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蛋白提取试剂盒在线播放_植物蛋白提取试剂盒(2024年12月免费观看)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：导读更新日期：2024-12-03

蛋白提取试剂盒

本次使用全自动样品快速研磨仪对小鼠软骨进行预处理，对骨关节炎发病机制进行探究。用研磨仪进行预处理相比于传统研磨具有： 1、效率高 - 能够在短时间内完成软骨样本的研磨，相比传统手工研磨，它的研磨速度更快。 2、精细度高 - 可以将软骨研磨成非常细腻、均匀的状态，有利于后续的实验分析，均匀的样本可以保证实验结果更准确。 3、零污染 - 可使用一次性研磨管，样品不会受到外界污染。 4、具有可重复性 - 可以保存研磨参数，相同的参数能够得到相似的结果，有助于科学研究结果的验证和推广。实验材料患病小鼠、蛋白质提取试剂盒、研磨管、适配器、研磨珠等实验步骤 1、解剖小鼠，取出软骨。 2、将样品放入研磨管中，加入提取试剂，加入研磨珠。 3、装入样品的研磨管和适配器一起放入-80度冰箱预冷。 4、预冷后，放入仪器，设置好研磨参数。3mm钢珠5颗，70Hz研磨120秒。 5、研磨结束后取出研磨管研磨结束，蛋白质得以提取出来，运用蛋白质组织学技术进一步探究，对比分析患病和正常软骨差异表达的蛋白质，寻找潜在的治疗靶点。⠣实验室日常#⠂ #研磨仪#⠂ #高通量组织研磨仪#⠂ #发疯日常#

𐟧엥stern Blot实验全攻略𐟒ꊰŸ” 你是否对Western Blot实验感到困惑？别担心，这里有一份详细的实验指南帮助你轻松上手！ 𐟒ᠪ*提蛋白** * 使用全蛋白提取试剂盒，按照100mg样本+1ml lysis buffer的配方，加入磷酸酶抑制剂、PMSF和蛋白酶抑制剂，研磨成匀浆后离心，取上清液。 * 另一种选择是使用RIPA buffer和cOmplete protease inhibitor，将20mg样品与150ul RIPA混合，冰上放置5-30分钟。 𐟓Š **蛋白定量-BCA测定法** * 用PBS稀释BSA标准品，将样品稀释至适当浓度。 * 混合BCA试剂A和B（50:1），加入200ul到每个样品中，37Ⰳ放置30分钟后，在562nm波长下比色。 * 根据吸光值和标准曲线计算蛋白浓度。 𐟔젪*Western Blot步骤** 1️⃣ **配胶**：根据蛋白分子量选择分离胶浓度（6%-12%），浓缩胶使用5%浓度。 2️⃣ **电泳**：初始80v约30分钟，待marker开始分离后调至120v，总时长约1.5小时。 3️⃣ **转膜**：使用Glycine和Tris配制转膜液，加入甲醇后预冷。将PVDF膜在甲醇中活化后用于转膜，注意赶走气泡。根据蛋白分子量调整转膜时间和电流。 4️⃣ **封闭和抗体孵育**：使用1%牛奶或3% BSA封闭PVDF膜约1-1.5小时。一抗按比例稀释后，4℃孵育过夜。次日使用TBST清洗并孵育二抗1小时，再次清洗后使用化学发光试剂显影。 𐟌Ÿ **技术心得与提醒** * 注意实验室温度对胶凝固的影响，夏天可冰预冷玻璃板，冬天可用水压平分离胶。 * 使用TEMD时应在通风环境操作，注意其挥发性和神经毒性。 * 保留使用过的膜，尤其是发表论文时，某些杂志可能会要求提供。 𐟒ꠗestern Blot虽然技术性强，但只要掌握精确的实验操作和严谨的科研思维，你就能轻松上手！希望这份指南能帮到你，祝你实验顺利！

