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慢病毒载体前沿信息_慢病毒转染293步骤(2024年11月实时热点)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：教程更新日期：2024-11-28

慢病毒载体

两篇CAR-T专利，速看！最近在研究In vivo CAR-T疗法，发现了一些有趣的专利，忍不住要和大家分享一下。首先，第一篇专利是关于逆转录病毒载体和慢病毒载体的，它们都带有特定的病毒包膜。这个包膜包含两种T细胞活化跨膜蛋白：一种是促有丝分裂的T细胞活化跨膜蛋白，它含有促有丝分裂结构域和跨膜结构域；另一种是基于细胞因子的T细胞活化跨膜蛋白，它含有细胞因子结构域和跨膜结构域。需要注意的是，这些活化跨膜蛋白并不是病毒包膜糖蛋白的一部分。当这些病毒载体转导细胞时，比如T细胞或自然杀伤细胞，它们会被这些活化跨膜蛋白同时活化。第二篇专利也是关于逆转录病毒载体和慢病毒载体的，内容基本和第一篇类似。它们都带有特定的病毒包膜，这个包膜同样包含两种T细胞活化跨膜蛋白：一种是促有丝分裂的T细胞活化跨膜蛋白，另一种是基于细胞因子的T细胞活化跨膜蛋白。这些活化跨膜蛋白也不是病毒包膜糖蛋白的一部分。通过这些病毒载体转导细胞时，细胞的活性会被显著提高。此外，还有一篇专利提到了逆转录病毒的组合物及其用于基因递送的方法。这个组合物包含一个突变的病毒包膜蛋白，至少削弱了其天然功能。同时，还包含一个非病毒膜结合蛋白，它包含膜结合结构域和细胞外靶向结构域。这个组合物可以用于基因递送，方法也比较独特。总的来说，这些专利为我们提供了更多关于In vivo CAR-T疗法的研究方向和思路。如果你也在这个领域研究，不妨多看看这些专利，说不定会有新的启发哦！

NEJM刊文：这种基因疗法会导致10%的病人患癌！肾上腺脑白质营养不良（ALD）是一种罕见的单基因遗传性脂类代谢病，该病会破坏大脑神经，并常常导致患者在 20 岁之前死亡。2022 年，美国食品和药品管理局（FDA）批准了Bluebird Bio公司的基因疗法 Skysona 。该疗法使用改造过的慢病毒载体递送治疗基因，阻止疾病进展，治疗费用高达 300 万美元。 10月9日，一项发表于《新英格兰医学杂志》（NEJM）的研究报告显示，在接受 Skysona 临床试验的 67 名患者中，6 名患者患上了一种名为骨髓增生异常综合征（MDS，该疾病可以发展为白血病）的恶性肿瘤，一名患者患上了白血病。据悉，早在 2021 年和 2022 年，Skysona 已分别导致一例和两例患者出现 MDS。而在此次患癌的 7 名患者中，6 人不得不再次接受造血干细胞移植以治疗副作用，其中 4 人的癌症已经治愈，一名患者因对移植干细胞的免疫排斥而去世。随着时间推移，患癌病例或还将继续增加。研究人员推测，患者出现癌症可能源于慢病毒载体携带的强力增强子序列激活了致癌基因；另一可能因素是化疗，因为这 7 位患癌病例中的 6 例都曾使用过氟达拉滨（fludarabine）。研究人员正在考虑重新设计可以更精准靶向患病细胞的慢病毒载体，并不再引入强力增强子。「热门微博」「科研动态」「医学进展」「药物」

