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培养基配制前沿信息_培养基配制记录(2024年12月实时热点)

内容来源：麦吉窗影视所属栏目：教程更新日期：2024-11-28

培养基配制

动物细胞培养全攻略：从基础到实践 𐟌𑠥Š觉駻†胞培养的基础步骤获取材料：从动物胚胎或幼龄动物的器官、组织中获取材料。剪碎处理：将材料剪碎，并用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理，形成单个细胞。培养基配制：将处理后的细胞移入培养基中，配成一定浓度的细胞悬浮液。细胞贴壁：悬浮液中的细胞会贴附在培养器皿壁上，形成细胞贴壁。接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到互相接触时，细胞会停止分裂增殖。传代培养：将出现接触抑制的细胞重新用胰蛋白酶处理，再配成新的细胞悬浮液。 𐟔젥Š觉駻†胞培养所需的器皿培养器皿：分为玻璃和塑料材质。玻璃材质易于清洗和重复使用，而塑料材质则价格便宜且一次性使用。常见的培养器皿有三种：培养瓶：用于培养及繁殖细胞，置于95%空气与5%CO2混合气体的培养箱中进行培养。培养皿：用于装取、分离、处理组织，以及进行细胞毒性、单细胞分离、同位素掺入实验。多孔培养板：用于各种检测实验，如细胞克隆及细胞毒性实验。不同颜色的多孔培养板有不同的用途。操作器皿：用于实验室中的操作，包括贮液瓶、吸管和加样器。贮液瓶：用于存放或配制培养用液体，如培养液、血清及试剂等。吸管：分为刻度吸管和无刻度吸管，前者用于吸取、转移液体，后者用于吸取、转移液体、吹打、混匀及传代细胞。移液器：又称加样器，用于吸取、移动液体或滴加样本。最好的是微量加样器，吸量准确、方便，可保证实验样品（或试剂）含量精确，重复性好。其他用品：包括离心管（收集细胞）、试管（放置试剂）、玻璃容器（存放吸管）、贮槽（存放小件培养物品）、冻存管（冻存细胞），各种注射器、烧杯、量筒、漏斗、酒精灯等。 𐟧ꠥŠ觉駻†胞培养的实践应用原代培养：从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。传代培养：当细胞从动植物中生长迁移出来，形成生长晕并增大后，将其分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。通过这些步骤和器皿的使用，可以进行有效的动物细胞培养，为科研和实验提供可靠的细胞来源。

2216E琼脂培养基制备全攻略 2216E琼脂培养基是一种专为海生细菌培养和计数设计的培养基。以下是详细的制备步骤和注意事项：培养基配方（固体）蛋白胨：5克酵母膏：1克磷酸高铁：0.01克琼脂：15-20克陈海水：1000毫升培养基配制步骤配料根据配方换算，在容器中加入少量水（蒸馏水或自来水）。按照配方称取各种药品，依次加入。加足所需水量（一药一勺，取药后立即盖上瓶盖）。溶解淀粉溶解：少量冷水调成糊状。加热溶解，特别是含有琼脂的培养基，一定要煮沸。琼脂的熔解温度为95-97℃，需要边加热边搅拌以防止烧焦。调pH 用煮沸的5%氢氧化钠溶液调节pH至7.6Ɒ.2，25℃。过滤用滤纸或棉花进行过滤（有时可以省去）。分装一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。三角瓶静置培养：100ml培养基/250ml的三角瓶，最多不能超过150ml。摇瓶培养：15-20ml培养基/250ml的三角瓶，保证通气良好。试管分装液体培养基一般装4-5ml，约试管的1/4高度。固体斜面培养基一般装3-4ml，约试管的1/5高度。包扎分装好后，塞上棉塞，再用牛皮纸将棉塞包裹好，防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。灭菌置高压蒸气灭菌器中，在121℃（约105kPa）下灭菌20min。如果灭菌的温度太高，营养成分会被破坏，培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。倒平板将冷至50℃培养基分别倒入经灭菌的各平皿中，每平皿约15mL，待其冷却凝固，置2-8℃冰箱内保存备用。注意事项该培养基无机盐成分较多，在高温高压灭菌后容易产生沉淀。为了更好的倒平板，灭菌前的溶解很关键，先加入水，边搅拌边缓慢加入干粉，不要让干粉成团。倒平板之前，应充分摇匀，尽量让沉淀分散开来，避免聚集在一起影响计数。通过以上步骤，您就可以成功制备2216E琼脂培养基，为海生细菌的培养和计数提供良好的环境。

