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磷酸缓冲液的配制新上映_磷酸缓冲液的配制方法国标(2024年12月抢先看)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：导读更新日期：2024-11-29

磷酸缓冲液的配制

PBS缓冲液怎么选？一文搞懂各种类型大家好！今天我们来聊聊生物化学实验中常用的PBS缓冲液。𐟧슊首先，PBS有多种类型，主要区别在于磷酸盐浓度和是否含有钾离子。以下是一些常见的PBS类型： 𐟌Ÿ 1㗐BS（G4202）（0.01M磷酸盐，无菌）：经过0.1 过滤除菌，适用于组织或细胞的洗涤、其他试剂的配制以及细胞实验的稀释液等。对于大部分客户来说，G4202可以满足使用要求。但是，如果需要较长时间孵育，G4250（0.0067M磷酸盐，无菌）表现会更好一些。 𐟌Ÿ PBS（G4250）（0.0067M磷酸盐，无菌）：适用于一些生物化学研究，作为常用溶剂。对于少部分细胞，短时孵育的情况下，G4250优于G4202。 𐟌Ÿ PBS（G2156）（0.01M磷酸盐，不含钾离子）：可用于清洗样本、配制试剂等，以及ELISA、WB、IHC、IF等免疫相关实验中的漂洗操作。适用于一些对磷酸盐浓度有特定要求且不需要钾离子参与的实验。 𐟔 此外，对于大部分WB蛋白指标来说，PBST和TBST是可以通用的。但在检测磷酸化蛋白时，PBST可能会有点小麻烦。一方面，磷酸盐会干扰碱性磷酸酶结合的抗体，还会增加磷酸特异性抗体的背景信号（不过对HRP标记的抗体没影响）；另一方面，磷酸化特异性抗体可能会和PBST中的磷酸盐结合，导致检测到的信号降低。就像有时候抗体孵育缓冲液从TBST改成PBST，可能条带就会变浅甚至消失（在其他条件都不变的情况下）。因此，在选择缓冲液时，大家要根据具体情况仔细考虑哦。𐟒က

细胞培养与免疫荧光染色全攻略一、细胞接种 𐟧슥œ覗菌条件下，打开Slide I biTreat的包装，并将其放在Slide滑架上。使用移液枪向通道中加入100  3㗱0^5 cells/mL Rat1细胞悬液。用提供的盖子轻轻盖住储液池，但不要完全密闭。将滑架放入培养箱中培养（37℃；5% CO2）60分钟，使细胞贴壁。然后向两个储液池中每池加入0.5 mL的无细胞培养基。孵育过夜。二、细胞固定 𐟔犤𝿧”觧𛦶𒦞ꥐ𘥎𛥂覶𒦱 中的全部培养基。用1 mL杜氏磷酸盐缓冲液缓慢加入一个空储液池中，并从另一个储液池中吸出，不要一次性吸去整个通道中的液体。用同样的方法加入约200 的3.7%多聚甲醛（用磷酸盐缓冲液配制）以固定细胞。从通道的另一侧吸去储液池中的内容物，等待10分钟。三、破膜与封闭 𐟛᯸ 按照步骤5所述，用1 mL磷酸盐缓冲液再次洗涤细胞。用约200  0.1% Triton X-100破膜液（用磷酸盐缓冲液配制）处理细胞3-5分钟。用磷酸盐缓冲液洗涤细胞。用约200  1% BSA封闭液（用磷酸盐缓冲液配制）处理细胞20分钟。用适量磷酸盐缓冲液洗涤细胞。四、染色与封片 𐟎芥𘥎𛩀š道中的所有液体，不要使通道干燥。使用100  Alexa Fluor 488鬼笔环肽（1 U鬼笔环肽+ 500 磷酸盐缓冲液+1% BSA封闭液，购自Invitrogen公司）并在室温下培养20分钟。用磷酸盐缓冲液洗涤细胞并清空通道。使用100  DAPI（0.1 /mL，购自Sigma-Aldrich公司）染色3-5分钟。用磷酸盐缓冲液洗涤细胞，并去除所有液体。使用滴管瓶在储液池中注入100  ibidi封片剂。用随附的盖子密闭储液池。在荧光显微镜下用适当的滤光片组观察细胞。

李记10X无菌PBS，细胞培养优选今天为大家介绍的是李记生物的10X无菌PBS产品！ 𐟔 产品简介 10X无菌PBS（磷酸盐缓冲液），是一种广泛用于生物学和生物化学研究的平衡盐溶液。通过稀释至1X PBS，它可用于组织块的洗涤、细胞的漂洗、其他试剂的配制以及作为细胞计数的替代液等。本产品经过0.1过滤除菌，可直接用于细胞培养。 𐟚š 运输与保存该产品常温运输，常温保存，有效期为18个月。李记生物的10X无菌PBS，为您的细胞培养实验提供稳定可靠的实验环境。

