量Trizol进行匀浆裂解）将上述混合液转移至离心管中，用移液器反复吹打充分混匀。室温静置5分钟，12000 rpm 4Ⰳ离心5-10分钟。小心吸取上清液，移入新的离心管中，再进行后续的RNA提取操作。通过以上步骤，您可以使用Trizol法成功提取RNA，为后续的实验研究提供可靠的样本。

这实验真是越做越顺手最近在做实验的时候，发现了一个超级好用的WB抗体剥离液，简直是实验员的福音！这个剥离液真的是越用越顺手，完全不费劲。温和且高效𐟒ꊩ斥…ˆ，这个剥离液的温和性真的很棒，不会破坏抗体，还能有效地去除抗体，不影响目的蛋白的检测。这样一来，实验的准确性和可靠性都大大提高了。节省时间和样品𐟕’ 其次，这个剥离液还能让一张膜进行多次抗体检测，真的是节省了时间和样品。以前总是担心样品不够用，现在完全不用担心这个问题了。背景干净，适用性强𐟧𜊥‰姦𛥐Ž的背景非常干净，不管是PVDF膜还是NC膜，都适用。这样一来，实验结果看起来更加清晰，数据分析也更加方便。无毒无味，环保安全𐟌🊦œ€棒的是，这个剥离液不含有毒有味的巯基乙醇，对实验人员非常友好。以前总是担心实验做完后身上会有异味，现在完全不用担心这个问题了。总之，这个WB抗体剥离液真的是我在实验中发现的一个宝藏，强烈推荐给大家！

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