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EMSA最新视觉报道_emsa实验结果图怎么看(2024年12月全程跟踪)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：热点更新日期：2024-11-28

EMSA

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EMSA实验全攻略：从交联到检测 𐟧ꠤ𚤨”步骤：使用紫外交联仪，选择254nm紫外波长，120mJ/cmⲯ𜌤𚤨”45-60秒。如果没有紫外交联仪，可以用普通手提式紫外灯，距离膜5-10厘米照射3-10分钟。或者使用超净工作台内的紫外灯，距离膜5-10厘米照射3-15分钟。最佳的交联时间可以通过标准品自行摸索。交联完毕后，可以直接进行下一步检测；也可以用保鲜膜包裹后在室温干燥处存放3-5天，然后再进行下一步检测。如果检测结果发现交联效果不佳，甚至连free probe的条带都非常微弱，可以考虑在膜干燥后参考上述条件再交联一次，以进一步改善交联效果。 𐟒ᠥŒ–学发光法检测生物素标记的探针：将封闭液和洗涤液在37-50℃水浴中溶解。取15ml封闭液加入合适的容器中，再放入交联过的含有样品的尼龙膜。在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动15分钟。取7.5 Streptavidin-HRP Conjugate加入到15ml封闭液中(1:2000稀释)，混匀备用。去除用于尼龙膜封闭的封闭液，加入上一步中配制的15ml含有Streptavidin-HRP Conjugate的封闭液。在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动15分钟。取15ml洗涤液(5X)，加入60ml重蒸水或Milli-Q级纯水，混匀配制成75ml洗涤液。将尼龙膜转移至另一装有15ml洗涤液的容器内，漂洗1分钟。去除洗涤液，加入15ml洗涤液，在侧摆摇床或水平摇床缓慢上洗涤5分钟。重复上一步骤三次（共洗涤四次），每次洗涤时间都约为5分钟。将尼龙膜转移至另一装有20ml检测平衡液的容器内，在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动5分钟。取2.5ml BeyoECL Moon A液和2.5ml BeyoECL Moon B液混匀，配制成BeyoECL Moon工作液。取出尼龙膜，用吸水纸吸去过多液体。立即将膜的样品面向上，放置到处于水平桌面上的洁净容器内或保鲜膜上。在尼龙膜的表面小心加上步骤J配制好的共5ml BeyoECL Moon工作液，使工作液完全覆盖尼龙膜。室温放置2-3分钟。取出尼龙膜，进行显影观察结果。

互作机制研究方案 CoIP-Mass⠠⠠⠠⠠（ IgG-IP vs Ab-IP ） CoIP-WB⠠⠠⠠⠠⠠⠯𜈠1个候选蛋白检测） Pulldown-Mass⠠⠯𜈠对照和目的蛋白） Pulldown-WB⠠⠠⠯𜈠1个候选蛋白检测） HuProt蛋白组芯片检测⠠⠠⠯𜈠20K+蛋白互作检测） RIP-seq⠠⠠⠠⠯𜈠Input vs Ab-IP ） RIP-qPCR⠠⠯𜈠1个候选RNA检测） ChIP-Seq⠠⠠⠯𜈠Input vs Ab-IP ） ChIP-qPCR⠠（ 1个候选DNA检测） EMSA⠠⠠⠠⠠⠠⠯𜈠蛋白和DNA检测） ChIRP-Mass （ Target vs LacZ Probe ） ChIRP-Seq⠠⠯𜈠Target vs LacZ Probe ）以上如有相关问题，欢迎来询。 #科研#⠣实验外包#⠣研究生#

