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琼脂糖凝胶电泳在线播放_琼脂糖凝胶电泳原理(2024年11月免费观看)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：导读更新日期：2024-11-28

琼脂糖凝胶电泳

RNA琼脂糖凝胶电泳实验指南 𐟌𑊤𘀣€实验目的掌握植物总RNA的非变性胶电泳原理和方法。二、实验材料、器具及药品材料：蘑菇的总RNA溶液。器具：电泳仪、电泳槽、电子天平、移液器、枪头、微波炉、紫外透射检测仪。药品：琼脂糖、1XTAE电泳缓冲液、0.5/ml溴化乙锭（EB）10X载样缓冲液。三、实验步骤非变性琼脂糖凝胶电泳用1XTAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1XTAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4于封口膜上。在实验台上再加入51XTAE电泳缓冲液及110X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。打开电源开关，调节电压至100V，使RNA由负极向正极电泳，约30分钟后将凝胶放入EB染液中染色5分钟，用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。变性琼脂糖凝胶电泳试剂： MOPS缓冲液（10X）：0.4mol/L吗啉代丙烷磺酸（MOPS）（Ph7.0），0.1mol/LNaAc，10mol/LEDTA。上样染料：50%甘油，1mmol/LEDTA，0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝。甲醛。去离子甲酰胺。电泳槽清洗：去污剂洗干净（一般浸泡过夜）——水冲洗——乙醇干燥——3%H2O2灌满——室温放置10分钟——0.1%DEPC水冲洗。操作：将制胶用具用70%乙醇冲洗一遍，晾干备用。配制琼脂糖凝胶：称取0.5g琼脂糖，置干净的100ml锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。待胶凉至60-70℃，依次向其中加入9ml甲醛、5ml10X MOPS缓冲液和0.5ul溴化乙锭，混合均匀。灌制琼脂糖凝胶。样品准备：取DEPC处理过的500ul小离心管，依次加入如下试剂：10X MOPS缓冲液2ul，甲醛3.5ul，甲酰胺（去离子）10ul，RNA样品4.5ul，混匀。将离心管置于60℃水浴中保温10分钟，再置冰上2分钟。向管中加入3ul上样染料，混匀。上样。电泳：电泳槽内加入1X MOPS缓冲液，于7.5V/ml的电压下电泳。电泳结束后，在紫外灯下检查结果。

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琼脂糖凝胶电泳仪电源选择指南在选择琼脂糖凝胶电泳仪时，需要考虑多个因素，包括DNA类型、电泳仪电源、电压、电流、梳子规格等。以下是详细的选择指南：电泳仪电源 𐟔‹ 稳定性：电源输出应稳定，避免电压波动对实验结果产生影响。可调性：电源应具备电压和电流可调功能，以满足不同实验需求。保护功能：电源应具备过载、短路等保护功能，确保实验安全。功率：根据实验需求，选择合适的功率。一般而言，电泳仪电源功率在50W至300W之间。 DNA类型 𐟧슩똥ˆ†子量DNA：如基因组DNA，分子量较大，通常在几十kb至几百kb之间。中分子量DNA：如质粒DNA，分子量一般在1kb至10kb之间。低分子量DNA：如PCR产物，分子量较小，通常在100bp至1kb之间。根据实验需求，选择适合的琼脂糖凝胶电泳仪，以确保实验结果的准确性。电压和电流 𐟓ˆ⚡ 电压：电压越高，电泳速度越快。但过高的电压可能导致DNA分子断裂、电泳带型不整齐等问题。一般而言，琼脂糖凝胶电泳的电压在50V至200V之间。电流：电流与电压成正比，电流越大，电泳速度越快。但过大的电流可能导致电泳仪发热、凝胶变形等问题。一般而言，电泳仪的电流在10mA至50mA之间。制胶梳子的规格 𐟧𕊥픥𞄯𜚥픥𞄥䧥𐏥†𓥮š样品的加样量。一般而言，孔径在100至500之间。孔数：根据实验需求，选择合适的孔数。孔数越多，可同时进行的实验样品越多。材料：梳子材料应具有良好的导电性和耐腐蚀性，如铂金丝、不锈钢等。其他注意事项 𐟓‹ 凝胶托盘：选择易于操作、耐高温的凝胶托盘，便于凝胶制备和电泳操作。温控系统：部分电泳仪具备温控功能，可根据实验需求选择。尺寸和重量：根据实验室空间和操作便利性，选择合适的电泳仪尺寸和重量。产品质量和售后：选择口碑好的品牌，确保产品质量和售后服务。在实际操作过程中，还需根据实验需求和经验，不断调整电泳条件，以获得良好的实验结果。