核糖核酸2 在日常实验和送测序中，我们经常听到mRNA和microRNA这两个词，但它们到底有什么区别呢？更重要的是，它们都能用RNA提取试剂盒提取吗？ mRNA和microRNA的区别 𐟓– 首先，mRNA（信使RNA）是蛋白质合成的直接模板。它的分子通常很长，由数千个核苷酸组成。在核糖体上，mRNA的信息被用来合成特定的蛋白质，这个过程叫做翻译。而microRNA（微小RNA）则是一种小分子非编码RNA，分子较短，通常由约22个核苷酸组成。它可以与mRNA的3'非翻译区（3'UTR）或其他区域结合，从而调控基因表达。换句话说，microRNA通过调控mRNA的稳定性和翻译来间接影响蛋白质的合成。提取mRNA和microRNA的试剂盒 𐟧ꊊ要提取mRNA，你应该使用Trizol或者总RNA提取试剂盒。而要提取microRNA，则需要使用专门的microRNA提取试剂盒。全转录组测序通常选择microRNA提取试剂盒，而普通转录组测序则可以选择总RNA提取试剂盒或者Trizol。小结 𐟓 总的来说，mRNA是蛋白质合成的直接模板，而microRNA则通过调控mRNA的稳定性和翻译来间接影响蛋白质的合成。在提取RNA时，选择合适的试剂盒非常重要，以确保实验结果的准确性。

纳昂达文库构建试剂盒适用样本及要求详解纳昂达通用文库构建试剂盒适用于多种类型的样本，包括全血gDNA、FFPE、血浆cDNA等。对于复杂样本的处理，如FFPE组织样本，推荐从源质控开始。以下是具体的要求和步骤：常规gDNA 𐟧슦取试剂盒：推荐使用天根的血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒（货号：DP304）。定量方法：基于分光光度计原理的NanoDrop和基于双链DNA荧光染料的Qubit、PicoGreen进行定量。要求OD260/OD280=1.8~2.0；OD260/OD230=2.0~2.5。纯度评估：OD260/OD280>1.9表明有RNA污染，<1.6表明有蛋白质、酚等污染；OD260/OD230<2.0则表明有碳水化合物、盐类或者有机溶剂污染。片段分布：1%琼脂糖凝胶电泳时，>15kb的清晰主带；Bioanalyzer或Bioptic(Qsep)分析主峰~160 bp，次峰~3。 FFPE组织 𐟧ꊦ取试剂盒：推荐使用Qiagen的QIAamp DNA FFPE Tissue Kit（货号：56404）。定量方法：与常规gDNA相同。纯度评估：与常规gDNA相同。片段分布：1%琼脂糖凝胶电泳或生物分析仪，如Agilent2100进行样本完整性评估。血浆cDNA 𐟧𔊦取试剂盒：根据具体样本类型选择合适的提取试剂盒。定量方法：与常规gDNA相同。纯度评估：与常规gDNA相同。片段分布：根据具体样本类型进行评估。纳昂达通用型文库构建试剂盒兼容多种类型样本的文库构建，确保样本处理和质量控制是关键步骤。

分子生物学小技巧：质粒提取全解析 𐟧슨𔨧𒒦取是分子生物学实验中的基本操作，但你真的了解其中的原理吗？很多人只知道使用试剂盒中的P1、P2、P3溶液，却对具体成分和作用一知半解。今天，我们就来深入探讨质粒提取的背后原理，让你真正掌握这项技术！质粒提取的基本原理 𐟌 质粒是独立于染色体外能够自我复制的环状DNA分子。质粒提取采用的是强碱裂解法。基本原理是：细菌悬浮液暴露于高PH的强阴离子洗涤剂中，细胞壁被裂解，染色体DNA和蛋白质发生变性，相互缠绕形成大型复合物。然后被十二烷基硫酸盐包裹，当用钾离子取代钠离子时，复合物会从溶液中沉淀下来，离心去除后，质粒DNA就存在于上清液中。由于DNA带负电，而质粒提取柱相当于一个阴离子柱，能够在高盐的条件下吸附DNA，然后通过去离子水洗脱，就得到纯化的质粒DNA了。 P1、P2、P3到底是什么？ 𐟧ꊐ1: 1M Tris-Hcl(PH8.0)25 mL + 0.5 MEDTA(PH8.0) 10mL 加超纯水定容至500mL，温热灭菌，常温保存。用时现加RNase。 P2: NaOH 4g + SDS 5g。加超纯水定容至500mL, 湿热灭菌, 常温保存。 P3: 乙酸钾147.21g + 冰醋酸57.5mL，加超纯水定容至500mL, 湿热灭菌, 常温保存。实验步骤详解 𐟏튥ꌥ‰试剂准备：从培养箱中取出前一天摇的菌液，从中取2mL离心，去上清，备用。P1在使用前加入RNA酶。菌体裂解：根据试剂说明，向含有菌体沉淀的EP管中加150 P1，震荡管底，使菌体全部溶解于溶液1中。然后加入150 P2，温和地上下翻转EP管8-10次。加入500 P3，立即剧烈翻转EP管8-10次，此时EP管中出现白色絮状沉淀。过柱纯化：将EP管12000转离心1分钟，用枪头小心地吸出上清液至收集柱中。12000转离心1分钟，弃去滤液，向收集管中加入500 PW漂洗液，12000转离心1分钟，弃去滤液，重复加入500 PW漂洗液，12000转离心1分钟，弃去滤液,12000转离心2分钟。把收集柱装入新的EP管中，室温晾干5分钟。在收集柱的膜中加入50提前预热的EB buffer或去离子水。室温静置1分钟。12000转离心2分钟。得到质粒DNA溶液。常见问题解答 𐟛 ️ 质粒提取的得率低或无质粒：可能是菌体老化或质粒拷贝数低。可以重新涂布筛选，挑选新的菌落进行液体培养。碱裂解不充分：收集的菌体含量较高时，可以酌情提高溶液P1、P2、P3的含量。乙醇残留：漂洗液没有去除干净。可以两遍醇洗以保证盐离子完全清除。洗脱处理不当：洗脱液加入较多或者洗脱时间过短。可以提前将洗脱液加热，从而加速DNA从柱体的脱离。质粒的纯化不足：可能混有RNA或基因组DNA。可以避免加入溶液P2、P3时剧烈震荡，减少菌体用量。总结 𐟓 看完这篇，你是不是对质粒提取的原理有了更深入的了解？下一期，我们将继续探讨大提质粒的技术。记得关注哦！