细胞培养污染常见问题及解决方案在细胞培养过程中，污染是一个常见且令人头疼的问题。为了避免这些“雷区”，确保实验的顺利进行，我们总结了一些常见的污染源和解决方案。以下是一些需要注意的关键点： ❀ 雷区一：解冻操作不当忽视无菌操作，导致细胞污染㗊在进行细胞解冻时，冻存管的盖子下边缘应位于水浴锅页面上方，避免其接触水面。此外，定期清洁水浴锅，并使用无菌水。推荐使用专用的支原体祛除试剂，如Water Shield，来确保水浴锅的无菌环境。 ❀ 雷区二：培养基配制不当忽视无菌操作，导致培养基被污染㗊在整个细胞培养过程中，都应注意无菌操作。在配制培养基后，建议先抽取少许放入培养瓶或培养皿内，在37℃培养箱内放置24~48小时，检测培养液是否有污染。选择高品质的胎牛血清也非常重要，如Ausbian进口特级胎牛血清，内毒素含量≤3EU/ml，各项微生物均为未检出，既保证了实验安全，又可以在一定程度上确保实验结果的稳定。 ❀ 雷区三：实验室卫生维护不足实验垃圾不及时清理，实验环境不及时清洁㗊实验室的清洁和维护对于防止污染至关重要。定期清洁超净台操作台面、细胞实验室台面、培养箱、冰箱、水浴锅、离心机、显微镜等实验设备及仪器。使用专用的支原体祛除喷雾剂，如Mycoplasma-off，可以在几分钟内迅速杀除支原体、真菌、细菌等微生物。通过注意这些细节，可以有效避免细胞培养过程中的污染问题，确保实验的顺利进行。

细胞培养那些事儿：心累到想哭的时刻细胞培养这事儿，真的是让人又爱又恨。你永远不知道下一秒会遇到什么问题：细胞不长了、不贴壁了、悬浮细胞成簇……简直是让人操碎了心。培养细胞不贴壁 𐟘“ 可能原因：胰蛋白酶消化过度：这个锅你得背，消化时间太长或者浓度太高都会让细胞受不了。支原体污染：这个可是个大问题，得赶紧分离培养物，检测支原体，清洁支架或者培养箱。如果发现支原体，果断丢弃培养物。培养基pH值过碱：NaHCO3分解了？用无菌醋酸溶液调整pH值，或者充入无菌CO2。细胞老化：细胞也有寿命，用新的保种细胞试试吧。接种细胞起始浓度太低或太高：调整一下浓度，找到最佳接种点。解决方法：缩短胰蛋白酶消化时间或降低浓度。分离培养物，检测支原体，清洁支架或培养箱。用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2。启用新的保种细胞。调节最佳接种细胞浓度。悬浮细胞成簇 𐟘– 可能原因：培养液中含钙、镁离子：用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻巧吹吸。支原体污染：分离培养物，检测支原体。蛋白酶过度消化：这个得小心，蛋白酶过度会让细胞裂解。 DNA污染：用DNasel处理细胞。培养细胞生长缓慢 𐟘䊥糖𝥎Ÿ因：更换不同培养液或血清：比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验，让细胞逐渐适应新培养液。培养液中一些细胞生长必须成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏：换入新鲜配置培养液，或补加谷氨酰胺及生长因子。培养物中有少量细菌或真菌污染：用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物。试剂保存不当：血清需保存在-10到-20℃，培养液需在2-8℃避光保存。含血清完全培养液在2-8℃保存，需在1周内用完。接种细胞起始浓度太低：增加接种细胞起始浓度。细胞已老化：换用新的保种细胞。支原体污染：分离培养物，检测支原体，清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。培养细胞生长不好 𐟘ž 可能原因：细胞本身的状态：传代次数多，细胞老化；接种量过低，细胞生长缓慢；传代时间过晚，细胞中毒；胰酶消化时间过长或过短；细胞的冻存与复苏：慢冻速溶。污染：支原体污染、霉菌污染。培养基或血清：更换血清或培养基之前未进行验证；选择的培养基是否合适；培养基配制是否合适；培养基配制是否准确无误。细胞培养真的是一场耐力赛，每一步都得小心翼翼。希望这些小贴士能帮到你，让你的实验顺利一点，心累少一点。加油！𐟒ꀀ