𐟧짐𜨄‚糖凝胶电泳实验解析 𐟔젥ꌩṧ›š琼脂糖凝胶电泳与DNA检验 𐟎ꌧ›„： 1️⃣ 掌握PCR技术的基本原理及操作 2️⃣ 熟悉琼脂糖凝胶电泳的原理及操作 𐟓– 实验原理： PCR（聚合酶链式反应）是一种体外选择性扩增DNA的方法。它包括三个基本步骤：变性（双链DNA在高温下解链）、退火（引物在适当温度下与模板配对）和延伸（在TaqDNA聚合酶作用下合成新链）。通过这三个步骤的循环，每轮PCR使目的DNA打增1倍。 𐟧𞠥ꌥ†…容与步骤： 1️⃣ PCR反应：在PCR管中加入适量的反应液，包括Buffer、dNTP、Taq酶、灭菌超纯水、引物和质粒模板。轻轻混匀后，置于PCR仪中，设定适当的循环参数，如94℃变性、53℃退火和72℃延伸。 2️⃣ 电泳：制备1.0%的琼脂糖凝胶，将PCR产物与核酸染料混合后加入凝胶孔中。在电泳槽中加入TAE电泳缓冲液，并连接电源进行电泳。电泳结束后，用凝胶成像仪观察并记录结果。 𐟓Š 实验结果与分析：本次PCR实验得到了明显的目标条带，效果较好。然而，若出现其他亮带或拖带现象，可能是由PCR实验中滴加剂的量未准确控制或胶板制作过程中边缘处不均匀等原因导致的。此外，PCR引物的设计也是影响实验结果的重要因素之一。总之，通过本次实验，我们成功掌握了PCR技术的基本原理及操作，并熟悉了琼脂糖凝胶电泳的原理及操作。这些实验技能对于分子生物学研究具有重要意义。

𐟧쒎A提取质量金标准解析𐟔 𐟤”你是否也遇到过RNA提取后，qPCR无法做出荧光曲线的情况？这可能是RNA质量不佳所导致的。那么，如何判断RNA的质量呢？ 𐟒᥅𖥮ž，判断RNA质量的金标准只有两条： 1️⃣ 琼脂糖凝胶电泳：这是检测RNA完整性的关键步骤。𐟓Š通过电泳图，我们可以清晰地看到RNA的条带分布，如果28S和18S的条带清晰且比例适当，那么RNA的完整性就得到了保证。同时，电泳图还能揭示RNA是否降解以及是否有基因组DNA或蛋白的污染。 2️⃣ 紫外分光光度计：这是检测RNA纯度和浓度的有效方法。𐟒ᩀš过测量OD260/280和OD260/230的比值，我们可以判断RNA的纯度以及是否存在蛋白污染或RNA降解的情况。一般来说，OD260/280在1.8-2.2之间，说明RNA的纯度较好。 𐟔掌握这两个金标准，你就能轻松判断RNA的质量，避免qPCR等后续实验的失败啦！

