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dcfh最新视觉报道_dcfh-da使用方法(2024年11月全程跟踪)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：热点更新日期：2024-11-30

dcfh

𐟧쒏S活性氧检测全攻略𐟔 𐟧ꥮž验流程大揭秘： 1️⃣ 装载探针是关键！ * 用无血清培养基将阳性对照Rosup稀释至100工作浓度。 * 对于短时间刺激的细胞，先装载探针再用Rosup或感兴趣的药物刺激。 * 长时间刺激的细胞则先用药物刺激后装载探针。 1.1 原位装载探针法（适合贴壁细胞） * 细胞准备：确保细胞密度在50~70%。 * 诱导：加入药物，37℃避光孵育，时间视细胞和药物特性而定。 * 探针装载：用DCFH-DA探针覆盖细胞，10终浓度。 * 清洗：用无血清培养基洗1~2次，去除未进入细胞的探针。 1.2 收集细胞后装载探针（适合贴壁和悬浮细胞） * 细胞准备：保证细胞状态健康，收集足量细胞。 * 诱导：将细胞悬浮于药物中，37℃避光孵育。 * 探针装载：离心后加入DCFH-DA，10终浓度。 * 清洗：用无血清培养基洗1~2次。 2️⃣ 检测环节不容忽视！ * 原位装载法：可直接用激光共聚焦显微镜观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。 * 收集细胞法：用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，也可用激光共聚焦显微镜观察。 𐟓 温馨提示： * 装载探针后务必洗净残余探针，避免高背景干扰。 * 装载完成后，尽量缩短到检测的时间间隔，以减少误差。 * 激发和发射波长的扫描可确认探针装载情况，确保实验准确性。

𐟧짧‘研利器｜细胞ROS精准检测探索细胞世界的奥秘，怎能少了活性氧（Reactive oxygen species, ROS）这一关键指标？ROS包括超氧自由基、过氧化氢等，它们在细胞生长、衰老等过程中扮演着重要角色。 𐟔짻†胞ROS检测，操作步骤来啦： 1️⃣ 将细胞接种到96孔板，放入培养箱过夜。 2️⃣ 等细胞密度达到60-70%，进行转染或加药处理，静置48小时。 3️⃣ 用无血清培养液按1:500稀释DCFH-DA探针，使其终浓度为10ol/L。 4️⃣ 移去原细胞培养液，加入适量稀释好的DCFH-DA（记得避光哦）。 5️⃣ 37℃细胞培养箱内孵育20分钟，让探针充分装载。 6️⃣ 用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，洗掉未进入细胞的DCFH-DA。 7️⃣ 加入50ul PBS，准备后续检测。 8️⃣ 多功能酶标仪上机检测，使用488nm激发波长和525nm发射波长。 9️⃣ 或者，用荧光显微镜拍照记录结果。 ✨科研路上，有了这些步骤，ROS检测不再难！✨

𐟌Ÿ组织活性氧检测全攻略𐟌Ÿ 活性氧（ROS）是一类高度活跃的氧代谢产物，包括超氧阴离子（O2ⷭ）、过氧化氢（H2O2）和羟基自由基（⷏H）等。它们在细胞信号传导、代谢调节和免疫防御中发挥重要作用，但过量ROS会导致氧化应激，损伤细胞内的生物大分子，如蛋白质、核酸和脂质，从而引发多种疾病。今天，我们来详细介绍如何用探针检测组织中的活性氧：首先，取出新鲜组织，用1xPBS清洗两次。用眼科剪将组织块剪碎，并用1xPBS漂洗一次，去除细胞碎片。加入适量的胶原酶，在37℃下消化30分钟，每5分钟混匀一次。用含FBS的培养基终止消化。用70um细胞滤网制备单细胞悬液。 500g离心5分钟，弃去上清液，并用1xPBS清洗细胞沉淀两次。加入稀释的DCFH-HA探针（1：500）重悬细胞沉淀，在37℃下孵育30-60分钟。用1xPBS清洗两次。用DAPI避光孵育10分钟。再次用1xPBS清洗两次。用适量1xPBS重悬细胞，在载玻片中加入10uL细胞悬液，盖上盖玻片，显微观察。通过以上步骤，我们可以有效地检测组织中的活性氧水平，了解细胞的健康状态。