转录组分析全流程详解，从零开始到数据解读转录组研究是生物学领域的重要工具，通过分析细胞或组织中的基因表达水平，揭示生命的奥秘。以下是转录组分析的详细步骤：样本采集和处理 𐟧ꊠ 选择合适的生物样本，如细胞、组织或生物体，并进行适当的处理和保存，以确保 RNA 的质量和完整性。 RNA 提取 𐟧슠 使用专门的试剂盒和方法从样本中提取总 RNA，去除蛋白质、DNA 等杂质。 RNA 质量检测 𐟔 通过琼脂糖凝胶电泳、分光光度计等方法检测 RNA 的质量，包括完整性、纯度和浓度。文库构建 𐟓š 将提取的 RNA 反转录为 cDNA，并根据研究目的和技术平台，构建相应的测序文库。测序 𐟓𘊠 使用高通量测序技术，如 RNA-seq（RNA 测序），对构建的文库进行测序，产生大量的短序列数据。数据预处理 𐟧𙊠 对测序得到的原始数据进行质量控制和过滤，去除低质量的读段和接头序列等。序列比对 𐟔„ 将处理后的序列与参考基因组或转录组进行比对，确定每个读段的位置和来源。基因表达定量 𐟓Š 计算每个基因或转录本的表达量，常用的指标包括 FPKM（Fragments Per Kilobase of exon per Million fragments mapped）、TPM（Transcripts Per Million）等。差异表达分析 𐟔 比较不同条件下（如不同组织、疾病状态、处理组等）基因的表达差异，筛选出显著差异表达的基因。功能注释和富集分析 𐟓š 对差异表达基因进行功能注释，如基因本体（GO）注释、KEGG 通路分析等，以了解其参与的生物学过程和通路。结果验证 𐟧ꊠ 通过 qRT-PCR（定量逆转录 PCR）等实验方法对部分关键基因的表达进行验证，以确保转录组分析结果的可靠性。数据分析和解释 𐟓ˆ 综合以上结果，结合生物学背景知识，对研究问题进行深入分析和解释，提出科学假设和结论。转录组学的研究可以帮助我们了解诸多重要的生物学信息，包括基因表达的水平、模式和调控机制，揭示基因功能，探索细胞的生理和病理过程，以及研究生物在不同环境条件下的适应性变化等。