𐟔쥜覠𘩅𘦣€测中，260/280和260/230是评估核酸样品纯度的关键比值哦！ 𐟒Ჶ0/280比值主要用于区分DNA和RNA的纯度。DNA的“纯”比例大约是1.8，而RNA则是2.0。如果这个比值低于这些数值，可能意味着样品中混有蛋白质、苯酚等污染物，它们在280nm附近有强吸收。 ✨另一方面，260/230比值提供了另一个维度来评估核酸的纯度。一个“纯”的核酸样品，其260/230值通常在2.0-2.2之间，而且通常会高于相应的260/280值。若此比值明显低于预期，可能意味着存在在230nm处有强吸收的污染物，如碳水化合物或盐。 𐟔总的来说，这些比值只是初步的评估手段。要全面了解样品情况，还需结合其他方法，如琼脂糖凝胶电泳哦！

导师以为你会𐟔夽†不会教你的印迹技术𐟥𙰟幊𐟌𘰟Œ𘰟Œ𘠓outhern印迹杂交（Southern blot）是1975年由英国人Southern创建的，是研究DNA图谱的基本技术，在遗传病诊断、DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。基本原理：Southern印迹杂交利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量。 𐟌𘰟Œ𘰟Œ𘠎orthern印迹杂交（Northern blot）是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。与DNA印迹技术相对应，称为Northern印迹技术。基本原理：Northern印迹杂交用于检测植物细胞中特异mRNA的生成。将提取的植物总RNA或mRNA用变性凝胶电泳分离，不同的RNA分子将按分子质量大小依次排布在凝胶上；将它们原位转移到固定膜上；在适宜的离子强度及温度条件下，用探针与膜杂交；然后通过探针的标记性质检测出杂交体。若经杂交，样品无杂交带出现，表明外源基因已经整合到植物细胞染色体上，但在该取材部位及生理状态下该基因并未有效表达。 𐟌𘰟Œ𘰟Œ𘠗estern blotting是一种根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。基本原理：Western blotting将混合抗原样品在凝胶板上进行单向或双向电泳分离，然后取固定化基质膜与凝胶相贴。在印迹纸的自然吸附力、电场力或其它外力作用下，使凝胶中的单一抗原组份转移到印迹纸上，并且固相化。

𐟧짐𜨄‚糖凝胶电泳全攻略𐟒‰ 𐟔젥ꌥ𐏦Š€巧大揭秘！ 1️⃣ 琼脂糖凝胶浓度选择：1%的琼脂糖凝胶是常用选择哦！ 2️⃣ 电泳设置：电压电流可设为200，但具体数值需根据实际情况微调。 3️⃣ 跑胶时间：根据实验需求，如PCR鉴定通常13分钟左右，而胶回收则需20分钟。 4️⃣ 电泳方向：记住，是从负极向正极移动的哦！ 5️⃣ 电泳液更换：进行胶回收或RNA质量检查时，记得更换新电泳液。 𐟛᯸ 操作规范须知： 1️⃣ 安全第一！实验服、手套、口罩，一样都不能少！ 2️⃣ 保持环境清洁：电泳区域应与日常实验区分离，专用物品，避免交叉污染。 3️⃣ 电源安全：电泳仪电源要远离潮湿，确保安全。 4️⃣ 关闭电源再取胶：在从电泳液中取出跑好的胶之前，请务必先关闭电源。 5️⃣ 洗手消毒：实验结束后，记得好好洗手，保持清洁！ 𐟒ᠥ𐏨𔴥㫯𜚩𕥾꨿™些步骤，你的琼脂糖凝胶电泳实验将更加顺利！

琼脂糖凝胶电泳全攻略：科研必备技巧𐟓š 大家好！今天为大家带来一份详细的琼脂糖凝胶电泳实验指南𐟓–，满满的干货和技巧，赶紧收藏起来吧！ 𐟔 琼脂糖凝胶电泳准备在进行实验前，需要准备好以下物品：琼脂糖凝胶电泳缓冲液上样缓冲液 DNA样品上样针、梳子等工具 𐟔砧𜨄‚糖凝胶电泳的工作原理琼脂糖凝胶电泳是一种基于DNA片段大小进行分离的技术。通过在琼脂糖凝胶中施加电压，DNA片段会根据其大小在凝胶中移动，从而实现分离。 𐟓 琼脂糖凝胶电泳的方法和步骤制作琼脂糖凝胶：将琼脂糖与电泳缓冲液混合，加热溶解后倒入电泳槽中。上样：将DNA样品与上样缓冲液混合，使用上样针将混合物加入凝胶的加样孔中。电泳：打开电源，调整电压和时间，让DNA片段在凝胶中移动。染色与观察：将凝胶放入染色液中进行染色，然后在紫外灯下观察分离的DNA片段。 ⚠️ 注意事项实验过程中要佩戴手套和护目镜，确保安全。电泳时间和电压的调整需要根据DNA片段的大小和浓度进行优化。染色液的使用要适量，避免染色过深或过浅。希望这份指南能帮助大家更好地进行琼脂糖凝胶电泳实验，祝大家实验顺利！𐟎‰

