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台盼蓝染色前沿信息_台盼蓝染色原理(2024年12月实时热点)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：教程更新日期：2024-12-01

台盼蓝染色

台盼蓝染液 𐟌🰟’™最近迷上了蓝染，特别是台盼蓝染液。那种神秘的蓝色，真的让人爱不释手。今天就和大家分享一下台盼蓝染液的制作方法、染色效果以及与其他蓝染技术的比较。 𐟌𑥏𐧛𜨓染液的制作方法制作台盼蓝染液其实并不难，只需要几个简单的步骤和一些耐心。准备100克染料、20克固色剂、20克还原剂、2.5升水。将染料放入水中，搅拌3分钟至融化；然后加入固色剂，继续搅拌5分钟；再加入还原剂，再搅拌5分钟。静置30-60分钟，待染液呈偏绿色即可使用。记得捞掉泡沫哦！这个过程中，每次搅拌都要充分到位，特别是加入还原剂后的搅拌更为重要。时间、温度和搅拌程度都会影响最后的染色效果。所以，大家一定要细心哦！ 𐟌𘥏𐧛𜨓染色的效果与问题用台盼蓝染液染色时，可能会出现颜色不稳定或者掉色的问题。这主要是因为蓝染本身的特性。为了防止掉色，可以在染色后使用盐和明矾进行固色，但效果可能并不理想。植物染料本身就有掉色的特点，这也是它的环保之处。有一次我染色时，发现颜色不稳定，于是尝试多次搅拌和固色，最终得到了理想的蓝色。所以，如果遇到颜色问题，不妨多试验几次，找到最适合自己的染色条件。 𐟌台盼蓝染液与其他蓝染技术的比较相比中国的沉淀法，日本的堆积发酵法（如蒅）和台湾的酵素法各有其特点。日本的堆积发酵法采用酿酒的方式进行发酵，需要更长的时间和更好的环境；台湾的酵素法则更注重发酵过程中酶的利用。台盼蓝染液与这些方法相比，最大的区别在于其高效性和稳定性。台盼蓝染液不需要长时间的发酵和堆积，可以直接建缸染色，节省了很多时间和资源。而且它的染色效果更加稳定，不容易掉色。总结下来，每种方法都有其适用的场景和特点，选择哪一种还是要根据自己的需求来定。 𐟌𑰟’줻夸Š就是我对台盼蓝染液的一些分享和体验。如果你也对蓝染有兴趣或者有什么问题，欢迎在评论区和我互动哦！期待大家的留言和讨论！

细胞计数新手指南：台盼蓝染色法嘿，大家好！今天我们来聊聊细胞计数的那些事儿。在细胞培养的世界里，了解细胞的生活状态、鉴别死活、确定接种浓度和数量，以及计算存活率和增殖度，都是非常重要的。而这一切，通常都需要用到台盼蓝染色法。首先，台盼蓝是一种活体染料，它不能透过活细胞的完整细胞膜，所以活细胞不会着色。但是，一旦细胞死亡，它们的细胞膜通透性会增加，台盼蓝就能进入细胞内，让细胞变成蓝色。这样一来，我们就可以通过观察细胞的染色情况，来判断细胞的死活。在实验中，我们通常会用到血细胞计数板来计数。这个计数板的设计非常巧妙，它让每个细胞都落在特定的方格内，方便我们计数。而且，我们还会按照白细胞计数的方法来计数，这样就能更准确地了解细胞的生活状况。那么，实验中需要用到的材料有哪些呢？通常我们需要准备0.4%的台盼蓝溶液、无水乙醇或95%的乙醇溶液、脱脂棉、相差显微镜、试管、吸管、毛细吸管以及细胞计数板。这些材料都是实验中必不可少的哦！在实验过程中，有几个小细节需要注意。首先，向计数板中滴加细胞悬液时要干脆利落，加量要适中，多了盖片会漂移，少了又容易有气泡。其次，如果镜下观察到方格中的细胞分布不均匀，说明细胞悬液没有混合好，需要重新混合后再计数。总之，细胞计数是一个非常实用的实验方法，通过台盼蓝染色法，我们可以更准确地了解细胞的生活状态和死活情况。希望这篇文章能帮到大家，祝大家实验顺利！𐟒갟”쀀