6月8-9日微生物检验员培训全攻略 𐟎“ 培训对象我们的培训课程旨在为企业主管、食品质量与安全标准监督管理工作岗位的人员，以及食品生产企业、经销单位、质量监督部门、卫生检验部门的相关管理人员和技术人员提供专业培训。 𐟓š 培训内容我们的课程内容丰富，涵盖多个方面：检验基础知识：包括化学基础、实验室安全知识、常用仪器介绍等。实操技能：涉及大肠杆菌、菌落总数、霉菌、酵母菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、溶血性链球菌、绿脓杆菌等菌种的实操视频。基础操作：包括培养基配制、灭菌、无菌操作、培养基接种、平板划线分离、菌种保藏、显微镜使用、革兰氏染色观察、生化反应试验等。国家标准：涵盖GB 4789系列标准，如GB4789.1-2016食品微生物学检验总则、GB4789.2-2016菌落总数测定等。快速检测方法：介绍显色培养基等快速检测方法的使用和操作。 𐟏… 微生物检验员证书考核合格后，学员将获得全国通用的微生物检验员证书，这是微生物检验人员职业技能水平的资格凭证。 𐟔 证书适用范围化妆品行业：用于监管部门检查、申报产品、申请GMP。医疗器械行业：无菌检验、申请GMP、监管部门检查。食品化学微生物实验室：食品微生物实验室、化学微生物实验室、污水微生物实验室。中药行业：中药行业的相关检验需求。 𐟒𐠥Ÿ𙨮�𙧔芨𔹧”襌…含培训费、资料费和证书费，是取得证书的所有费用，中间不再收取任何费用。我们期待通过这次培训，帮助学员们提升专业技能，更好地服务于各自的行业和领域。

如何配制和灭菌培养基：详细步骤指南 𐟧슥Ÿ𙥅𛥟𚧚„配制和灭菌是微生物实验中至关重要的步骤。以下是详细的操作方法：配制溶液 𐟧ꊩ斥…ˆ，向容器中加入所需的水量。根据培养基的配方，称取各种原料，依次加入并使其溶解。对于蛋白胨、肉膏等物质，需要加热溶解。蒸发的水分在全部溶解后用水补足。对于固体培养基，先将已配好的液体培养基煮沸，然后加入称好的琼脂，继续加热至融化，并搅拌以防糊底烧焦。调节pH 𐟌᯸ 使用pH试纸（或pH计、比色计）测试pH值。如果pH不符合要求，可以用10%的HCl或10%的NaOH调节至配方所需的pH值。过滤 𐟧𝊨𖁧ƒ�覻䧺𘣀纱布或棉花过滤已配好的培养基。用纱布过滤时，折叠成六层；用滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。分装 𐟓报𗲨🇦𛤧š„培养基需要进行分装。制作斜面培养基时，分装于试管中；若制作平板培养基或液体、半固体培养基，则分装于锥形瓶内。分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一手握几支试管或锥形瓶，依次接取。分装时，不要让培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。装入试管的培养基量视试管和锥形瓶的大小及需要而定。斜面培养基每只15㗱50mm试管约装3-4mL（1/4-1/3高度），深层培养基每只20x220mm的试管约装12-15mL；锥形瓶装入1/2容积。加棉塞 𐟧銥ˆ†装完毕后，用棉塞堵住管口或瓶口，以过滤空气，避免污染。棉塞用新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时，将棉花铺展适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握形成1个长棒形的棉塞。棉塞作成塞入管口或瓶口紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。塞好以手提棉塞，管、瓶不下落为宜。棉塞2/3应在管内或瓶内，上端少露。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。制作斜面和平板培养基 𐟧갟穊培养基灭菌后，在未凝固时制作斜面和平板培养基。制作斜面：在实验台上放1支长0.5-1m、厚1cm左右的木条，将试管头部枕在木条上，使培养基自然倾斜，凝固成斜面培养基。制作平板：将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，将培养基倒入培养皿中，每皿约10mL铺满皿底后放置15分钟左右，待凝固将5个培养皿一叠，倒置，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。通过以上步骤，你就能成功配制和灭菌培养基，为微生物实验打下基础。