一文搞懂流式活性氧（ROS）实验 ### 活性氧在细胞信号传导中的作用 𐟌€ 细胞凋亡的诱导高浓度的ROS能够触发细胞凋亡程序，主要通过影响线粒体功能、激活caspase级联反应等方式，最终导致细胞死亡。细胞内钙离子水平的调节 ROS可以通过氧化还原反应改变钙离子通道或泵的功能，进而影响细胞内钙离子的稳态，引发钙离子浓度的变化，进一步激活钙离子依赖的信号途径。对线粒体的影响活性氧主要在线粒体中产生，这里是细胞内能量代谢的核心场所。线粒体电子传递链在向氧气传递电子的过程中，部分氧气会被还原形成O2−或H2O2。此外，NADPH氧化酶家族蛋白也能通过质子传递电子来生成ROS，参与众多细胞信号的激活。对肿瘤细胞的影响在肿瘤细胞中，ROS水平通常高于正常细胞，这使得肿瘤细胞对ROS更为敏感。利用这一特性，可以通过提升肿瘤细胞内ROS水平来实现治疗癌症的目标。例如，三氧化二砷、吉西他滨等促氧化性药物就可以利用此特性来治疗癌症。 ROS实验步骤 𐟧ꊦ〦𕋥ŽŸ理常用的荧光染料为DCFH-DA（2,7-二氯荧光素二乙酸酯），它能进入细胞，并在细胞内部被酯酶水解形成DCFH。DCFH随后被细胞内的活性氧氧化，生成发出荧光的DCF。DCFH-DA本身不具有荧光，但能自由穿过细胞膜。一旦进入细胞，它会被细胞内的酯酶水解为DCFH，由于DCFH无法穿过细胞膜，所以荧光探针会在细胞内积累。细胞内的ROS能够将无荧光的DCFH氧化，生成具有荧光的DCF，并且荧光强度与ROS水平成正比。流式活性氧检测过程收集单细胞悬液，以500g离心5min，弃上清。用2mL PBS重悬细胞洗涤一次，500g离心5min弃上清。按照1:1000用PBS稀释DCFH-DA探针，使终浓度为10ol/L，即1mL PBS中加入1 ROS探针。加入稀释好的DCFH-DA 1mL重悬细胞，37℃避光孵育30 min。用2ml PBS 500g离心5min洗涤细胞1次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。加入200 PBS重悬，上机检测。通过这些步骤，你可以有效地检测细胞内的活性氧水平，进一步研究其在细胞信号传导中的具体作用。

活性氧ROS检测：荧光探针法详解 𐟌ˆ 活性氧（ROS）是细胞内产生的一类具有氧化活性的物质，包括过氧化氢和超氧阴离子等。在正常生理条件下，ROS会产生，但当其产生过多或清除不足时，会对细胞造成氧化应激，可能导致细胞损伤和疾病。 𐟔 检测原理 DCFH-DA荧光探针法是目前广泛用于检测细胞内ROS的方法。DCFH-DA（二氯荧光黄双乙酸盐）是一种可指示的探针，本身不具有荧光，但可以自由穿过细胞膜。一旦进入细胞，它会被细胞内的酯酶水解成DCFH。由于DCFH无法穿过细胞膜，因此荧光探针会在细胞内积聚。细胞内的ROS能够氧化无荧光的DCFH，生成有荧光的DCF，且荧光强度与ROS水平成正比。通过荧光显微镜、流式细胞仪或激光共聚焦显微镜等设备，在最大激发波长480nm和最大发射波长525nm下检测荧光信号。 𐟓 检测步骤使用DCFH-DA荧光探针法检测ROS的具体步骤如下：将DCFH-DA探针加入到细胞培养基中，使其自由穿过细胞膜。在指定时间后，用荧光显微镜、流式细胞仪或激光共聚焦显微镜等设备检测细胞的荧光信号。通过分析荧光信号的强度，可以确定细胞内ROS的水平。通过以上步骤，可以有效地检测细胞内ROS的水平，从而评估细胞的氧化应激状态。

索莱宝ros试剂盒 𐟓œ 碧云天ROS试剂盒说明书摘要：碧云天ROS试剂盒用于检测细胞内活性氧（ROS）的水平。试剂盒包含DCFH-DA探针和活性氧阳性对照。操作步骤包括探针装载、细胞刺激和荧光检测。 𐟔젥ꌦ�ꤨ令磯𜚊探针装载：对于短时间刺激（2小时内），先装载探针，后进行细胞刺激。对于长时间刺激（6小时以上），先用药物刺激细胞，后装载探针。原位装载：用无血清培养液稀释DCFH-DA至10微摩尔/升。去除细胞培养液，加入稀释好的DCFH-DA，覆盖细胞。 37℃孵育20分钟，洗涤细胞三次，去除未进入细胞内的DCFH-DA。收集细胞后装载：将细胞悬浮于稀释好的DCFH-DA中，细胞浓度为一百万至两千万/毫升。 37℃孵育20分钟，每隔3-5分钟颠倒混匀，洗涤细胞二次。直接进行药物刺激或等分后刺激，通常20-30分钟后活性氧阳性对照显著提高活性氧水平。 𐟓 注意事项：探针装载后需洗净残余探针，否则背景较高。激发波长和发射波长的扫描确认探针装载情况。尽量缩短探针装载后到测定的时间，减少误差。使用适合荧光检测的黑板或白板进行检测。 𐟚렦𓨦„事项：本产品仅供专业人员用于科学研究，不得用于临床诊断或治疗。使用前请穿实验服并戴一次性手套。 𐟓栥Œ…装清单： DCFH-DA（10mM）0.1ml 活性氧阳性对照（50mg/ml）1ml 说明书1份 𐟌᯸ 保存条件： -20℃保存，有效期一年。 𐟔砦“作步骤验证：按照说明书提供的操作步骤进行实验，确保每个步骤都按照要求执行。如果在操作过程中遇到问题，可以参考说明书中的详细说明或咨询技术支持。

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