EMSA实验常见问题及解决方法 𐟅𞯸 探针标记效率低问题描述：探针标记效率低会导致实验信号微弱，难以检测。 𐟉 解决方案：优化标记条件，如调整反应时间、温度和pH值，以提高标记效率。尝试不同的标记方法和试剂，找到最佳条件。标记后，使用凝胶电泳或荧光光谱仪检测标记效率。 𐟅𞯸 样品处理不当问题描述：样品处理不当可能减弱或消除蛋白质与核酸的结合信号，或产生非特异背景信号。 𐟉 解决方案：仔细阅读并遵循实验指南，确保按正确步骤处理样品。使用适当的缓冲液和条件稀释和准备样品，确保蛋白质与核酸形成稳定复合体。处理样品时，特别注意防止降解或污染。 𐟅𞯸 背景信号干扰问题描述：背景信号可能掩盖真实的蛋白质与核酸结合信号，影响结果解释。 𐟉 解决方案：进行对照实验，如不加荧光标记物或蛋白质的对照，评估背景信号水平。使用特异性更高的探针或抗体，减少非特异性结合产生的背景信号。分析数据时，设置合适阈值，区分真实信号和背景信号。 𐟅𞯸 凝胶浓度选择不当问题描述：凝胶浓度影响蛋白质与核酸结合的分辨率和灵敏度。浓度过低可能难以分辨结合信号，浓度过高可能导致蛋白质移动时受阻。 𐟉 解决方案：进行预实验，尝试不同凝胶浓度，找到最佳浓度。参考已发表文献或数据库信息，了解类似实验中使用的凝胶浓度。条件允许时，使用梯度凝胶电泳，观察不同浓度凝胶对结合的影响。 𐟅𞯸 非特异性结合问题描述：非特异性结合可能导致背景信号高，干扰特异性结合的判断。 𐟉 解决方案：使用特异性更高的探针或抗体，减少非特异性结合。加入竞争剂（如过量的未标记探针或无关蛋白），评估非特异性结合程度。分析数据时，注意区分特异性结合信号和非特异性结合信号。

保温杯选购指南：价格越高越好吗？我平时用的保温杯还真不少，毕竟包包大，出门总是随身带一杯热水♨️。以下大部分是我用过的，也有一些没试过的，仅供参考哦～不喝温水/热水？那你可能不需要保温杯膳魔师 𐟒𐳰0+：价格确实贵，但重量轻，质量也不错，配色多，logo设计有档次，杯形也好看。不过性价比有点低，毕竟价格摆在那儿。象印 𐟒𐳰0+：价格同样不便宜，但重量轻，质量好，配色多。不过logo有点土气，总体性价比一般。虎牌 𐟒𐲰0—500：价格跨度大，重量轻，质量好，配色多。不过弹盖杯的银色杯扣有掉漆现象，这点要注意。星巴克 𐟒𐳰0+：性价比低，外形骚气，质量一般。我一直觉得星巴克有点low，不过这见仁见智吧。乐扣乐扣 𐟒𐱰0+：价格合理，重量轻，质量不错，配色多。珠光表面的质感一般，logo有点土气，推荐纯白色，质感最佳。孔雀 𐟒𐱰0+：价格合理，重量轻，质量不错，配色也不错。 akaw 𐟒𐱰0+：价格合理，重量轻，质量不错，和膳魔师一样的脖子设计，纯黑磨砂质感好。爱慕莎emsa 𐟒𐱰0+：样式有点老气，但价格还可以。 swell 𐟒𐳰0+：网红杯，街拍杯，外形经典耐看。不过我对网红一向无感，而且这个杯子重量重，表面有大理石纹、木纹等选择，但这些纹理都有接缝，这么贵的杯子不立体喷涂实在掉价。做工上没什么短板。 mosh！ 𐟒𐱵0+：小众的日本杯子，杯形类似牛奶瓶，很少女。重量比大牌的略重，个人觉得马卡龙色系的漆面更加饱满，适合女孩子用。 Kinto travel保温杯 𐟒𐲰0+：小众杯子，高级的北欧低纯度色系，有特点的瓶形，容量略小。外观挺惊艳。除了不锈钢本色以外的颜色都比较高级，不锈钢本色有点违和，塑料件做工一般。大家选购时不要贪贵和好看就入手，要选择最实用的、符合自己生活习惯的！