植物组培实验室必备设备清单 𐟌𑊦䍧‰駻„培实验室需要一些关键设备来支持各种实验操作。以下是一些必不可少的设备：培养容器 𐟌𑊨𜚧”褺Ž茎尖、花药、幼胚的培养。推荐规格为20mm*150mm、25mm*150mm、0mm*200mm。三角瓶：适用于各种培养，容积从50毫升到300毫升不等。小瓶口大底，培养面积大，透光性好。果酱瓶或罐头瓶：用于大量繁殖组培苗，成本低，操作方便，但培养基容易失水，污染率较高。培养皿：用于无菌材料的分离、发芽、单细胞固体平板培养等，规格有60mm、90mm和120mm。兰花瓶：主要用于兰科花卉的继代培养。塑料容器：轻便耐用，适合各种培养需求。封口材料：用于防止培养基干燥和污染杂菌，可用牛皮纸、硫酸纸、耐高温聚丙烯塑料等。玻璃器皿 𐟏𚊨‰‚瓶：用于存放各种试剂和母液，有广口和细口之分，棕色瓶用于见光易分解的药品。烧杯：用于配置各种母液和培养基。量筒：用于测量各种溶液及培养基的配制。容量瓶：用于配制各种溶液时定容。移液管（吸管）：用于吸取各种母液和植物生长调节剂，有条件的可用微量可调移液器。接种器械 𐟔ꊩ•Š子：有直镊和枪镊之分，接种和转移材料常用枪镊，规格有16cm、20cm、23cm、26cm、30cm。剪刀：有直剪和弯剪之分，用于剪取植物材料、茎段，进行继代培养的转接。解剖刀：用于切割植物材料。其他工具：包括接种针、接种铲等，用来接种花药或转移植物组织。这些设备是植物组培实验室的基础设施，确保实验的顺利进行。

实验室培养基质量控制指南 𐟧ꊥꌥŸ𙥅𛥟𚧚„质量控制是确保实验结果准确性的关键。以下是按照ISO/TS 11133-1:2009《实验室培养基制备质量保证通则》和GB 4789.28-2013《培养基和试剂的质量要求》进行的质量控制要点。培养基质量控制项目与方法 𐟔슦„Ÿ官检查：检查培养基的外观、研细程度、颜色（溶解前后）、透明度和杂质等。 pH测定：培养基的pH值应符合要求，蒸馏水的pH应在6.4-7.0之间。生物学指标检定：测试培养基的细菌生长率、菌落大小及特征。生长率测试：适用于液体和固体培养基。将菌培养液用生理盐水做倍比稀释，取合适稀释度进行平板计数或接种被检的培养基试管，同时以按相关的培养基国标配方新鲜配制的培养基进行对照，生长率不低于10%。菌落大小测试：划线分离测试菌，取10个菌落测量直径大小，其直径均值与新鲜配制的培养基无统计学差异。培养基质量标准 𐟓 外观和理化标准：干粉颜色：淡黄色粉末或呈现本培养基特有的颜色。溶解后培养基色泽：清晰透明（含琼脂除外）淡黄色或特有的色泽。灭菌后的培养基pH：7.2Ⱳ℃为多；个别弧菌检验用培养基pH值偏高为8.0Ⱳ℃。生物学指标：菌落特征及菌落大小。培养基保存环境 𐟌᯸ 制成的培养基保存环境为4℃冰箱，如制成平板则用塑料袋包装置冰箱保存。干燥培养基干粉含有活性物质、遇热易分解的物质应仔细查看存放条件，多数也须放在2-8℃条件保存。有的培养基则以存放于10-15℃条件为易，如含有高浓度胆盐的培养基。培养基制备控制程序 𐟧𜊥Ÿ𙥅𛥟𚩅制所用的仪器设备须经过相应的鉴定。配制培养基所用的用具及容器须是清洁或灭菌的。一些特殊不易洗刷清洁的玻璃器皿，必要时可用重铬酸钾硫酸清洁浸泡后，取出置5%氢氧化钠溶液浸泡数分钟，再用3%盐酸溶液进行中和，然后用清水冲洗，烘干后备用。培养基配制原料和试剂的质量控制 𐟧ꊩ…制好的培养基（尤其是糖发酵管）不宜久放，因为培养基吸收空气中的二氧化碳，会使培养基变酸，从而影响细菌生长。培养基中的抑制剂及指示剂一定要精确称量，抑制剂要注意合理配伍。主要原料的质量控制 𐟥銩…制培养基的主要原料有蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏、胆盐、无机盐和琼脂等，这些主要原料的优劣，直接影响到培养基的质量，由此也将影响检验质量。指标包括感官、理化、物理和生物学。通过以上措施，可以有效控制实验室培养基的质量，确保实验结果的准确性和可靠性。