转录组分析全流程详解，从零开始到数据分析转录组学是生物学领域的重要研究方法，通过分析基因表达水平、模式和调控机制，揭示基因功能，探索细胞的生理和病理过程。以下是转录组分析的详细步骤：样本采集和处理 𐟧ꊩ€‰择合适的生物样本，如细胞、组织或生物体，并进行适当的处理和保存，以确保 RNA 的质量和完整性。 RNA 提取 𐟧스𝿧”褸“门的试剂盒和方法从样本中提取总 RNA，去除蛋白质、DNA 等杂质。 RNA 质量检测 𐟔 通过琼脂糖凝胶电泳、分光光度计等方法检测 RNA 的质量，包括完整性、纯度和浓度。文库构建 𐟓š 将提取的 RNA 反转录为 cDNA，并根据研究目的和技术平台，构建相应的测序文库。测序 𐟓𘊤𝿧”詫˜通量测序技术，如 RNA-seq（RNA 测序），对构建的文库进行测序，产生大量的短序列数据。数据预处理 𐟛 ️ 对测序得到的原始数据进行质量控制和过滤，去除低质量的读段和接头序列等。序列比对 𐟔„ 将处理后的序列与参考基因组或转录组进行比对，确定每个读段的位置和来源。基因表达定量 𐟓Š 计算每个基因或转录本的表达量，常用的指标包括 FPKM（Fragments Per Kilobase of exon per Million fragments mapped）、TPM（Transcripts Per Million）等。差异表达分析 𐟓‰𐟓ˆ 比较不同条件下（如不同组织、疾病状态、处理组等）基因的表达差异，筛选出显著差异表达的基因。功能注释和富集分析 𐟌 对差异表达基因进行功能注释，如基因本体（GO）注释、KEGG 通路分析等，以了解其参与的生物学过程和通路。结果验证 𐟔슩€š过 qRT-PCR（定量逆转录 PCR）等实验方法对部分关键基因的表达进行验证，以确保转录组分析结果的可靠性。数据分析和解释 𐟓ˆ𐟓Š 综合以上结果，结合生物学背景知识，对研究问题进行深入分析和解释，提出科学假设和结论。转录组学的研究可以帮助我们了解诸多重要的生物学信息，揭示基因功能，探索细胞的生理和病理过程，以及研究生物在不同环境条件下的适应性变化等。

蛋白质免疫印迹实验全解析蛋白质免疫印迹（Western blot）是一种在分子生物学中广泛使用的技术，用于检测和分析特定蛋白质的存在和大小。以下是该技术的基本步骤和实验设计示例： 𐟍𝯸 蛋白质样品的准备：从细胞或组织中提取蛋白质，并通过定量方法确定其浓度。 𐟏Š‍♂️ SDS-PAGE：使用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）按大小分离蛋白质样品。 𐟔„ 转移：将电泳后的蛋白质从凝胶转移到一个稳定的支持膜（如硝酸纤维素或聚偏氟乙烯膜）上。 𐟛᯸ 阻断和抗体结合：使用阻断剂（如脱脂奶粉溶液）阻断膜上未被蛋白质占据的部分，然后用特异性抗体（一抗）结合目标蛋白。 𐟓𘠤𚌦졦Š—体和信号检测：使用标记有酶或荧光团的二次抗体识别一抗，通过化学发光或荧光方法检测蛋白质的存在和量。实验设计示例： 𐟎›‡：检测细胞应激条件下某特定蛋白（如热休克蛋白70，HSP70）的表达水平。 𐟌𑠧𛆨ƒž培养和处理：培养哺乳动物细胞，在正常和应激（如热冲击）条件下处理细胞。 𐟔젨›‹白质提取和定量：收集并裂解细胞，提取蛋白质，并使用BCA蛋白定量试剂盒等方法定量。 𐟏�DS-PAGE：按蛋白质样品的浓度制备样品，并在SDS-PAGE中进行电泳分离。 𐟔„ 蛋白质转移：将分离的蛋白质从凝胶转移到硝酸纤维素或PVDF膜上。 𐟛᯸ 阻断和抗体结合：用脱脂奶粉溶液阻断膜上非特异性位点，然后用针对HSP70的一抗孵育。 𐟓𘠤𚌦졦Š—体和信号检测：用荧光或化学发光标记的二抗孵育，然后使用适当的成像系统检测信号。 𐟓Š 结果分析：通过比较正常和应激条件下HSP70的表达量，分析应激对蛋白表达的影响。 Western blot技术在蛋白质表达分析、蛋白质修饰研究和疾病诊断中扮演着重要角色，它可以用于定性和定量地分析特定蛋白质的表达水平和变化。