11/27，美国FDA已对bluebird bio的基因疗法Skysona（elivaldogene autotemcel）展开调查，该疗法于2022年获得批准，用于治疗4至17岁男孩的脑性肾上腺白质营养不良症（CALD）。调查背景此举源于上个月《新英格兰医学杂志》（NEJM）发布的一篇论文，揭示了67名接受该疗法治疗的儿童中，有7名在治疗后14至92个月之间发生了血液系统恶性肿瘤。报告指出，7名患者中有1例急性髓性白血病（AML），以及6例骨髓增生异常综合症（MDS）。这些患者参与了两项24个月的研究和一项长期随访研究。 FDA考虑采取监管行动 FDA周三表示：“FDA正在调查与Skysona治疗相关的血液系统恶性肿瘤的已知风险，这些恶性肿瘤可能导致严重后果，包括住院、需要同种异体造血干细胞移植（HSCT）和死亡，并正在评估是否需要采取进一步的监管措施。” FDA还建议：“鉴于这一风险，医疗服务提供者应谨慎考虑替代治疗方案，包括对于具有合适、愿意并可用的HLA配型捐献者的患者，考虑使用同种异体造血干细胞移植，而不是立即决定用Skysona治疗儿童。” 慢病毒载体插入与患者情况根据NEJM的论文，6名有数据的患者显示其DNA中有多个位置出现了慢病毒载体插入。5名患者的插入位点接近MECOM-EVI1基因，1名患者的插入位点接近PRDM16基因。部分患者出现了细胞减少症，大多数患者的载体插入发生在同一克隆内的多个基因中。截至今年4月，5名患者已接受同种异体HSCT治疗MDS或AML，其中4名患者存活，1名患者因移植物抗宿主病去世。 Skysona的现有风险警告与后续研究 Skysona在美国的标签中已包含关于治疗后发生血液恶性肿瘤的严重风险的黑框警告。此外，批准还要求进行为期15年的上市后安全性研究。在批准之前，Skysona已经因2021年在一项III期临床试验中出现疑似MDS病例而受到FDA临床暂停。公司面临财务挑战 bluebird bio目前面临持续的财务挑战，最近披露公司仍处于财务困境中。在第三季度财报发布时，公司表示，若无法获得额外资金，预计到2025年初将耗尽现金储备。9月，bluebird宣布将裁员约四分之一，以期将运营成本减少20%。同时，Skysona与该公司三款基因疗法（Lyfgenia [lovotibeglogene autotemcel]和Zynteglo [betibeglogene autotemcel]）一直未能获得市场认可。网页链接

𐟧짨𓨽짻†胞系构建全攻略𐟒ኦž„建稳转细胞系，这些方法你必须知道： 1️⃣ 慢病毒法：利用慢病毒载体，将目的基因稳定整合到细胞基因组中。 2️⃣ 转座子法：通过转座子技术，实现目的基因在细胞中的稳定表达。 3️⃣ CRISPRa法：利用CRISPR-a系统，精确编辑细胞基因，达到稳定表达的目的。 4️⃣ Knockin法：通过基因敲入技术，将目的基因插入到细胞基因组特定位置。 𐟤”构建时遇到这些问题怎么办？ ✅ 密码子优化：针对长基因，优化密码子可大幅提升蛋白表达量。 ✅ Kozak序列：真核生物mRNA翻译起始的关键序列，确保蛋白正确翻译。 ✅ 启动子选择：根据细胞类型和基因长度，挑选合适的启动子。 ✅ 培养体系调整：根据细胞代谢需求，调整培养体系，维持细胞最佳生长状态。 ✅ 标签位置选择：根据蛋白特性和纯化需求，合理放置标签。 𐟚릳覄：不建议构建稳转敲除的细胞系，以避免脱靶效应对细胞状态的影响。遵循这些步骤，你的稳转细胞系构建将更加高效与精准！✨

我所有课题的sponsor，Vyriad公司今天宣布了和诺华公司的战略合作以加速临床转化用重靶向的慢病毒实现在体CAR-T疗法。CAR-T疗法最近又爆发了第二春，但目前还是依赖于从病人体内分离T细胞再在体外用病毒载体转化为CAR- T细胞再体外扩增最后会输病人体内。这种方法既贵又费时。而Vyriad公司的重靶向慢病毒可直接输入患者直接在体实现CAR-T疗法，具有不可比较的优势。这次输血降大大加速临床转化。对我的一个研究项目用疱疹病毒载体实现在体CAR- T疗法也有很大促进作用。 Vyriad公司致力于用病毒载体实现在体的免疫疗法、细胞疗法和基因治疗。

𐟧쨴觲’图谱解析大揭秘！𐟔 𐟔즎⧴⨴觲’的奥秘，一份详尽的图谱解析等你来收藏！𐟓š 𐟒᥉几期我们深入了解了质粒的各个元件，今天，我们将这些元件组合起来，为你揭示它们在实验中的实际应用。𐟧𞊊𐟓–图谱中，我们展示了： - 𐟐𞥓𚤹𓧻†胞表达载体，让你的基因在哺乳细胞中高效表达。 - 𐟎�𚤹𓧻†胞干扰载体，有效干扰特定基因的表达，研究其功能。 - 𐟦 慢病毒表达载体，通过慢病毒将基因稳定整合到宿主细胞中。 - 𐟛᯸慢病毒干扰载体，利用慢病毒进行基因沉默，探究基因间的相互作用。 𐟌Ÿ质粒介绍系列的6篇文章，带你全面了解质粒的构造与应用。想要更深入了解生物技术，就快来收藏这份图谱解析吧！𐟒– 𐟔–后续我们将继续分享更多实用技术文章，敬请期待！𐟔œ