细胞培养与免疫荧光染色全攻略 ### 一、细胞接种 𐟧슥œ覗菌条件下，打开Slide I biTreat的包装，并将其放在Slide滑架上。用移液枪向通道中加入100 的3㗱0^5 cells/mL Rat1细胞悬液。用提供的盖子轻轻盖住储液池，但不要完全密闭。将滑架放入培养箱中培养（37℃；5% CO2）60分钟，让细胞贴壁。然后向两个储液池中每池加入0.5 mL的无细胞培养基。孵育过夜。二、细胞固定 𐟔犤𝿧”觧𛦶𒦞ꥐ𘥎𛥂覶𒦱 中的全部培养基。用1 mL的杜氏磷酸盐缓冲液（Dulbecco’s PBS）清洗细胞，方法是将1 mL PBS缓慢加入一个空储液池中，并从另一个储液池中吸出。不要一次性吸去整个通道中的液体。用同样的方法加入约200 的3.7%多聚甲醛（用磷酸盐缓冲液配制）以固定细胞。从通道的另一侧吸去储液池中的内容物，等待10分钟。三、破膜与封闭 𐟛᯸ 按照步骤5所述，用1 mL磷酸盐缓冲液再次洗涤细胞。用约200 的0.1% Triton X-100破膜液（用磷酸盐缓冲液配制）处理细胞3-5分钟。用磷酸盐缓冲液洗涤细胞。用约200 的1% BSA封闭液（用磷酸盐缓冲液配制）处理细胞20分钟。用适量磷酸盐缓冲液洗涤细胞。四、染色与封片 𐟎芥𘥎𛩀š道中的所有液体。从通道中吸去液体后，不要使通道干燥。使用100 的Alexa Fluor 488鬼笔环肽（1 U鬼笔环肽+ 500 磷酸盐缓冲液+1% BSA封闭液，购自Invitrogen公司），并在室温下培养20分钟。用磷酸盐缓冲液洗涤细胞并清空通道。使用100 的DAPI（0.1 /mL，购自Sigma-Aldrich公司）染色3-5分钟。用磷酸盐缓冲液洗涤细胞，并去除所有液体。使用滴管瓶在储液池中注入100  ibidi封片剂。用随附的盖子密闭储液池。在荧光显微镜下用适当的滤光片组观察细胞。

如何选择合适的组织固定液？(三) 在生物学研究中，选择合适的组织固定液至关重要。以下是几种常用的混合型固定液，帮助你更好地固定和保存组织样本。 1️⃣ 10% 中性缓冲福尔马林 𐟌🊨🙦˜露€种以pH值7.2~7.4的磷酸盐缓冲液为溶剂配制的甲醛水溶液。它对组织抗原性的保存效果优于普通福尔马林，是人体和实验动物组织常用的固定液。此外，它还能显著增加对铁离子的检出速度，并避免福尔马林色素的形成。配制方法：将100ml甲醛与90ml蒸馏水混合，加入4g单水磷酸二氢钠和6.5g磷酸氢二钠，用1mol/L NaOH调整pH值至7.0~7.2。 2️⃣ 卡诺氏液（Carnoy）𐟌Š 这种固定液能防止乙醇硬化和收缩，渗透力强，能很好地固定细胞质和染色质，显示DNA和RNA效果好。特别适合固定外膜致密的组织，同时能溶解大部分脂肪。配制方法：将10ml冰乙酸、30ml三氯甲烷与60ml 100%乙醇混合。 3️⃣ 乙醇-甲醛液（A-F液）𐟍𗊨🙧獥›𚥮š液具有固定兼脱水的作用，样本固定后可直接用95%乙醇脱水。配制方法：将90ml 100%乙醇或95%乙醇与10ml 36%~38%甲醛溶液混合。 4️⃣ 4% 多聚甲醛 𐟌𐊨🙧獥›𚥮š液适用于光镜免疫组织化学方法。动物先用此液进行灌注固定，取材后，再用该液浸泡固定2~24小时。该液也可用于组织样本较长时间的保存。配制方法：将40g多聚甲醛溶于1000ml 0.1mol/L的PBS，加热至60℃，边搅拌边加温至透明即可（一般滴加少量1mol/L的NaOH）。选择合适的固定液可以确保你的研究数据准确可靠，希望这些信息对你有所帮助！