台盼蓝vs AO/PI，谁更胜一筹？细胞计数和状态判断是生物学研究中的重要环节，其中台盼蓝染色法和AO/PI染色法是两种常用的方法。以下是这两种方法的详细介绍： 𐟔 台盼蓝染色法台盼蓝：蓝灰色粉末，溶于水，微溶于乙醇，不溶于其他有机溶剂。它是一种细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，从而判断细胞是否存活。实验原理：活细胞胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使其无法进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。因此，细胞膜完整性丧失通常意味着细胞已经死亡。借助台盼蓝染色，可以快速区分活细胞和死细胞。染色浓度：一般成品试剂为0.4%的储存液，使用时需稀释10倍。优点：价格低廉。缺点：在PBMC分离过程中，红细胞可能残留，其大小与PBMC接近，台盼蓝法无法分辨红细胞与活的PBMC，可能导致浓度与活率差异；CHO细胞在培养过程中会产生细胞碎片和杂质，台盼蓝法无法准确区分。 𐟌ˆ AO/PI染色法 AO/PI：指吖啶橙（AO）和碘化丙啶（PI）的组合。吖啶橙（AO）：可以发出绿色荧光的DNA结合染料。碘化丙啶（PI）：可以发出红色荧光的DNA结合染料。染色原理：AO可以通过完整的细胞膜，嵌入所有细胞的细胞核，呈现绿色荧光；PI只能通过不完整的细胞膜，即死细胞的细胞膜，嵌入所有死细胞的细胞核，呈现红色荧光。当两种染料均存在于细胞核内时，在合适的AO、PI配比下，两种染料发生能量共振转移，死细胞在绿色通道下激发出红色荧光。染色浓度：一般都是买的成品试剂。优点：弥补了台盼蓝染色法的不足；由于AO和PI为DNA结合染料，可有效排除杂质以及红细胞的干扰，确保对样品进行准确计数。缺点：成品试剂的成本较台盼蓝高。通过以上介绍，可以看出台盼蓝染色法和AO/PI染色法各有优缺点，选择时需根据具体实验需求和条件来决定。

如何判断单细胞数据的质量？𐟤” 拿到高质量的单细胞数据，首先得确保你拿到的是高质量的单细胞悬液。这个悬液的细胞活性得大于80%。常用的染色方法有AO/PI染色和台盼蓝染色。相比之下，台盼蓝染色可能会有假阴性的问题，特别是在植物原生质体的活性测定中。因为富含叶绿体的植物细胞在台盼蓝染色后颜色更深，细胞计数仪可能会误判为死细胞。所以，经验丰富的操作人员检查细胞状态也是非常重要的一步。接下来，你需要捕获到足够数量的高质量细胞。具体的质控标准可以结合以下几点来理解：捕获到的细胞数量：这是单细胞测序研究的重要参数。捕获到的细胞数量越多，证据越充分，越有利于发表高分文章。在后续分析过程中，还会再做一次细胞过滤，最终得到的细胞数目就是每一篇单细胞测序文章都会描述的捕获到的细胞数目。平均reads数：这相当于测序深度，一般大于3万是比较好的数据。中位基因值：这个值的大小与不同的组织样本有关，比如癌细胞中可能数值较高。测序饱和度：一般大于50%即可。高质量细胞的占比：本次测序得到的reads比对到高质量细胞的占比，也是后续用来分析的数据。如果细胞活性偏低，细胞破裂较多，游离到环境中的mRNA偏多，这个数值会偏低。总之，单细胞数据的判定需要综合考虑多个因素，确保数据的准确性和可靠性。

