共沉淀法最新视觉报道_越是闷不吭声的越是城府深(2024年11月全程跟踪)
合成异质核壳纳米材料的6种方法 异质核壳纳米材料,就像是橙子,里面的果肉和外面的皮,核和壳的材料不同。合成这种材料其实并不难,下面我来介绍几种常见的方法。 共沉淀法 这个方法很简单,就是在溶液中同时或顺序加入两种或多种金属离子的前驱体。通过控制pH、温度和反应时间,核和壳的部分会分别沉淀,形成不同的材料。 核/壳模板法 ️ 首先,合成一个单一金属或金属化合物的纳米颗粒作为核。然后,通过共沉淀、离子交换或化学镀等方法,在核的表面生长另一种金属或金属化合物,形成壳。你也可以用CVD(化学气相沉积)方法,在高温下将前驱体气体分解或化学反应,在纳米颗粒表面沉积壳材料。通过控制气相中的物质组成和反应条件,可以实现核壳结构的异质性。 双溶剂法 这个方法用两种不相溶的溶剂,一种溶剂中溶解核材料的前驱体,另一种溶剂中溶解壳材料的前驱体。通过控制溶剂的混合和反应条件,使两种材料分别沉淀形成核壳结构。 牺牲模板合成法(空心结构) 这个方法用纳米模板(如硅纳米球、金纳米颗粒等)来制备核壳结构。在模板上首先合成核材料,然后再在其表面沉积壳材料。最后,通过物理或化学方法去除模板,得到空心的异质核壳结构的纳米材料。 电化学沉积法 通过电化学反应,在导电基底上沉积不同的材料形成核壳结构。改变电极材料、电解液组成和反应条件来调控核壳材料的组成。不过,这个方法很难实现均一性和大批量生产。 分子自组装法 这个方法利用分子间的弱相互作用,如氢键、范德华力、疏水作用力和静电作用等,在没有外部模板或力的帮助下,将两种或多种分子自动组合成有序的结构。在混合前驱体溶液中,通过选择性溶剂化作用,使核材料和壳材料的前驱体分子在特定条件下自组装成核壳结构。 这些方法各有特点,你可以根据自己的需求选择合适的方法来合成异质核壳纳米材料。希望这些信息对你有所帮助!
分析化学考研笔记:重量分析法详解 大家好,今天我们来聊聊分析化学中的重量分析法这个方法在考研初试中可是个大杀器,赶紧拿小本本记下来吧! 促进沉淀微粒凝聚的小技巧 在重量分析法中,促进沉淀微粒凝聚是个关键步骤。这样可以防止形成胶体溶液,减少沉淀表面吸附的杂质。具体操作上,可以加入大量电解质或者某些能引起沉淀微粒凝聚的胶体。电解质的作用是中和胶体微粒的电荷,降低水化程度,从而有利于凝聚。这样一来,胶溶现象就能得到很好的控制。 趁热过滤,别陈化 沉淀完毕后,趁热过滤是个不错的选择。因为陈化后,沉淀会逐渐失去水分,变得紧密,吸附的杂质也就难以洗去了。所以,不必等沉淀完全陈化再过滤。 均匀沉淀法 均匀沉淀法也是个很有用的技巧。它的定义是:通过化学反应逐步、均匀地在溶液内部产生构晶阳离子或构晶阴离子,使沉淀在整个溶液中缓慢、均匀地析出。这样可以避免局部过浓现象,生成的沉淀颗粒较大,表面吸附的杂质少,易于洗涤和过滤。不过,这个方法还是不能完全避免继沉淀和混晶共沉淀现象。 小体积沉淀法 还有一种方法是加入沉淀剂后,形成体积小的过饱和溶液。这样用于形成无定形的杂质沉淀,沉淀容易洗涤分离。这个方法在处理某些复杂样品时特别有用。 有机沉淀剂 最后,给大家介绍几种有机沉淀剂: 丁二酮肟:用于测定Ni2+,在NH3性溶液中生成鲜红色螯合物沉淀。 8-羟基喹啉:用于测定At,在NH3性溶液中生成沉淀。 希望这些小技巧能帮到大家,祝大家考研顺利!ꀀ