TBST和PBST的区别及配制方法 𐟧ꥮž验室小白的笔记 TBST和PBST的区别 TBST是TBS加Tween-20的缩写，而PBST则是PBS加Tween-20。两者的区别主要在于pH值和用途。 1. pH值变化：TBST的pH值随温度变化较大，而PBST容易有沉淀。如果需要反复使用抗体，建议使用TBST，因为它更稳定。洗液效果：两种洗液在洗脱蛋白时效果相似，都能提供稳定的pH环境，并有助于蛋白的洗脱。PBST是基于磷酸盐缓冲液，而TBST是基于Tris缓冲液。 TBS缓冲液 TBS缓冲液是生物学中常用的等渗缓冲盐溶液，主要用于免疫组化、原位杂交和酶联免疫等实验中，清洗免疫印迹实验中非特异性结合的抗体等。它的配方（1X浓度）包括：1L的10X PBS缓冲液（1.37 M NaCl, 27 mM KCl, 100 mM Tris, pH 7.4），加入0.1%的Tween-20（1 mL/L PBS），再补足至1L以获得最终浓度。配置步骤如下：首先，用蒸馏水稀释10X PBS至1X，再加入Tween-20，混合均匀后过滤或离心去杂质。最后，分装到无菌瓶中，存放在4℃的阴凉处，避免反复冻融。 PBS缓冲液 PBS缓冲液是指磷酸缓冲液（Phosphate Buffer Solution），渗透压近似于生理条件又有很强的pH缓冲能力，常用来洗细胞（不易涨裂）和作为细胞培养的基础液（pH缓冲）。它的配方为10X PBS（1.37 M NaCl, 27 mM KCl, 100 mM Na2HPO4, 18 mM KH2PO4, pH 7.4），稀释至1X后加入0.1% Tween-20。与TBST相似，配制后过滤，分装并保存在适宜条件下。总结 TBST和PBST在实验室中都有广泛的应用，但它们在pH值和用途上有所不同。选择哪种洗液取决于你的具体实验需求。希望这些信息对你有所帮助！

CRISPR-sgRNA文库构建全攻略𐟔슰ŸŒˆ 实验目的掌握CRISPR-sgRNA文库构建的原理和操作步骤。构建针对特定基因的sgRNA文库，用于基因编辑研究。 𐟧ꠥꌦ料试剂𐟧ꊧ𛆨Œ感受态细胞（如DH5a） pUC57载体模板DNA 引物 dNTPs Taq酶 T4DNA连接酶限制性内切酶（如BsmBl或BbsI）琼脂糖磷酸缓冲液 70%乙醇无菌水仪器𐟔슐CR仪器琼脂糖凝胶成像系统微量移液器离心机恒温培养箱净化工作台 𐟓 实验步骤设计sgRNA序列𐟓 依据目标基因设计特异性sgRNA序列，避免脱靶。合成sgRNA模板𐟖‹️ 配制PCR反应体系：模板DNA：10 ng 引物：10 pmol/L dNTPs：0.2 mM Taq酶：1U 磷酸缓冲液：5 无菌水补足至50 进行PCR反应： 95℃预变性5 min 95℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min，共30个循环 72℃延伸10 min 琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物𐟔슥‡†备1.5%琼脂糖凝胶。与DNA marker一起电泳。观察确认产物大小正确。切割载体✂️ 用限制性内切酶切割pUC57载体。琼脂糖凝胶电泳检测切割效果。连接sgRNA模板与载体𐟔— 将PCR产物与切割后的载体进行T4 DNA连接。 16℃过夜连接。转化感受态细胞𐟦 连接产物与感受态细胞混合，冰浴30 min。 42℃热激90 s。冰浴2 min。加入适量LB培养基，37℃培养1 h。筛选阳性克隆𐟔 挑取单个菌落进行PCR验证。确认阳性克隆后提取质粒。测序验证𐟔⊦取的质粒测序验证sgRNA序列是否正确。 ⚠️ 实验注意事项保持无菌环境防止污染。 PCR防止引物二聚体产生。内切酶切割载体确保完全切割。转化感受态细胞注意热激时间控制。

𐟔扫描电镜操作全攻略 𐟓Œ取材固定： 1️⃣ 确定新鲜组织取材部位，迅速在1-3分钟内取样，确保组织块面积不超过3mmⲣ€‚ 2️⃣ 用PBS轻轻漂洗，去除样本表面杂质，并保护好需要扫描的面。 3️⃣ 投入电镜固定液，室温固定2小时后，转移至4Ⰳ保存。 𐟓Œ后固定与脱水： 1️⃣ 用0.1M磷酸缓冲液PB（PH7.4）漂洗样品3次，每次15分钟。 2️⃣ 配制1%锇酸，室温避光固定1-2小时后，再次用PB漂洗3次。 3️⃣ 依次将组织放入30%-100%酒精中脱水，每次15分钟，最后乙酸异戊酯处理15分钟。 𐟓Œ干燥与导电处理： 1️⃣ 将样本放入临界点干燥仪内进行干燥处理。 2️⃣ 将样本紧贴于导电碳膜双面胶上，放入离子溅射仪样品台上喷金30秒左右。 𐟓Œ最后一步：在扫描电子显微镜下观察处理后的样本，记录并分析结果。