基因调控全攻略𐟓š 在研究基因功能或验证药物靶点时，基因过表达、敲低和敲除是必不可少的步骤。很多科研人员可能对这些方法感到困惑，因此整理了一些体外细胞实验中常用的过表达、敲低和敲除方法，供大家参考。体内动物的基因编辑将在下一期讲解。基因过表达 𐟓ˆ 基因过表达是将目的基因的编码区序列（CDS）克隆到相应的质粒或病毒载体上，利用载体骨架上的调控元件，使基因在人为控制下大量转录和翻译，从而实现目的基因的过表达。质粒：瞬时转染普通编码基因过表达 miRNA过表达 lncRNA过表达 circRNA过表达特点：过程简单：常规质粒载体通过常规转染即可将质粒转入细胞。载体容量大：有足够大的容量放置感兴趣的序列。表达水平高：表达水平较高。表达时间短：表达时间较短。慢病毒：稳定转染慢病毒重组载体构建完成后需要辅助质粒的参与才能包装形成病毒颗粒。通过对上清液中活体病毒的直接收集或进一步浓缩病毒后可用于转染靶细胞，释放到宿主细胞中的病毒RNA逆转录成双链DNA，进一步整合到宿主细胞的基因组中。感染谱广：感染范围广泛。稳定表达：通过将外源基因整合到宿主细胞基因组上，可实现目的基因长期稳定表达。安全性高：安全性较高。包装容量有限：插入的外源基因需在4kb以下。包装滴度较低：包装滴度较低。基因敲低 𐟓‰ 基因敲低是利用双链小RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA，从而阻断体内靶基因的表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。通过降解具有同源序列靶基因的mRNA，达到阻止基因表达的作用。 siRNA：瞬时转染小干扰RNA（siRNA），是一类双链RNA分子，长度为20-25个碱基对，类似于miRNA，它干扰了表达与互补的核苷酸序列的特定基因的转录后降解的mRNA，从而防止翻译。基因敲除 ✖️ 基因敲除是用含有一定已知序列的DNA片段与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，整合至受体细胞基因组中并得到表达的一种外源DNA导入技术。 CRISPR/Cas9基因编辑技术 CRISPR/Cas9技术是一种常用的基因编辑技术，通过在基因组中引入特定的DNA片段，实现基因的敲除。希望这些信息能帮助大家更好地理解和掌握基因过表达、敲低和敲除的方法，欢迎交流学习！