光亲和磁珠:PPI新研究 蛋白质-蛋白质相互作用(PPIs)在生物系统中扮演着至关重要的角色。然而,鉴定这些相互作用一直是一个挑战,尤其是对于那些由翻译后修饰(PTMs)介导的低亲和力相互作用。传统的方法,如下拉法、免疫共沉淀法(Co-IP)和串联亲和纯化质谱法(TAP-MS),虽然有效,但往往受到非特异性相互作用的干扰。 近年来,光亲和连接技术被认为是一种理想的工具,能够通过光激活将亲和相互作用转化为共价连接,从而冻结低亲和结合相互作用。这项技术的一个关键优势是,它能够显著减少非特异性相互作用,从而提高检测的特异性和分辨率。 在这项研究中,研究者开发了一种新型的光亲和磁珠(PAMBs),通过引入PEG钝化层来减少非特异性相互作用。这种光亲和磁珠能够捕获与特定甲基化位点相互作用的蛋白质,从而鉴定出与Flap内切酶1(FEN1)蛋白上特定甲基化位点相互作用的蛋白质。与传统的生物亲和素下拉系统相比,这种方法显著减少了干扰蛋白的数量(减少80%以上),同时增加了蛋白质亚类的数量。 光亲和连接技术的另一个优势是,它能够识别那些动态地介导低亲和力相互作用的蛋白质。这使得这种方法成为研究低亲和力PPIs的有力工具,有助于发现新的PTM介导的相互作用靶点。 总的来说,光亲和磁珠技术为研究蛋白质相互作用提供了一种新的、有效的手段。通过将这种技术整合到下拉系统中,研究者能够更深入地探索细胞过程的分子机制,从而为生物学研究带来新的见解。
siRNA转染试剂大盘点! 随着基因工程和细胞生物学研究的不断深入,将siRNA导入真核细胞的转染技术已成为研究基因功能、调控基因表达和突变分析等生物学实验的重要手段。目前,主要有三种方法可以将siRNA导入细胞:物理介导(如电穿孔法、显微注射和基因枪)、化学介导(如磷酸钙共沉淀法和载体转染)以及生物介导(如原生质体转染和病毒转染)。 尽管物理介导法对细胞的伤害较大且需要特殊设备,而生物介导法的准备程序复杂且对细胞类型有选择性,但化学介导法因其简便性和高效性而成为实验室的常用方法,其中载体转染法尤为普遍。 市面上的大多数转染载体都是脂质体类载体,这类载体对细胞的毒性较大,转染效果有时也不理想。然而,随着纳米生物材料的发展,利用该种材料研发的转染载体不仅细胞毒性极低,转染效率也非常出色。以下是几种目前在实验室中广泛使用的siRNA转染试剂: 젨质体类载体:虽然这类载体在实验室中应用广泛,但对细胞的毒性较大,转染效果有时不够理想。 ꠧ物材料:利用纳米生物材料研发的转染载体不仅细胞毒性极低,而且在转染效率上也表现出色。 通过选择合适的转染试剂,可以有效提高实验的准确性和可靠性。
细胞转染实验:从基础到实践 细胞转染实验是分子生物学研究中的一项关键技术,它允许我们将外源性的DNA、RNA或蛋白质引入真核或原核细胞,从而深入探讨基因功能、表达调控以及疾病机制。根据转染的方式和所使用的材料,细胞转染可以分为多种方法,包括物理方法(如电穿孔法、显微注射法)、化学方法(如磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法)和生物方法(如病毒介导的转染)。 脂质体转染法 𑊊脂质体转染法利用带正电的脂质体与带负电的核酸分子(DNA/RNA)通过静电作用形成复合物,然后通过脂质体的膜融合或细胞的内吞作用将核酸分子导入细胞。 准备细胞:选择合适的细胞系,调整至对数生长期,铺板至适当的细胞密度。 