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免疫沉淀最新视觉报道_免疫沉淀实验原理及步骤(2024年12月全程跟踪)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：热点更新日期：2024-11-30

免疫沉淀

免疫共沉淀与二抗优化：消除轻链干扰的秘诀 𐟔 免疫共沉淀的优点：相互作用蛋白质在天然状态下进行，避免了人为因素的影响。蛋白复合物在自然状态下分离，灵敏度高。 𐟚력…疫共沉淀的缺点：可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质相互作用。两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而是通过第三者桥梁作用。实验前需要预测目的蛋白，选择合适的抗体，否则实验可能失败。灵敏度不如亲和色谱高。 𐟓Š 常见问题：在免疫沉淀实验后的WB验证中，使用常规的Anti-IgG (H+L)酶标二抗时，会出现重链（50 kDa）和轻链（25 kDa）的两条带，干扰目的蛋白的检测。 𐟔砨磥†𓦖𙦡ˆ：使用IPKine系列二抗，可以与重/轻链特异性结合，消除重链或轻链对目的蛋白检测的干扰。 IPKine山羊抗小鼠IgG轻链二抗（A25012）和IPKine小鼠抗兔IgG轻链二抗（A25022）可以消除重链干扰。 IPKine山羊抗小鼠IgG重链二抗（A25112）和IPKine山羊抗兔IgG重链二抗（A25222）可以消除轻链干扰。 𐟎PKine系列二抗的特点与优势：小包装即用型试剂，性价比高。背景干净，条带清晰，信噪比高。避免抗体重链或轻链的干扰问题。使用简便，无需额外试剂和操作步骤。经特殊优化，与其他种属的IgG分子交叉反应极低。通过使用IPKine系列二抗，可以有效解决免疫共沉淀实验后的轻/重链干扰问题，提高实验的特异性和信噪比。

𐟔 掌握分子互作技术，科研不再迷茫！ 𐟔젥ˆ†子互作是生物医药领域的重要技术，但常常让人感到困惑。别担心，这里有一图帮你理清常见的分子互作技术！ 𐟒᠒NA pull-down：通过RNA与蛋白质的相互作用，捕捉并分离出与之结合的蛋白质。 𐟔 RIP：RNA免疫沉淀技术，用于研究RNA与蛋白质的相互作用。 𐟌 ChIP：染色质免疫沉淀技术，揭示蛋白质与DNA的结合关系。 𐟤 Co-IP：共免疫沉淀技术，用于鉴定蛋白质间的相互作用。 𐟒ᠦŽŒ握这些技术，你的科研之路将更加清晰！

WB实验详细方法步骤：样品制备、电泳、转膜、封闭、一抗、二抗、显色。如有相关实验问题，欢迎留言探讨。互作机制研究系统性解决方案，包括免疫沉淀试验（IP、RIP、CHIP、CHIRP）和蛋白组芯片检测试验，协助轻松突破互作机制，让科研成果更上一层楼。 #科研#⠂ ⠣wb实验#⠂ ⠣研究生#⠂ ⠣泛素化修饰#

细胞免疫共沉淀实验（Co-IP）全攻略细胞免疫共沉淀实验（Co-IP）是一种研究细胞内蛋白质相互作用的重要方法。其基本原理是，如果细胞内两种蛋白质（A和B）有直接或间接的相互作用，那么在温和的裂解条件下获得的蛋白样品中加入A蛋白的抗体，可以将A蛋白沉淀下来，与其直接或间接相互作用的B蛋白或C蛋白也会一起被沉淀下来。通过Western blot检测沉淀中是否存在B或C蛋白，可以确定B或C蛋白与A蛋白的相互作用。 𐟔 用途检测A、B蛋白在体内是否相互结合分离与A蛋白相互作用的蛋白复合物 𐟧ꠦ料与仪器【样品和试剂】 293T细胞（以该细胞做转染为例）转染质粒（Flag-A，HA-B） Flag抗体 2㗠loading buffer PBS Flag-beads 1㗠TBST 5㗠SDS loading buffer 蛋白酶抑制剂磷酸酶抑制剂A和B RIPA裂解液【实验仪器】磁力架金属浴 RIPA裂解液旋转混合仪 WB实验相关设备 𐟓 实验步骤一、细胞的铺板与转染提前一晚将293T细胞铺板至6cm皿中，铺板量以达到相应的转染试剂要求为准；用各实验室相应的转染试剂将以下质粒组合转染2皿细胞：Flag空载+HA-B；Flag-A+HA-B；每质粒2微克。二、免疫沉淀转染24小时后，收获细胞，每皿加入500裂解液，收集细胞至1.5mL EP管中，在冰上超声破碎细胞；超声好后，4℃，12,000g，离心30分钟，取400上清液用于免疫沉淀，80上清用作总蛋白并加入等体积的2㗠loading buffer；将400上清加入用裂解液清洗了3遍的beads中，加入0.3-0.5 Flag抗体，4℃孵育3-4小时； 4℃，2,000g，离心3分钟，去除未结合的液体，留下beads沉淀，用预冷的蛋白裂解液清洗沉淀3次，每次5分钟；最后一次去除清洗液，往沉淀中加入602㗬oading buffer，和总蛋白一起在沸水中煮沸15分钟。三、Western Blot检测通过SDS-PAGE分离样品，利用全蛋白样品作为对照，检测Flag-A和HA-B蛋白是否发生结合。 ⚠️ 注意事项对于内源的Co-IP检测应该用10cm皿来培养目的细胞，并维持较好的生长状态；如果该实验用于新蛋白的鉴定，应注意抗体重链和轻链的影响；该实验不能确定蛋白之间的相互作用是直接还是间接的。