琼脂糖凝胶电泳实验全流程详解琼脂糖凝胶电泳是一种常用的DNA分离技术，下面是详细的实验步骤和注意事项： 𐟓栥‡†备模具使用封边带封住塑料托盘的两边或玻璃板的边缘，形成一个模具，并将其放置在水平支架上。 𐟧꠩…制电泳缓冲液根据所需浓度（1X TAE 或 0.5X TBE），配制足够的电泳缓冲液，用于灌满电泳槽和配制凝胶。 𐟧젥ˆ𖥤‡琼脂糖溶液根据DNA片段的大小，使用电泳缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖溶液。准确称量琼脂糖干粉，加入到盛有定量电泳缓冲液的三角烧瓶或玻璃瓶中。 𐟔堥Š 热溶解用无尘纸塞住三角烧瓶颈部，或在玻璃瓶上松松地盖住。将容器放入沸水浴或微波炉中加热，直至琼脂糖完全溶解。 𐟌᯸ 冷却与混匀将加热的琼脂糖溶液转移到55℃水浴中，待其稍冷却后加入溴化乙锭，终浓度为0.5 /ml。轻轻旋转以充分混匀凝胶溶液。 𐟗️ 形成加样孔在琼脂糖溶液冷却时，使用合适的梳子在托盘底部形成加样孔，梳齿位置应在0.5~1.0 mm处。 𐟌€ 浇灌凝胶将温热的琼脂糖溶液倒入模具中。 𐟕’ 等待凝结让凝胶溶液在室温下完全凝结，大约需要30~45分钟。加少量电泳缓冲液于凝胶顶部，小心拔出梳子，并倒出电泳缓冲液。撕去封边胶带，将凝胶放入电泳槽内。 𐟔砥Š 入电泳缓冲液向电泳槽中加入电泳缓冲液，刚好没过凝胶约1 mm。 𐟧𔠥‡†备DNA样品混合DNA样品和0.2倍体积的6X载样缓冲液。使用微量移液器及一次性吸头、拉长的巴斯德吸管或玻璃毛细管将样品混合液缓慢加至浸没凝胶的加样孔内。分子质量标准应分别加至样品孔的左侧和右侧的两个孔内。 𐟔Œ 电泳关上电泳槽盖，接好电极插头。DNA应向阳极（红色插头）侧泳动。给予1~5 V/cm的电压，距离以阳极至阴极之间为准。阳极和阴极由于电解作用将产生气泡，几分钟内溴酚蓝从加样孔迁移进入胶体内。待溴酚蓝和二甲苯氰 FF 迁移到适当距离后再停止电泳。 𐟓𘠨炥𘎧…秛𘊥𝓄NA样品或染料在凝胶中迁移了足够距离时，关上电源、拔出电极插头和打开电泳槽盖。若凝胶和缓冲液有溴化乙锭，则用紫外灯观察凝胶并照相。否则，将凝胶在含溴化乙锭（0.5 /ml）的水或电泳缓冲液中室温浸染30~45分钟，或者用电泳缓冲液1:10000稀释的SYBR Gold贮备液浸染。 ⚠️ 注意事项在使用微波炉进行加热溶解的过程中要注意缓冲液蒸发导致胶浓度增高，这时可以加入适量缓冲液补齐浓度。

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