准备转染复合物:按照脂质体转染试剂说明书,将DNA/RNA与脂质体按一定比例混合,孵育形成转染复合物。 转染:将转染复合物加入到含有细胞的培养基中,轻轻混匀。 培养:将细胞置于适宜条件下培养,根据实验需求进行换液或处理。 检测:通过荧光观察、Western Blot、qPCR等方法检测转染效率和基因表达情况。 电穿孔法 ⚡ 电穿孔法利用短暂的高电压脉冲处理细胞,使细胞膜形成暂时性孔洞,从而使外源DNA/RNA进入细胞。 准备细胞:将细胞悬浮在电穿孔缓冲液中,调整至合适的细胞密度。 电穿孔:将细胞与DNA/RNA混合后,置于电穿孔杯中,施加一定强度的电脉冲。 恢复培养:将处理后的细胞迅速转移至含有培养基的容器中,置于适宜条件下培养。 病毒介导的转染 病毒介导的转染利用经过基因改造的病毒(如逆转录病毒、腺病毒、慢病毒等)作为载体,将外源基因整合到宿主细胞基因组中或实现瞬时表达。 病毒包装:在包装细胞内生产携带外源基因的病毒颗粒。 病毒感染:将病毒颗粒加入到目标细胞中,使病毒感染细胞。 培养:将感染后的细胞置于适宜条件下培养,使外源基因表达。 注意事项 ⚠️ 选择合适的转染方法和条件,确保转染效率和细胞活性。 注意实验安全,尤其是使用病毒介导的转染时。 转染后应密切监测细胞状态,及时调整培养条件。 根据实验需求选择合适的检测方法和时间点。 通过这些步骤,我们可以更深入地了解细胞的内部机制,为生物学研究和药物开发提供有力支持。
【复合光催化剂 可高效去除水中残留抗生素】记者10月25日从西安建筑科技大学获悉,该校交叉创新研究院教授石辉团队以活化生物炭为载体,通过水热反应联合化学共沉淀法,研发出新型复合光催化剂。该催化剂对水中高浓度诺氟沙星表现出高效去除效果。相关论文发表于《自然》旗下期刊《npj 清洁水》。(科技日报)
PVC薄膜环保增塑剂,安全性能大提升! 通过环保型PMgLaCe-LDH的引入,PVC薄膜的综合性能和安全性得到了显著提升。对苯二甲酸二辛酯(DOTP)是目前应用最广泛的PVC增塑剂,但其在PVC薄膜中的迁移性和耐挥发性较差,对环境和人体健康构成威胁。因此,开发一种新型、环保、多功能的PVC填料显得尤为重要。 젩过共沉淀法成功合成了不同La/Ce掺杂比例的碱性和中性改性镁基层状双氢氧化物(PMgLaCe-LDH),并将其作为多功能填料加入PVC中。采用共混法制备了PMgLaCe-LDH/PVC复合膜,并对其综合性能进行了深入研究。结果表明,复合膜,尤其是20Mg10Ce-LDH/PVC,表现出卓越的品质。 这些品质包括: 改进的增塑阻燃性 光热稳定性 疏水性 耐低温性 耐挥发性和耐迁移性 䖯D大鼠的短期和长期安全性评价、细胞毒性试验和皮内刺激反应试验表明,新型环保无毒化合物20Mg10Ce-LDH的添加可有效抑制PVC降解和释放有毒物质。这项研究提供了一个潜在的解决方案,可以减轻与PVC产品相关的环境和健康风险,使它们更安全、更可持续。
IP、CO-IP和Pull-down实验有啥区别? 原创 玉珠隆生物 Uselong Biotech 2024年10月02日 07:25 北京 10人听过 免疫沉淀技术是一种基于抗体和抗原特异性相互作用的经典方法,广泛应用于蛋白质相互作用、蛋白质与遗传物质相互作用的研究。它能有效确定细胞内两种蛋白质的生理性相互作用,并用于抗原检测和蛋白质纯化。衍生技术包括CO-IP(共沉淀法)、ChIP(染色质免疫沉淀技术)、RIP(RNA免疫沉淀技术)。 