质粒提取的四种方法及其适用范围质粒提取是一种常见的实验技术，用于从细菌或其他生物体中获取纯净的质粒DNA。质粒提取的目的是为了进行后续的分子生物学实验，如基因克隆、基因表达和转基因等。我们通常使用商业化试剂盒来进行质粒提取，这些试剂盒可以根据实验目的和样品来源进行分类。碱裂解法 𐟌꯸ 原理：碱裂解法利用碱性溶液破坏细菌细胞壁和细胞膜，从而使质粒DNA从细胞中释放出来。碱性条件会导致细胞膜和细胞壁的破裂，释放出质粒DNA。随后通过中和和沉淀步骤进行纯化，去除蛋白质和其他杂质。适用范围：碱裂解法适用于从大多数常见细菌中提取质粒DNA，特别适合小规模提取和常规实验。高盐法 𐟧‚ 原理：高盐法利用高盐浓度破坏细菌细胞膜和蛋白质，从而使质粒DNA从细胞中释放出来。高盐浓度会导致细胞膜的破裂和蛋白质沉淀，从而实现质粒DNA的纯化。适用范围：高盐法适用于从各种细菌中提取质粒DNA，包括一些难以处理的细菌株。这种方法对于大规模提取和高纯度要求的实验较为适用。硅胶柱层析法 𐟏튥ŽŸ理：硅胶柱层析法使用硅胶柱作为质粒DNA的吸附材料。样品中的质粒DNA在硅胶柱上结合，而杂质则被洗脱。然后通过洗涤和洗脱步骤，纯化质粒DNA。适用范围：硅胶柱层析法适用于从各种来源的细菌中提取质粒DNA，包括高GC含量的细菌。这种方法通常能提供较高的纯度和较好的质粒DNA回收率。磁珠法 𐟧ꊥŽŸ理：磁珠法利用磁性珠子表面的特定配体与质粒DNA结合，然后通过磁场将质粒DNA与磁珠分离。杂质则被去除，最后通过洗涤和洗脱步骤纯化质粒DNA。适用范围：磁珠法适用于从各种来源的细菌中提取质粒DNA。这种方法具有快速、高效、自动化的特点，适用于高通量实验和高纯度要求的实验。实验常见问题和措施 𐟚芦𑡦Ÿ“：在质粒提取过程中，可能会发生DNA污染，导致提取的质粒DNA样品的纯度下降。为了避免污染，需要注意使用无菌操作和洁净的实验环境。 DNA降解：DNA在提取过程中容易受到核酸酶的降解。为了保护DNA的完整性，可以在提取过程中添加核酸酶抑制剂，避免长时间曝光在室温下，以及避免多次冻融循环。低得率：有时候质粒提取的得率较低，可能由于菌落密度不足、提取方法不当等原因。为了提高得率，可以增加菌落培养的时间和密度，使用适当的提取方法，并根据实验需要优化提取步骤。在进行质粒提取实验时，需要注意操作规范和控制实验条件，以确保提取的质粒DNA质量和纯度的准确性和可靠性。

RNA提取质量不高？试试这些方法吧！今天提取了24个RNA样本，感觉自己做实验越来越熟练了，但也有点麻利和暴躁。使用的试剂盒是tiangen的，听说这个试剂盒评价一般，全式金的似乎更好，提的RNA更多。不知道有没有这回事。自己测了一下A260/A230，只有1.4-1.5的样子。查了一下资料，纯DNA的A260/A230=1.8，纯RNA的A260/A230=2.0。所以如果A260/A230小于2.0，说明RNA被DNA或其他碳水化合物、盐类、有机溶剂污染了。比如我用的试剂盒最后一步是加蛋白质漂洗液，如果没洗干净或者没晾干，就会造成污染。总的来说，可能是我提取的RNA太多，操作上出了问题。本来觉得可能是细胞量太少，下次准备用6孔板代替12孔板。但想了想，细胞量少应该影响的是RNA浓度，而不是A260/A230比值。有人说最好在超净台里做实验，但我们实验室的超净台很紧张，主要是养菌的操作。生物安全柜离实验室很远，甚至不在同一层楼。我们组里只有我一个人做细胞实验，所以设备分配上有点尴尬。最主要的是，用TIANGEN试剂盒提RNA需要频繁离心，离离心机远了真的很烦人。不知道大家是不是在超净台做的？你们的试剂盒离心次数多不多？总之，看到网上有人说A260/A230 1.4以上就可以用，甚至1.3也可以试试。我辛辛苦苦提了一下午的RNA，肯定还是要拿它做个RT-PCR的哈哈哈。下次我要换个试剂盒，并且一次性少提一点。

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