chip实验h3对照 𐟧ꠥꌦ料主要试剂染色质免疫沉淀(CHIP)试剂盒 Anti-RNA polymerase II RPB1 抗体 Rabbit Control IgG Hieff⮠qPCR SYBR Green Master Mix(Low Rox Plus) 主要器材化学发光成像系统四维旋转混合仪荧光定量PCR仪智能恒温水浴锅细胞超声破碎仪电泳仪电源高速冷冻离心机 𐟔젥ꌦ�ꤊ细胞交联用1ml PBS重悬细胞加入28ul 37%甲醛（终浓度为1%），室温翻转孵育10分钟加入10㗧”˜氨酸至终浓度为1㗯𜌥𘩧🻨𝬥�‚𒵥ˆ†钟，终止交联 4℃，3000g，离心3分钟；弃上清液用1ml预冷的1X PBS重悬细胞，3000g，4℃，5分钟离心，去上清重复步骤e，沉淀可冻存于-80℃ 胞核制备和染色质碎裂用200ul Membrane Extraction Buffer（使用前加入2ul蛋白酶/磷酸酶抑制剂）重悬细胞；冰上静置10分钟 4℃，3000g，离心3分钟；弃上清液用200ul MNase Digestion Buffer（使用前加入0.2ul DTT）重悬细胞核加入0.2ul MNase，吹打混匀；37℃水浴30分钟，期间每5分钟混匀一次加入20 MNase Stop Solution，混匀后冰上放置5分钟 4℃，9000g，离心5分钟；弃上清液用100 of 1X IP Dilution Buffer（使用前加入1ul蛋白酶/磷酸酶抑制剂）重悬沉淀冰上超声打断5次，每次2分钟 4℃，9000g离心5分钟；转移上清到新的EP管中 𐟓 下期继续，敬请期待！

pulldown结果怎么看 𐟔 你是否对 GST pull-down 实验的结果感到困惑？别担心，这里有一份结果解析指南帮助你轻松解读！ 𐟒ᠦŠ€术原理回顾： GST pull-down 技术利用谷胱甘肽亲和树脂将靶蛋白-GST 融合蛋白固定，以此作为与目的蛋白亲和的支撑物。当含有目标蛋白的溶液通过树脂时，与之相互作用的“捕获蛋白”会被吸附。 𐟓 实验流程简述： 1️⃣ 准备全细胞裂解液作为 Input。 2️⃣ 进行 GST pull-down 实验，用 GST 或 His 抗体进行免疫沉淀。 3️⃣ 通过 SDS-PAGE 电泳分析洗脱结合物，验证蛋白间相互作用。 𐟔 结果解读关键点： ✅ Input 组：检测诱饵蛋白与靶蛋白的表达。 ✅ Pull-down 组：观察 GST 或 His 抗体免疫印迹后的条带情况。 ✅ 阳性对照组（GST/His IB 组）：确保抗体与相应标签有反应。 ✅ 阴性对照组（GmPSMD-GST+GmPIB1-His 组）：验证两种蛋白间是否存在互作。 𐟎‰ 现在，你是否对 GST pull-down 结果有了更清晰的认识？赶快试试吧！

实验室摇床选购指南：别盲目跟风！实验室摇床是进行各种生化实验的必备工具，选择合适的摇床至关重要！以下是不同类型摇床的适用场景，帮你做出明智选择： 1️⃣ 圆周摇床 𐟒ᠩ€‚用于凝胶电泳实验、考马斯蓝染色/脱色、硝酸银染色的固定/染色/显影、Southern blot中DNA变性等。 2️⃣ 线性摇床 𐟒ᠩ€‚用于化学提取、生化反应、血样混合、脂肪混匀、凝胶染色、细胞培养、溶度研究等。 3️⃣ 翘板摇床 𐟒ᠩ€‚用于电泳凝胶染色/脱色样品洗涤、酶联免疫吸附（ELISA）洗脱、酶促免疫检测、蛋白合成、杂交印迹/洗脱、免疫沉淀、WB实验等。 4️⃣ 三维摇床 𐟒ᠩ€‚用于剪切力敏感、对氧气需求量较低的细胞培养，如哺乳动物细胞培养，精细的细胞培养、染色和脱色。选择合适的摇床能让你的实验更加高效和准确，记得根据实验需求来选购哦！