免疫沉淀(Immunoprecipitation,简称IP)利用特定抗体与目标蛋白结合,从混合物中沉淀出目标蛋白,实现蛋白的纯化与鉴定。其作用为富集和检测特定蛋白,提供高纯度样本以供后续分析。免疫沉淀技术不仅可以用于研究蛋白质的存在、表达量、稳定性和翻译后修饰,还可以用于研究蛋白质-蛋白质相互作用,揭示蛋白质复合物的组成,是蛋白质组学研究中的重要工具。 IP技术的基本流程包括以下几个步骤:①细胞裂解:首先需要收集细胞并裂解,以便释放细胞内的蛋白质。②抗体结合:将偶联特定的抗体填料或磁珠加入到裂解物中,抗体会与其目标蛋白特异性结合。③沉淀:将抗体-蛋白复合物通过离心或使用磁吸方式沉淀下来。④洗涤:去除未结合的蛋白质和其他杂质。⑤洗脱:使用适当的缓冲液将沉淀的抗体-蛋白复合物洗脱,以便进行后续分析,如Western blot或质谱分析。 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,简称Co-IP)技术是一种研究蛋白质相互作用的有效方法。它通过使用针对特定蛋白质的抗体来沉淀该蛋白质及其相互作用的复合物,进而研究与已知蛋白质相互作用的其他蛋白质。Co-IP技术原理是基于抗体与抗原的特异性结合,利用特定抗体沉淀目标蛋白,同时将与目标蛋白相互作用的其他蛋白质一同沉淀下来。Co-IP的主要作用是检测两种蛋白质在体内是否相互作用,以及揭示它们之间的相互关系。通过Co-IP技术,可以识别和鉴定与目标蛋白相互作用的蛋白质,从而构建蛋白质相互作用网络。鉴定蛋白质复合物:Co-IP技术有助于发现目标蛋白的结合伙伴,对于了解蛋白质的功能、调控机制以及信号传导途径至关重要。 Co-IP技术的基本流程包括以下几个步骤:①样品准备:收集细胞或组织样本,用适当的缓冲液洗涤样本以去除杂质。②细胞裂解:使用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液在冰上裂解细胞,裂解应在低温条件下进行以防止蛋白质降解。③裂解液澄清:将裂解液进行离心(通常为4Ⰳ,高速离心),以去除不溶性颗粒和细胞碎片,取上清液进行后续实验。④抗体预结合:将特异性抗体与蛋白A/G磁性珠或其他固相支持物预结合,预结合通常在旋转条件下4Ⰳ孵育30分钟到1小时。⑤免疫沉淀:将预结合的抗体-磁性珠复合物加入到裂解液中,在4Ⰳ下旋转孵育1-2小时或过夜,以允许抗体与目标蛋白充分结合。⑥捕获复合物:使用磁力架收集磁性珠或通过离心收集非磁性珠,去除未结合的蛋白质的上清液。⑦洗涤:用裂解缓冲液重复洗涤磁性珠几次,以去除非特异性结合的蛋白质,每次洗涤后,再次使用磁力架或离心收集珠子。⑧洗脱:使用洗脱缓冲液(如SDS样本缓冲液)洗脱目标蛋白和相互作用的蛋白质,洗脱通常在室温下进行,并可能需要加热。洗脱完成后使用WB或质谱等其它方法对洗脱的蛋白进行检测即可。 Co-IP的优点:①体内天然构象:CO-IP分析中,诱饵蛋白和猎物蛋白保持它们在体内的天然状态,有助于更真实地模拟它们之间的相互作用。②体内相互作用:诱饵蛋白与猎物蛋白的相互作用在体内发生,受外界条件影响较小,有利于减少实验中的干扰因素。③快速高效:如果已有特异性抗体,CO-IP实验过程可以快速进行,无需进行目标蛋白的克隆和异源表达。Co-IP的缺点:①低亲和力互动:对于亲和力较低或短暂性的蛋白质相互作用,CO-IP可能无法有效检测。