《药明康德：2024 年前三季度的辉煌征程与璀璨未来》在医药领域的浩瀚星空中，药明康德犹如一颗璀璨的巨星，散发着耀眼的光芒。2024 年前三季度，药明康德以其卓越的表现，再次书写了一段令人惊叹的传奇篇章。一、客户增长与订单飙升，铸就辉煌基石 2024 年前三季度，药明康德新增客户超过 800 家，这一数字如同跳动的音符，奏响了公司业务拓展的激昂乐章。与此同时，公司维持着超过 6000 家庞大活跃客户群，全球各地的客户对公司服务的需求如汹涌的浪潮般持续增长。截至 2024 年 9 月底，公司在手订单高达 438.2 亿元，同比增长 35.2%，这一惊人的数字仿佛一座巍峨的山峰，彰显着药明康德在市场中的强大地位。二、收入增长与区域亮点，展现多元魅力公司 2024 年前三季度实现营业收入人民币 277.0 亿元，剔除特定商业化生产项目后，收入同比增长 4.6%。其中，来自全球前 20 大制药企业的收入达到人民币 112.2 亿元，剔除特定商业化生产项目同比增长 23.1%，犹如一颗璀璨的明珠，闪耀着药明康德与国际巨头合作的辉煌成果。从区域来看，药明康德在美国市场的表现可圈可点。来自美国客户的收入人民币 176.2 亿元，剔除特定商业化生产项目同比增长 7.6%，仿佛一条奔腾的河流，源源不断地为公司带来丰厚的收益。欧洲市场同样不甘示弱，收入人民币 35.3 亿元，同比增长 14.8%，恰似一朵盛开的鲜花，散发着迷人的魅力。然而，来自中国客户的收入人民币 51.6 亿元，同比下降 3.9%，以及来自其他地区客户收入人民币 14.0 亿元，同比下降 16.5%，但这并不影响药明康德整体的辉煌画卷，反而激励着公司在未来更加努力地开拓国内和其他地区市场。三、化学业务：创新引领，绽放光彩化学业务在 2024 年前三季度犹如一颗璀璨的明星，照亮了药明康德的发展之路。面对外部环境的挑战，第三季度收入人民币 78.8 亿元，同比增长 1.4%，剔除特定商业化生产项目后同比增长 26.4%；2024 年前三季度实现收入人民币 200.9 亿元，剔除特定商业化生产项目同比增长 10.4%。 1.⠥𐏥ˆ†子药物发现业务：引流下游，奠定基础小分子药物发现业务就像一位智慧的引路人，为下游持续引流。在过去的十二个月里，公司成功合成并交付超过 45 万个新化合物，同比增长 7%。这一数字如同繁星点点，展示着药明康德的强大研发实力。公司贯彻“跟随客户”和“跟随分子”战略，与全球客户建立了值得信赖的合作关系，为公司 CRDMO 业务持续增长奠定了坚实基础。R 到 D&M 转化分子数持续增长，仿佛一条不断延伸的道路，引领着公司走向更加辉煌的未来。 2.⠥𐏥ˆ†子工艺研发和生产业务：强劲发展，持续扩张小分子工艺研发和生产业务犹如一座坚固的堡垒，依然强劲。小分子 D&M 业务收入人民币 124.7 亿元，剔除特定商业化生产项目同比增长 7.0%。小分子 CDMO 管线持续扩张，2024 年前三季度，公司累计新增 915 个分子。截至 2024 年 9 月底，小分子 D&M 管线总数达到 3356 个，包括 68 个商业化项目，79 个临床 III 期项目，357 个临床 II 期项目，2852 个临床前和临床 I 期项目。其中，商业化和临床 III 期项目在 2024 年前三季度合计新增 20 个。2024 年 5 月，新加坡的研发及生产基地正式开工建设，基地一期计划于 2027 年投入运营，如同一个即将崛起的巨人，为公司的全球布局增添了强大的动力。 3.⠔IDES 业务：高速增长，未来可期 TIDES 业务（主要为寡核苷酸和多肽）就像一匹奔腾的骏马，保持着高速增长。2024 年前三季度 TIDES 业务收入达到人民币 35.5 亿元，同比强劲增长 71.0%；预计全年 TIDES 收入增长将超过 60%。截至 2024 年 9 月底，TIDES 在手订单同比增长 196%。TIDES D&M 服务客户数同比提升 20%，服务分子数量同比提升 22%。2024 年 1 月，多肽固相合成反应釜总体积增加至 32000L，并将于 2024 年底达到 41000L；2025 年产能将进一步增加。这一系列的数据如同绽放的烟花，绚丽多彩，预示着 TIDES 业务的光明未来。四、测试业务：优势凸显，助力出海测试业务在 2024 年前三季度如同一位可靠的伙伴，为公司的发展贡献着力量。实现收入人民币 46.2 亿元。 1.⠥ꌥˆ†析及测试服务：行业领先，持续发力实验室分析及测试服务收入人民币 32.6 亿元，虽然同比下降 7.9%，但第三季度收入环比增长 5.5%。药物安全性评价业务保持亚太行业领先地位，受市场影响，价格因素随着订单转化逐渐反映到收入上，2024 年前三季度收入同比下降 10.1%，但第三季度收入环比增长 10.1%。2024 年前三季度，启东和成都设施通过国家药品监督管理局（NMPA）和国际经济合作与发展组织（OECD）GLP 资质认证，苏州设施首次接受并顺利通过日本医药品医疗机器综合机构（PMDA）项目现场审计。公司新分子业务持续发力，不断完善新型疫苗类能力，核酸类、偶联类、mRNA 类市场份额进一步扩大。公司积极助力客户开展全球合作，服务超 70%2024 年前三季度成功出海的中国客户，如同一座坚实的桥梁，连接着中国医药企业与世界市场。 2.⠤𘴥𚊠CRO 及 SMO 业务：稳健增长，优势显著临床 CRO 及 SMO 业务收入人民币 13.6 亿元，同比增长 3.4%。其中，SMO 业务同比增长 16.0%，保持中国行业领先地位。2024 年前三季度，临床 CRO 业务助力客户获得 21 项临床试验批件，SMO 赋能客户 50 个新药产品获批上市。SMO 业务保持稳健增长，在心血管内科、眼科、风湿免疫、神经系统、内分泌、医美、罕见瘤种等诸多治疗领域持续保持显著优势，如同一位多才多艺的艺术家，在各个领域绽放光彩。五、生物学业务：创新布局，协同发展生物学业务在 2024 年前三季度如同一片生机勃勃的花园，充满着无限的活力。实现收入人民币 18.3 亿元。 1.⠦–𐥈†子种类相关业务：增长强劲，前景广阔公司着力建设新分子种类相关的生物学能力，新分子种类相关业务收入同比增长 6.0%，新分子收入占比为 28.5%。核酸类新分子平台服务客户数及项目数持续增加，已累计为超过 280 家客户提供服务，自 2021 年以来已成功交付超过 1300 个项目。这一成绩如同盛开的花朵，散发着迷人的芬芳，展示着公司在新分子领域的广阔前景。 2.⠤𝓥†…药理学平台整合：提升效率，扩大份额公司进一步整合体内药理学平台资源，持续提升平台交付能力和执行效率。同时，充分发挥体内、体外业务协同的一站式服务平台优势，在代谢类、心血管、神经生物学疾病领域市场份额进一步扩大，服务客户数同比增长超 50%。如同一位勤劳的园丁，精心培育着这片充满希望的土地。 3.⠧𛼥ˆ筛选平台打造：业务跃升，增长迅猛公司持续打造全面的综合筛选平台，相关收入增长 20.2%，其中多肽发现业务增长超 200%。这一增长如同火箭般迅猛，展示着公司在创新领域的强大动力。生物学业务作为公司下游业务的重要“流量入口”，在 2024 年前三季度为公司持续贡献超过 20%的新客户，如同一条源源不断的溪流，为公司注入了新的活力。六、高端治疗 CTDMO 业务：虽有挑战，未来可期高端治疗 CTDMO 业务在 2024 年前三季度如同一位勇敢的探险家，在挑战中前行。实现收入人民币 8.5 亿元。虽然目前商业化项目仍处于放量早期阶段，部分项目延迟或因客户原因取消，以及受美国拟议法案影响新签订单不足，但公司持续加强 CTDMO 服务平台建设。截至 2024 年 9 月底，为总计 59 个项目提供工艺开发、检测与生产服务，包括 2 个商业化项目，4 个临床 III 期项目（其中 1 个项目处于上市申请准备阶段），8 个临床 II 期项目，以及 45 个临床前和临床 I 期项目。其中，新增世界首个创新肿瘤淋巴细胞疗法（TIL）商业化项目。公司正在为一项商业化 CAR-T 产品的慢病毒载体（LVV）生产做 BLA 申报准备，已完成工艺验证（PPQ），同时已开始 PPQ 后的生产，预计将在 2024 年第四季度申报 FDA。另外，公司助力客户进行世界首例创新体内制造 CAR-T 疗法的临床试验，提供从质粒到病毒的工艺开发与 GMP 生产全流程服务。如同一位不屈不挠的战士，在困难面前毫不退缩，勇敢地迈向未来。七、展望未来，辉煌继续药明康德在 2024 年前三季度的辉煌成就，离不开其强大的国际营销阵容和强劲的研发实力。药明康德就像一艘巨轮，在医药领域的海洋中乘风破浪，勇往直前。相信在未来的日子里，药明康德将凭借其丰富的国际经验和卓越的创新能力，继续创造更加美好的未来。它将不断开拓新的市场，研发新的技术，为全球医药事业的发展贡献更多的力量。让我们共同期待药明康德在未来的精彩表现，见证它在医药领域的璀璨光芒继续闪耀。