CHIP实验全解析，轻松搞定！ 𐟔젥ꌥŽŸ理 ChIP（染色质免疫沉淀）实验的原理是在细胞生理状态下，将DNA与蛋白质交联，然后通过超声或酶处理将其随机切断成一定长度的染色质小片段。利用抗原抗体的特异性识别反应，将与目的蛋白结合的DNA片段沉淀下来，再通过特异性富集、纯化和检测这些片段，从而获取蛋白质与DNA相互作用的信息。 𐟓Š 适用范围研究目的蛋白与已知靶序列间的相互作用；研究目的蛋白与整个基因组未知序列的相互作用；研究一个目的蛋白与DNA的相互作用；研究两个蛋白与DNA共同结合的相互作用；研究启动子区域的组蛋白修饰；研究结合在DNA序列上的蛋白复合物。 𐟌Ÿ 实验优势能够检测启动子DNA与其天然基因组状态下的转录因子间的相互作用；能够检测组蛋白编码（如组蛋白乙酰化、三甲基化等）和离散染色质区域的转录因子翻译后修饰；最大限度地减少制备和沉淀过程中染色质重排的机会；基因特异性引物可用于后续PCR检测，增加特异性。 𐟓ˆ 实验流程完成染色质免疫沉淀后，可以对纯化的染色质及有关蛋白、组蛋白、转录因子和辅因子进行多种下游分析。最常见的分析方法有ChIP-qPCR和ChIP-seq等。CHIP实验技术流程图见图2。 𐟒ᠤ𛣥š服务我们提供CHIP-seq和CHIP-qPCR实验的代做服务，免费实验设计，全程博士解答，最终交付结果图和实验报告。欢迎随时咨询！

【中山大学/南华大学合作发文：乳腺癌的潜在治疗靶点】本研究中，研究人员利用实时PCR、蛋白质免疫印迹实验和免疫组织化学对BC患者样本中的TBL2表达进行了分析，还采用Kaplan-Meier生存分析评估其预后意义。研究人员采用蛋白质组学分析、免疫沉淀试验和蛋白质免疫印迹法研究TBL2对AKT磷酸化激活的影响。网页链接

chip实验h3对照染色质免疫共沉淀（ChIP）是研究DNA与蛋白质相互作用的重要方法，深受科研人员的喜爱。通过这种方法，我们可以深入了解组蛋白修饰、转录调控和细胞凋亡等生物学过程。下面，我们来详细讲解一下ChIP实验的原理和步骤，以及一些需要注意的事项。实验原理 𐟧슥œ覴𛧻†胞状态下，通过甲醛固定DNA与蛋白质的复合物，然后使用微球菌核酸酶（Micrococcal Nucleas）将DNA随机切断成一定长度的小片段。接着，通过抗原-抗体特异性结合反应，将这些小片段富集并沉淀下来。最后，通过解除蛋白质和DNA的交联，分离出蛋白质，纯化DNA，并进行PCR检测，从而获取更多信息。实验步骤 𐟏튱%甲醛处理：使蛋白质与DNA交联。细胞裂解：采用微球菌核酸酶消化，形成染色质小片段。抗原-抗体反应：促进免疫沉淀反应。 NaCl、蛋白酶K处理：解除DNA-蛋白交联。 DNA纯化回收：分离出蛋白质，纯化DNA。琼脂糖凝胶电泳和RT-PCR：对DNA作进一步分析。注意事项 𐟓‹ 细胞数量：细胞数过多会导致交联时间增加，DNA片段过长易丢失；过少则DNA片段过短。需要通过预实验确定最佳细胞数。交联时间：推荐1%甲醛交联时间为5-60分钟。时间过长会导致片段过长，时间过短则交联不完全。对照组设置：内对照验证断裂效果，推算实验效率；阳性抗体对照用保守蛋白抗体；阴性对照用宿主血清蛋白。目标蛋白抗体：ChIP实验不同于常规免疫反应实验，因蛋白与DNA交联，抗体结合受空间阻碍影响。常规操作：ChIP实验步骤冗长复杂，涉及洗柱、离心、吸液、换管、孵育和震荡等多个步骤。操作虽基础，但每一步均需细致入微，对操作技巧要求严格。实验结果分析 𐟓Š Input DNA组：使用琼脂糖凝胶电泳，结果应显示DNA片段集中在150bp到350bp之间。 PCR扩增：对纯化DNA进行PCR扩增，再通过凝胶电泳分析对照情况。预期结果为：空白对照无条带，阴性对照条带弱或无，内对照和阳性对照条带强。只有满足这些条件，实验才为成功，可继续RT-PCR实验。通过以上步骤和注意事项，你可以更好地掌握染色质免疫共沉淀技术，从而在科研工作中取得更好的成果。

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