如何安全复苏冻存细胞：详细指南复苏冻存细胞是一个需要小心操作的过程，以下是详细的步骤和注意事项：操作步骤检查冻存目录𐟓‹：首先，确认你要复苏的冻存管的位置。准备材料𐟧꯼š收集所有必要的材料，包括培养基，并标记好培养瓶。取出冻存管𐟧Š：从冻存罐中取出冻存管，检查标签以确保是正确的。如果小管没有完全浸没在液氮中，将其放入塑料除菌水桶内的37℃烧杯中。注意不要让水超过管帽，以免增加污染风险。复苏冻存管𐟔导š将冻存管从液氮中取出时，必须穿实验衣和戴手套。如果冻存管浸没在液氮中，还需要戴面罩或护目镜。复苏时使用带盖的塑料水桶可以控制可能的爆炸。检查细胞类型𐟔：复苏时再次检查标签，确认是所需的细胞类型。用70%乙醇彻底擦洗冻存管，然后在超净工作台内打开冻存管。转移细胞𐟓毼š用1ml吸管将冻存管内的细胞转移至培养瓶中。加入培养基𐟌𑯼š缓慢加入培养基至细胞悬液中，以每2分钟10ml的速率进行滴加。开始时逐滴加入，然后可以加快速度，逐渐稀释细胞和细胞保护剂。离心去除保护剂𐟒‰：如果需要通过离心去除细胞保护剂：在离心管或常规容器内缓慢稀释细胞。以100g离心2分钟。弃去含有细胞保护剂的上清培养液。用新鲜培养基重新悬浮细胞。接种入培养瓶。测定细胞存活率𐟔⯼š冻存管内残留物可用萘黑或台盼蓝染色，以测定细胞的存活率。 24小时后检查𐟕’：贴壁单层细胞：根据预测密度（个细胞/cmⲯ𜉧š„细胞照片，确认细胞是否贴壁，估计细胞存活率。悬浮生长的细胞：检查外观（清晰的细胞质，缺乏细胞颗粒），稀释至常规的接种浓度。如果进行细胞技术，并估计细胞存活率后，可以将细胞稀释至常规存活细胞接种浓度。注意事项穿实验衣和戴手套𐟧䯼š将冻存管从液氮中取出时，必须穿实验衣和戴手套。如果冻存管浸没在液氮中，还需要戴面罩或护目镜。储存在液氮中的冻存管可能吸入液氮，复苏时可能发生剧烈爆炸。检查冻存管𐟔：塑料冻存管在使用前要仔细检查，以防管壁破裂或螺口不配套造成密封不严。 DMSO处理𐟧Š：用DMSO作为冻存保护剂时，用前应先将冻存液在4℃预冷，解冻后应马上洗去保护剂。通过以上步骤和注意事项，你可以安全、有效地复苏冻存细胞。

四川大学华西药学院：免疫细胞研究新突破 𐟏력››川大学华西药学院历史沿革四川大学华西药学院的前身是仁济医院高级药师职业学校，成立于1932年。1953年更名为四川医学院药学系，1987年组建为华西医科大学药学院。2000年，原华西医科大学与四川大学合并，药学院更名为四川大学华西药学院。经过七十余年的发展，学院已成为我国西部地区重要的药学人才培养和科学研究基地。 𐟔젥…疫细胞在免疫系统中的作用免疫细胞在维护机体免疫稳态中扮演关键角色。小白鼠的免疫淋巴细胞和脾细胞包括T细胞、B细胞、NK细胞和巨噬细胞等，分别负责细胞免疫反应、体液免疫反应、直接杀伤被病毒感染的细胞及肿瘤细胞。脾细胞则位于脾脏内，参与过滤血液、清除病原体和产生抗体等功能。 𐟒ᠥˆ𗧗›点与解决方案在进行免疫细胞浓度与活率分析时，传统方法如血球计数板人工计数耗时且误差大。牛顿光学Tunin细胞计数仪通过高精度成像计数和卓越的算法，能够快速识别与区分单个细胞及细胞团簇，显著提高了实验效率。 𐟔젔unin细胞计数仪产品亮点 Tunin细胞计数仪基于明场/台盼蓝染色原理，拥有市面上最快的分析速度、高分辨率的光学成像系统，以及可自由调节的焦距轴。机身内置7英寸触摸屏，无需外接电脑，小巧的设计极大地提高了细胞房空间利用率，秒出结果，毫厘不差！牛顿光学致力于为科研工作者提供更优质、更便捷的实验方案，助力四川大学华西药学院的免疫细胞研究取得新突破。