基因疗法第一网红，翻盘越来越难了

启动子：基因表达的关键启动子是一个非常重要的概念，它涉及到基因表达的关键步骤。简单来说，启动子是一个RNA聚合酶的结合位点，位于目标基因的上游，大约有100到1000个碱基对长。这个区域的控制序列决定了RNA聚合酶和转录因子的结合，从而决定了基因在何时何地表达。 RNA聚合酶的多样性 𐟌𑊊在细菌中，RNA聚合酶（RNAP）负责从DNA转录出RNA。然而，真核生物的RNAP更为复杂，有多个不同的RNAP，每个负责特定的RNA子集。为了获得这种特异性，真核生物的RNAP可以识别并与特定的启动子元件结合。不同类型的启动子 𐟔 这意味着，你质粒骨架中存在的启动子必须与需要制造的RNA类型兼容。例如，如果你想要mRNA（用于基因表达），你需要使用RNAP II启动子；而小RNA（如shRNA）则由RNAP III启动子转录。病毒载体中的启动子 𐟦 此外，病毒性LTR（长末端重复序列）如RNAP II启动子通常被用于慢病毒和逆转录病毒构建。这些启动子将在病毒载体一章中详细讨论。总的来说，启动子在基因表达中起着至关重要的作用，了解它们的工作原理和类型对于分子生物学研究和应用至关重要。

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