实验室缓冲液大揭秘！嘿，大家好！今天咱们来聊聊那些在实验室里让人傻傻分不清的缓冲液：TBS、TBST、PBS、PBST。相信很多小伙伴都有过这样的困惑吧？别担心，看完这篇文章，你一定能搞清楚它们的区别！ TBS（Tris缓冲盐水） 𐟌€ 首先，咱们来说说TBS。TBS其实就是Tris-HCl缓冲盐溶液的简称。它主要由Tris和NaCl组成。Tris提供缓冲能力，能保持溶液在弱碱性环境下稳定；而NaCl则负责调节渗透压，让它接近生理条件。TBS在免疫测定、免疫组织化学染色、原位杂交、Western blot等实验中可是个大明星，广泛用作洗涤缓冲液或抗体稀释剂。配方也很简单：每1000ml需要6.05克Tris base和85.0克NaCl，用HCl调整pH值到7.4-7.6。 PBS（磷酸盐缓冲液） 𐟌🊦Ž夸‹来是PBS。PBS是一种以磷酸盐为主要成分的缓冲溶液，主要用于维持生物样品或实验体系中的pH稳定和渗透压平衡。它的主要成分包括KH2PO4、Na2HPO4、NaCl，有时候还会加点KCl。PBS的pH值相对稳定，常用于细胞实验、免疫染色等作为缓冲液或者洗涤液。配方也很直观：每1000ml需要1.42克NaH2PO4、8.77克Na2HPO4和90.0克NaCl，用NaOH调整pH值到7.2-7.4。 TBST（含Tween 20的Tris缓冲盐水） 𐟧𔊧„𖥐Ž是TBST。TBST是在TBS的基础上添加了Tween 20这一成分而得到的缓冲溶液。Tween 20是一种非离子型表面活性剂，能增强洗涤效果。它在Western blot实验中特别有用，能去除非特异性结合的抗体。配方和TBS差不多，只是多加了一毫升Tween 20。 PBST（含Tween 20的磷酸盐缓冲液） 𐟌𜊦œ€后是PBST。PBST是在PBS的基础上添加了Tween-20而得到的混合溶液。它在生物化学实验中的洗涤步骤中非常有用，能去除未结合的试剂，降低背景噪声，提高实验结果的信噪比。配方也很简单：每1000ml PBS加上一毫升Tween-20。总结 𐟓 总的来说，这些缓冲液在生物化学实验中都有各自的作用，但它们都含有维持溶液等渗的NaCl成分。希望这篇文章能帮你搞清楚它们的区别，下次再也不怕搞混啦！如果你还有什么疑问，欢迎在评论区留言哦！𐟘Š

体积排阻蛋白分析常见问题解答（一） 𐟌€ 很多朋友都在问关于体积排阻色谱（SEC）蛋白分析的一些常见问题，今天我就来给大家详细解答一下。第一期包括3个常见问题，详细内容请看图： 𐟌Ÿ 常用的紫外检测波长是多少？在体积排阻蛋白分析中，常用的紫外检测波长是28nm，这个波长位于近紫外区。吸收值主要取决于酪氨酸和色氨酸的含量，并一定程度上受酸性和二硫键的影响。 𐟌Ÿ 流动相的选择有哪些注意事项？流动相的选择对于体积排阻色谱（SEC）非常重要。常见的是用于蛋白质聚集体的分析，需要保持分析物的天然状态。流动相缓冲液的盐浓度应适中，一般在10-50mM之间。方法开发时，可以从20mM的磷酸盐缓冲液（pH 6.8）开始，根据情况进行优化调整。对于疏水蛋白，可以加入5-1%的有机溶剂，如甲醇、乙腈、异丙醇等。对于易于离子化的蛋白，则需要提高流动相的缓冲盐浓度以获得最佳的色谱结果，可以选用2倍浓度的磷酸盐缓冲液，含300mM磷酸和300mM氯化钠，pH 7.8，以减少次级作用。 𐟌Ÿ 叠氮化钠能否用于清洁微生物污染？叠氮化钠可以作为添加剂预防细菌等微生物的生长，但无法有效去除存在的微生物污染。如果系统被微生物污染，需要先用水冲洗以除去色谱柱中的缓冲液，再用较高有机物含量的混合液（如50%的乙腈/水）冲洗整个系统。另外，保护柱或在线过滤器也可能被堵塞，需进行清洁或更换。希望这些解答能帮到大家！如果有更多问题，欢迎留言讨论哦！𐟒쀀