②直接或间接互动:CO-IP结果可能无法明确区分蛋白质间的相互作用是直接的还是通过其他蛋白质间接发生的。③抗体依赖性:CO-IP方法需要特定的抗体支持,这限制了其在没有合适抗体的情况下的应用。 融合蛋白沉降试验(Pull-down)是一种用于检测蛋白质相互作用的体外实验技术,它不仅可以验证已知蛋白质之间的相互作用,还可以用来筛选可能与已知蛋白质相互作用的新蛋白质。 Pull-down技术利用带有特定标签(例如GST标签、His标签或生物素标签)的融合蛋白作为“诱饵”,将这些融合蛋白固定在亲和树脂上。当目标蛋白或细胞裂解液通过这个系统时,任何能与诱饵蛋白结合的“猎物”蛋白将被吸附和沉淀;通过洗脱步骤,可以将捕获的蛋白质复合物从树脂上洗脱下来;最后,使用蛋白印迹(Western blot)或质谱等技术分析洗脱的蛋白质,以验证预测的蛋白质相互作用或发现新的相互作用。Pull-down实验用于检测两种蛋白质在体外条件下是否能够直接结合。其主要应用包括:①验证已知蛋白质相互作用:通过使用一个已知蛋白质作为诱饵,可以验证它与另一个蛋白质的潜在相互作用。筛选新的蛋白质相互作用:当与细胞裂解液或蛋白质混合物孵育时,Pull-down可以用来发现与诱饵蛋白相互作用的未知蛋白质。 Pull-down技术的基本流程包括以下几个步骤:①准备诱饵蛋白:通过重组DNA技术将目标蛋白与亲和标签(如GST、His等)融合表达,诱导表达并收集含有融合蛋白的细胞,裂解细胞并纯化融合蛋白。②固定诱饵蛋白:将纯化的融合蛋白与亲和树脂(如谷胱甘肽珠子对于GST标签,或金属离子珠子对于His标签)孵育,使融合蛋白固定在树脂上。③准备细胞裂解液:收集将要用于筛选的细胞或组织,裂解细胞或组织,制备细胞裂解液,并离心以清除不溶性颗粒。④孵育裂解液:将固定有诱饵蛋白的树脂与细胞裂解液混合孵育,允许足够的时间让任何可能的相互作用发生。⑤洗涤:孵育后,通过离心收集树脂,并用适当的缓冲液洗涤几次,以去除未结合的蛋白质和杂质。⑥洗脱:使用特定的洗脱缓冲液或条件(如改变pH或添加竞争性配体)从树脂上洗脱结合的蛋白质复合物。⑦分析:将洗脱的蛋白质复合物进行Western blot分析或质谱分析以鉴定相互作用的蛋白质。 Pull-down优点:①低丰度蛋白复合物纯化:Pull-down技术能有效纯化低丰度蛋白质复合物,这对于分析和研究特定蛋白质相互作用至关重要。②体外研究应用广泛:该技术被广泛用于体外转录或翻译系统的研究,为研究者提供了一个有效的研究工具。 Pull-down缺点:①标签影响:引入的蛋白质标签可能会影响与内源性复合物的竞争,可能导致对实验结果的误解。②生理相关性:Pull-down技术虽然能检测蛋白质间的相互作用,但这些相互作用可能并不代表它们在生理条件下真的会在体内相遇和结合。 蛋白纯化技术交流,请添加我们的微信:  抗体63 蛋白质33 磁珠96 蛋白纯化167 抗体 ⷠ目录 上一篇抗体偶联药物(ADC)简介及开发关键点下一篇抗体药物开发全流程梳理-简单易懂 个人观点,仅供参考 阅读 9603