植物组培室设备与设施全攻略在现代化的组培工厂中，每天都有数万株组培苗从组培瓶中出瓶，进入自然气候环境进行过渡培养。这个过程对组培苗的成活率有着至关重要的影响，因为自然环境中的温度、光照和湿度等因子会随着昼夜变化而产生大幅度的波动。为了确保组培苗的成活率，组培室的设备配置和设施建设显得尤为重要。化学实验室 𐟧ꊥŒ–学实验室主要用于组培过程中的洗涤、干燥、保存，以及培养基的配制和分装。这里需要进行高压灭菌，处理大型植物材料，并进行生理和生化分析。实验室的要求与一般的化学实验室相同，需要保持整洁和无菌。接种室（无菌室） 𐟚犦Ž姧室是进行无菌接种的地方，室内要求光滑平整，地面无缝，以避免灰尘积累。定期用甲醛或高锰酸钾进行薰蒸消毒灭菌，或者用紫外线灯照射20分钟以上。培养室 𐟌𑊥Ÿ𙥅𛥮䩜€要保持整洁，配备控温、照明设备及培养架等装置。室内温度要求恒定在25～27℃，或者根据所培养的植物进行调整。光源选择白色荧光灯为佳。其他设施 𐟏튦œ‰条件的情况下，可以设立细胞实验室和摄影室，以进行更深入的研究和记录。仪器设备 𐟔슥䩥𙳯𜚧𒾧ᮥ𚦤𘺰.1克的药物天平，以及精确度为0.001克和0.0001克的分析天平，用于称取培养基中的各种药品。烘箱和恒温箱：用于烘干玻璃器具及测定培养物的干重量。冰箱：用于贮藏各种维生素、激素及培养基母液，保存实验材料及进行低温处理。酸度测定仪：用于测定培养基的pH。高压灭菌锅：用于培养基和玻璃器皿等用具的高压灭菌。其他设备：还应配备显微镜、显微摄影、离心机以及悬浮培养用的转床、摇床等。玻璃器皿和用具 𐟧𔊥𘸧”觚„玻璃器皿包括各种类型的试管、三角瓶、培养皿、量筒和烧杯等。常用器具可选用医疗器械或微生物实验所用的各种镊子、剪刀、解剖刀和解剖针等。通过这些设施和设备的合理配置，可以有效提高组培苗的过渡成活率，进而提升组培工厂的工作效率和经济效益。

微生物实验室功能分区详解（上） 𐟏 准备室准备室是用于配制培养基和样品处理的区域。室内应配备试剂柜、存放器具或材料的专柜、实验台、电炉、冰箱以及上下水道和电源等设施。 𐟧𜠦𔗦𖤥洗涤室主要用于清洗器皿。由于使用过的器皿可能被微生物污染，甚至可能存在病原微生物，因此建议在条件允许的情况下设置洗涤室。室内应备有加热器、蒸锅，以及洗刷器皿用的盆、桶等，还应有各种瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。 𐟔堧�Œ室灭菌室主要用于培养基和各种器具的灭菌。室内应备有高压蒸汽灭菌器、烘箱等灭菌设备及设施。 𐟚🠦— 菌室无菌室是微生物实验室内专辟的独立小房间，一般为4 - 5 ㎡、高2.5米，用于系统接种、纯化菌种等无菌操作。无菌室也称接种室，是保证菌种纯种、防止杂菌污染的重要区域。 𐟔젦— 菌室的设置无菌室应根据既经济又科学的原则来设置，基本要求如下：内、外两间：内间是无菌室，外间是缓冲室。房间容积不宜过大，以便于空气灭菌。最小内间面积2㗲.5＝5㎡，外间面积1㗲＝2㎡，高以2.5m以下为宜，都应有天花板。拉门设计：内间应当设拉门，以减少空气的波动，门应设在离工作台最远的位置上；外间的门最好也用拉门，要设在距内间最远的位置上。小窗设计：在分隔内间与外间的墙壁或“隔扇”上，应开一个小窗，作接种过程中必要的内外传递物品的通道，以减少人员进出内间的次数，降低污染程度。小窗宽60cm、高40cm、厚30cm，内外都挂对拉的窗扇。通气窗：无菌室容积小而严密，使用一段时间后，室内温度很高，故应设置通气窗。通气窗应设在内室进门处的顶棚上（即离工作台最远的位置），最好为双层结构，外层为百叶窗，内层可用抽板式窗扇。通气窗可在内室使用后、灭菌前开启，以流通空气。有条件可安装恒温恒湿机。通过这些设置，可以确保无菌室的洁净度和安全性，从而保证微生物实验的准确性。

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