细胞培养必备技能：细胞计数全攻略在细胞培养中，了解细胞的生长状态、鉴别死活细胞、确定接种浓度和数量以及计算细胞存活率和增殖度是非常重要的。以下是细胞计数的详细步骤和原理。 𐟔 细胞计数原理细胞悬液制备后，常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色。台盼蓝不能透过活细胞的正常细胞膜，因此活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高，染料进入细胞内使细胞着色（蓝色）。细胞计数一般使用血细胞计数板，按白细胞计数方法进行计数，便于确定细胞的生活状况。 𐟧•𐦖𙦳• 制备细胞悬液：将动物细胞用PBS制备成适当浓度的细胞悬液备用。擦拭计数板和盖玻片：用无水乙醇或95%乙醇溶液擦拭计数板，然后用绸布擦净。另取一张擦净的盖玻片覆盖在计数板上。染色：用滴管吸取0.4%台盼蓝染液，按1∶1比例加入细胞悬液中。从计数板边缘缓缓滴入，使之充满计数板和盖片之间的空隙中。注意不要使液体流到旁边的凹槽中或带有气泡，否则要重做。稍候片刻，将计数板放在低倍镜下（10㗱0倍）观察计数。计数：按图计算计数板的四角大方格（每个大方格又分16个小方格）内的细胞数。计数时，只计数完整的细胞，若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。在一个大方格中，如果有细胞位于线上，一般计下线细胞不计上线细胞，计左线细胞不计右线细胞。二次重复计数误差不应超过Ⱶ%。镜下观察，凡折光性强而不着色者为活细胞，染上蓝色者为死细胞。换算细胞数：计完数后，需换算出每ml悬液中的细胞数。由于计数板中每一方格的面积为0.01cmⲯ𜌩똤𘺰.01cm，这样它的体积为0.0001 cm⳯𜌥𓰮1 mmⳣ€‚由于1ml＝1000 mm⳯𜌦‰€以每一大方格内细胞数㗱0,000＝细胞数/ml，故可按下式计算：细胞悬液细胞数/ml＝4个大格细胞总数/4㗱0,000。稀释倍数：如计数前已稀释，可再乘稀释倍数。计算存活与死亡细胞比例：计数后，计算细胞悬液浓度并求出存活与死亡细胞数的比例。 𐟓Š 附：细胞计数原理图通过以上步骤，你可以准确地了解细胞的生长状态和数量，为后续的实验提供重要参考。

细胞凋亡检测的六大关键指标 𐟌€ 细胞凋亡，也被称为程序性细胞死亡或细胞自杀，是一个在基因控制下主动结束生命的过程。它与细胞坏死不同，因为凋亡不会将细胞内容物释放到周围环境中。细胞凋亡在生物界普遍存在，无论是正常生理状态还是病理状态，它在胚胎发育、组织稳定、机体防御和免疫反应中都发挥着重要作用。细胞凋亡的特征 𐟌 细胞凋亡过程中会出现多种标志性生理现象。随着凋亡程度的加深，这些现象也会有所不同。早凋时期：细胞膜结构改变，磷脂酰丝氨酸（PS）外翻。 Bcl-2等凋亡相关蛋白激活。胞内Caspase酶激活。线粒体膜电势崩溃。凋亡中期：亚G1期细胞群增加。晚凋时期：细胞核皱缩。 DNA片段化。细胞膜出芽，形成凋亡小体。细胞凋亡的常见检测方式 𐟔슦˜𞥾œ观察：通过光学显微镜或荧光显微镜观察细胞的形态学变化，如HE染色、吖啶橙染色、台盼蓝染色等，检测细胞凋亡。 Annexin V检测：利用Annexin V与外翻的PS结合，通过检测荧光基团的信号判定凋亡发生情况。检测激活的蛋白：在细胞膜失去对称性后，某些凋亡相关蛋白被激活，如Bcl-2、BAX、FASL/TNFSF6、TNF-퉯𜌩€š过ELISA等方法测定这些蛋白的激活状态。 Caspase酶活性检测：检测Caspase的活力来判定细胞凋亡情况。 JC-1检测：正常细胞线粒体膜电位较高，JC-1可聚集发出红色荧光；当细胞发生凋亡时，线粒体膜电位降低，JC-1无法聚集，便以绿色单体存在。通过检测线粒体膜电位变化来判断凋亡发生情况。 TUNEL检测：在细胞凋亡晚期，DNA片段化，断裂的DNA暴露出的3’-OH可以被末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）催化，与荧光素标记的dUTP结合。通过TUNEL试剂盒检测DNA是否发生片段化，判定细胞凋亡。通过这些方法，我们可以更深入地了解细胞凋亡的过程和机制，为疾病研究和治疗提供有力支持。