免疫共沉淀(Co-IP)实验全攻略 젥 疫共沉淀(Co-IP)简介: 免疫共沉淀是一种利用抗体与抗原之间的特异性免疫反应来研究蛋白质间相互作用的方法。 基本原理: 在细胞裂解液中加入抗原特异性抗体,通过免疫沉淀反应形成免疫复合物。经过纯化、洗脱后,可以通过SDS-PAGE电泳、Western blot或质谱鉴定出与抗原相互作用的蛋白质。 优点: 相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态。 蛋白的相互作用在自然状态下进行,避免人为影响。 可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。 렧 可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用。 两种蛋白质的结合可能不是直接结合,可能有第三者起桥梁作用。 必须在实验前预测目的蛋白,选择检测抗体,若预测不正确,实验可能无结果。 : 研究一种已知蛋白质与已知或未知蛋白质间的相互作用。 实验步骤: 用RIPA裂解缓冲液裂解细胞。 用PBS配制50%的Protein A/G-agarose工作液。 加入Protein A/G agarose工作液,4℃摇动10分钟去除非特异性蛋白。 4℃,14000g离心15分钟,去除Protein A/G-agarose微球。 使用BCA法或其他方法测定总蛋白浓度。 加入一抗,4℃过夜。 14000g离心收集沉淀,用预冷洗涤缓冲液洗涤3遍。 收集上清,进行SDS-PAGE、Western blot或质谱分析。 总结: Co-IP是研究蛋白质相互作用的经典方法,虽然存在一些局限性,但通过精心设计和操作,可以获得可靠的实验结果。
免疫共沉淀(Co-IP)原理与试剂盒详解 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是一种常用的蛋白质相互作用研究方法。它利用抗体的特异性结合目标蛋白,进而沉淀与之相互作用的蛋白复合物。以下是Co-IP的检测原理和试剂盒组成等详细信息。 一、检测原理 ꊃo-IP的基本原理是将细胞裂解液与特异性抗体孵育,抗体结合目标蛋白后,加入能够结合抗体的固相载体(如蛋白A/G琼脂糖珠),形成抗体-目标蛋白-固相载体复合物。通过离心等方法收集复合物,去除未结合的物质,再洗涤复合物以去除非特异性结合的蛋白。最后,通过洗脱将目标蛋白及其相互作用的蛋白从复合物中释放出来,进行后续的分析,如Western blot、质谱分析等。 二、试剂盒组成 抦体结合缓冲液:用于稀释抗体和细胞裂解液,提供合适的离子强度和pH环境,促进抗体与目标蛋白的结合。 蛋白A/G琼脂糖珠或磁珠:能够特异性结合抗体,用于沉淀目标蛋白复合物。 洗涤缓冲液:用于去除非特异性结合的蛋白,通常含有不同浓度的盐和去污剂。 洗脱缓冲液:用于将目标蛋白及其相互作用的蛋白从复合物中释放出来,通常含有低pH值的溶液或竞争性的抗原。 阴性对照抗体:用于排除非特异性结合的可能性。 说明书:详细介绍试剂盒的使用方法、操作步骤、注意事项等。 三、主要参数 特异性:试剂盒对目标蛋白及其相互作用蛋白的特异性识别能力,应尽量减少非特异性结合。 灵敏度:能够检测到的低丰度相互作用蛋白的能力。 重复性:在不同实验条件下和不同批次间的稳定性和一致性。 兼容性:与后续分析方法(如Western blot、质谱分析等)的兼容性。 四、适用样本 슩用于细胞裂解液、组织匀浆等含有目标蛋白的生物样本。 通过这些信息,你可以更好地理解和应用免疫共沉淀技术,开展蛋白质相互作用研究。
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