卧室缺啥？爱慕莎保温壶！说到暖水瓶，很多人可能会觉得现在有了饮水机、烧水壶等各种电器，暖水瓶已经没用了。确实，这些现代化的设备确实方便了很多。但冬天的时候，我还是喜欢在卧室里放一把保温壶。被窝里暖暖和和的，谁也不想起床去客厅喝水。今年冬天，我入手了一把Emsa爱慕莎的保温壶。红色的外观非常时尚，放在卧室里特别漂亮。这个保温壶的内胆是纯手工制作的，双层镀银设计，保温效果非常强大。这款保温壶的手柄设计也很贴心，采用人体工学设计，握起来非常舒服，不会硌手。壶嘴是企鹅仿生设计，一键式出水，出水流畅，晚上倒水也不怕，不会滴得到处都是。它的保温时效长达24个小时，对于北方冬天来说，暖气很足，经常半夜口渴醒来。有了它，半夜起来倒水方便多了，不会因为一杯水放凉了而烦恼。续上半杯热水，喝完继续睡，真是美美哒～

YETI保温瓶：一瓶两用，通勤办公两相宜作为一个咖啡爱好者和通勤族，找到一款既保温又方便携带的杯子对我来说非常重要。YETI的产品无疑是市场上品质和口碑都极佳的选择之一。YETI拥有保温瓶和随行杯两个主要系列产品，它们各自有不同的设计和用途。然而，这两个系列的杯盖并不能互换使用，显然是为了避免内部竞争。这种设计上的区隔无疑带来了一些不便，但如果换个思路，YETI保温瓶其实可以实现一杯两用的功能。我选择了YETI的12oz保温瓶。在通勤路上，我使用原装的瓶盖，它的防漏水设计让我可以安心地将它放进包里，不必担心液体泄漏弄湿文件和电子设备。YETI的原装瓶盖确实在防漏水方面表现出色，这一点在忙碌的早晨尤为重要。到了办公室里，我会拿下笨重的原装盖子，换上轻便的兼容杯盖，这样保温瓶就可以摇身一变成为随行杯。通过这样的转换，不仅提高了使用的便利性，还让保温瓶在不同场景下都有了更好的适应性。为了实现这个转换，我尝试了几个不同品牌的兼容杯盖。首先，我发现了EMSA的超薄杯盖，这款杯盖非常轻便，适合在办公室使用。然而，EMSA的杯盖在防漏水方面表现并不理想。同样地，Hydro的杯盖也存在漏水的问题。我找到了一款兼容膳魔师的杯盖。虽然目前只有内直径8厘米和7.4厘米的产品，但它在防漏水方面的表现无可挑剔。这个杯盖不仅解决了漏水问题，还保持了不错的便携性和使用方便性。如果后续市场上能够推出内径6厘米且完全防漏水的盖子，我会考虑购买一个来进一步优化我的YETI保温瓶的使用体验。通过这样的尝试，我发现原本需要两个杯子来应对不同场景的需求，现在只需要一个YETI保温瓶加上兼容的杯盖就能解决。这样的使用方式不仅节省了成本，还减少了日常携带的物品数量。YETI保温瓶在保持原有优异性能的基础上，通过更换不同的杯盖实现了一杯两用的功能，这无疑为我的日常生活带来了极大的便利。

EMSA实验揭秘：凝胶迁移 𐟌 凝胶电泳：在开始EMSA实验之前，首先需要制备6.5%的凝胶。与常规的凝胶电泳不同，EMSA实验无需分离胶和浓缩胶。在加入10%的过硫酸铵（AP）之前，确保凝胶在室温下静置10分钟以去除气泡。然后，加入10%的AP并混匀，灌胶。 𐟔砩℧”𕦳𓯼š 在加样电泳之前，进行预电泳以去除残余的杂质。使用预冷的0.5㗔BE缓冲液，以100V恒压电泳30-60分钟。预电泳过程中，用移液器反复冲洗上样孔3-5次。 𐟧ꠥˆ𖦠𗯼š 根据表格中的mix配方，配置反应体系。由于样品数量较多，建议使用mix混合液以减少加样误差并节省操作时间。将配置好的反应体系分装到标记好的PCR管中，依次加入双蒸水、核蛋白和生物素标记的探针，室温孵育10分钟。 𐟚€ 上样：孵育结束后，加入5的Loading Buffer，轻轻吹打混匀，准备上样。在电泳结束前，配置好0.5㗔BE电转移缓冲液并放置于冰箱预冷。将样品加载到样品孔中，以100V恒压低温条件下电泳45分钟，至指示剂到达胶的2/3处。 𐟌 转膜：电泳结束后，小心地从电泳装置中移走一片玻璃片，去掉样品孔的凝胶。将凝胶与另一片玻璃一起移入装有0.5㗔BE的盒子中，让凝胶与玻璃板分离并漂浮在缓冲液中。 𐟔砦𕸦𓡤𘎨𝬥𐯼š 将尼龙膜、同胶一样大小的厚滤纸及海绵垫在0.5㗔BE中浸泡10分钟。在转印夹的黑色面板中心依次放置海绵垫、至少3层印迹滤纸、转印膜、胶和至少3层滤纸。用玻璃试管在滤纸上轻轻滚动，以驱赶气泡。 𐟔頤𚤨”：将装配好的电转移夹放入电转移槽中，在0.5㗔BE中以100V恒压转45分钟。转膜结束后，将膜放置于干净滤纸上，膜正面朝上，放置在紫外灯下10厘米处，交联20分钟，交联前保持膜湿润。