细胞染色比拼！谁更强？在细胞生物学研究中，区分活细胞和死细胞至关重要。𐟔 Calcein-AM/PI（Calcein Acetoxymethyl Ester/Propidium Iodide）和台盼蓝（Trypan Blue）是两种广泛使用的染色试剂，它们在细胞存活评估中各有千秋。 𐟌🠃alcein-AM/PI的工作原理如下： Calcein-AM能够渗透细胞膜，被内源酯酶水解为Calcein，仅在活细胞内发出绿色荧光。 Propidium Iodide（PI）则用于染色死细胞和坏死细胞，发出红色荧光。活细胞膜完整，Calcein-AM和PI都无法进入，因此保持无色。 Calcein-AM/PI染色可用于评估细胞的存活和死亡状态，尤其在细胞培养和细胞治疗等实验中大放异彩。 𐟒™ 台盼蓝的染色机制则有所不同：台盼蓝能够穿透破损的细胞膜，染色死亡或受损的细胞，使其呈现蓝色。活细胞膜保持完整性，台盼蓝无法进入，因此保持无色。台盼蓝主要用于区分活细胞和死亡或受损细胞，特别适用于细胞计数或细胞存活率测定，例如在血细胞计数、细胞培养的质量控制等方面。 𐟔젦— 论是Calcein-AM/PI还是台盼蓝，它们都是生物科研人员的重要工具，帮助我们更深入地了解细胞的生死存亡。

细胞克隆实验全攻略：从准备到结果解读细胞的消化 𐟧슥–对数生长期的细胞，分别加入0.5mL 0.25%的胰蛋白酶，放入细胞培养箱中消化2分钟。从培养箱中取出细胞，加入1mL完全培养基，吹打成单个细胞。常温下1000rpm离心5分钟收集细胞。离心后去除上清液，加入1mL完全培养基，吹打成单个细胞悬浮液备用。活细胞计数 𐟔⊥–10细胞悬浮液，加入90台盼蓝溶液，涡旋振荡混匀。用酒精清洁血细胞计数器的小室和盖玻片，然后用脱脂棉擦干。用微量移液器吸取10稀释的样本充满两个小室。计数4个大方格中的细胞总数，活细胞透明有折光（未染色），死细胞则染成蓝色。细胞密度计算方法：每个方格中活细胞总数平均值 x 稀释倍数 x104=活细胞数/mL。细胞接种与培养 𐟌𑊥𐆧𛆨ƒž悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每孔500个细胞梯度密度接种于含2mL 37℃预温培养液六孔板中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃ 5%CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2~3周。每隔3~4天换一次新鲜培养基。细胞克隆固定与染色 𐟎芧𛏥𘸨炥𜌥𝓥Ÿ𙥅𛥭”中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加5mL 4%多聚甲醛固定细胞15分钟。除去固定液，加适量0.4%结晶紫染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。细胞克隆计数与拍照 𐟓𘊥𐆥𙳧š🥀’置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜（低倍镜）计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。克隆形成率 =（克隆数/接种细胞数）㗱00%。实验关键 𐟔动ꌦˆ功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。细胞在进行克隆形成实验时要求有95%以上的分散度，否则结果的准确度会受到很大影响。一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。

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