如何快速发表文章？研究生必看！ ✅ 一入研究生的大门，就赶紧去实验室吧！早点上手，培养细胞、提取质粒、跑电泳、做Western，练好基本功，了解导师的研究方向，选择你感兴趣的小方向。就像“熟读唐诗300首，不会做诗也会吟”，趁着有空，赶紧看文献吧。 ✅ 实验平台非常重要，重要的事情说三遍！好的实验平台是什么？有水平的导师和良好的科研氛围，有好的动物实验室，有大量的基础实验工具，有先进的实验方法以及一脉相传的实验经验，当然齐全的仪器设备也不能少。好的实验室能帮你节省大量时间，让你有更多时间去创新。在你实验遇到问题时，有水平的导师能及时帮你找到失败原因。比如你想验证NFKB的活性，实验室有NFKB相关质粒，师兄师姐有做EMSA的经验，实验分分钟搞定，结果还特漂亮。若没有，你得写邮件求质粒或自己构建，费时费力。那么你选对平台了吗？ ✅ 开始实验时不要把鸡蛋放在一个篮筐里，研究两个小方向，两手都要硬，根据研究进展再调整侧重。 ✅ 奋斗！奋斗！奋斗！要想尽快出文章，8小时工作制就是奢侈品！ ✅ 青年研究学者（有基金，但有大量教学、医疗工作）没时间、没学生怎么办？生物公司现在如雨后春笋，既然当小Boss了，有些东西就花钱吧，如包装病毒，雇人做些基础实验，外包实验（不过要找个靠谱的，现在审计严格着呢！）。

EMSA实验：GST/His-a融合蛋白的表达 GST/His-a融合蛋白的表达 (1)将目的蛋白与GST/His的重组质粒转化到BL21菌株中； (2)挑取单克隆到含有5 ml LB培养基（加入5 氨苄）的10 ml试管里，37℃恒温振荡培养箱中培养过夜； (3)将培养菌液转移到含有500 ml LB（含500 氨苄）的1L锥形瓶中，37℃，200 rpm培养数小时； (4)测定OD600值，当OD600达到0.6左右时，加入适当浓度的IPTG，在20℃，200rpm条件下培养10-16 h（通常需要进行预实验以确定最佳IPTG浓度、诱导温度和时间）； (5)诱导适当时间后，将菌液分次倒入50 ml离心管中，4℃ 4000 rpm离心10分钟，然后弃去上清，收集管底菌体，如暂时不用，可将菌体保存于-80℃冰箱中； (6)先加入少量PBS于离心管中，离心5-10 min后弃去上清，再按每10 ml菌液沉淀1 ml PBS的量加入相应的PBS，涡旋振荡，使菌体沉淀充分溶解于PBS溶液中； (7)把混合菌体置于冰水浴中，用超声仪进行破碎。每次超声破碎20 s，间隔30 s（破碎时间、破碎次数和间隔时间视具体情况而定），经过适当时间超声后，溶液会显得澄清； (8)将超声后的溶液4℃ 4000 rpm离心10分钟，上清液转移至新的离心管中，-80℃保存备用。凝胶迁移（ EMSA ）实验技术方法步骤已分享，如有相关科研问题，欢迎留言探讨。 #研究生日常#⠂ #EMSA#⠂ #凝胶迁移实验#⠂ #蛋白表达#⠂ #实验外包#

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